防止限制性内切核酸酶消化连接反应过程中产生重组体
限制性内切核酸酶的作用是在限制位点切割质粒分子自连接产生的环状和线性多联体。该方法需要质粒与靶DNA分子的连接破坏限制性酶切位点，以防止限制性内切核酸酶消化连接反应过程中产生的重组体。单位长度线性载体分子持续再生的净效应，推动连接反应的平衡状态强烈偏向于载体和插入物之间形成重组体。因为载体DNA的再生、连接、所有PCR产生的DNA片段的末端补平都同时发生在同一反应混合物中，该方法非常高效。14 DNA理按酶3U调整H2O的加入量，使最终的反应体积为20μL°设置对照反应，包含.上述列出的所有试剂，除了扩增的靶DNA。2.在22'C孵育连接混合物4h。限制性内切核酸酶切割质粒DNA:在dNTP的存在下，T4 DNA聚合酶的3外切核酸酶活性补平扩增的DNA的末端。3.分别用10μL@ H2O稀释5μL°两种连接混合物，转化合适的抗生素抗性的感受态大肠杆菌菌株(见信息栏“抗生素”)。根据载体和宿主基因型、IPTG 和X-Gal......阅读全文
防止限制性内切核酸酶消化连接反应过程中产生重组体
限制性内切核酸酶的作用是在限制位点切割质粒分子自连接产生的环状和线性多联体。该方法需要质粒与靶DNA分子的连接破坏限制性酶切位点，以防止限制性内切核酸酶消化连接反应过程中产生的重组体。单位长度线性载体分子持续再生的净效应，推动连接反应的平衡状态强烈偏向于载体和插入物之间形成重组体。因为载体DNA的再
PCR产物的平末端克隆
实验方法原理 靶基因经 PCR 扩增，样品进行必要的纯化回收后，接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuan
PCR产物的平末端克隆
常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。Liu 与 Schwartz (1992) 发现在连接反应的温育过程中，当反应液中存在过量的限制性内切核酸酶能显著地增加重组质粒的产率
PCR产物的平末端克隆
靶基因经 PCR 扩增，样品进行必要的纯化回收后，接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译
在质粒载体中进行平末端片段的克隆实验
克隆平末端的目的片段时，为最大量地获得“正确”的连接产物，载体和目的 DNA 在连接反应中的比例必须适当。每一重组体中外源 DNA 的连接方向和插入数量都必须用限制酶酶切图谱分析或其他方法加以鉴定。作为一般规律，如果连接反应中质粒和目的 DNA 摩尔数相等，而且 DNA 的总浓度少于 100 μg/
在质粒载体中进行平末端片段的克隆实验
实验方法原理 克隆平末端的目的片段时，为最大量地获得“正确”的连接产物，载体和目的 DNA 在连接反应中的比例必须适当。每一重组体中外源 DNA 的连接方向和插入数量都必须用限制酶酶切图谱分析或其他方法加以鉴定。作为一般规律，如果连接反应中质粒和目的 DNA 摩尔数相等，而且 DNA 的
在质粒载体中进行平末端片段的克隆实验
在质粒载体中进行平末端片段的克隆实验 实验方法原理 克隆平末端的目的片段时，为最大量地获得“正确”的连接产物，载体和目的 DNA 在连接反应中的比例必须适当。
Mol－Cell:－发育过程中染色体的结构重组
细胞核内遗传物质的空间排列在生物体的发育中起重要作用。近日，巴塞尔大学的一个研究小组与哈佛大学的科学家合作，开发了一种追踪单个细胞中染色体的方法。使用这种方法，作者能够证明染色体在胚胎发育过程中重组的现象。该研究最近发表在《molecular cell》杂志上。 我们的身体由功能最多样化的各种
重组体配子
中文名称重组体配子英文名称recombinant gamete定 义遗传物质发生重组后形成的配子。应用学科遗传学（一级学科），细胞遗传学（二级学科）
如何防止超纯水设备产生细菌
1、次氯酸钠添加量应根据水源中细菌数进行相应调整,除了定期对细菌数进行检测外,还应对混合离子交换柱入口游离氯进行检测,以免游离氯超标,影响树脂的正常运行。2、注意用水点旋塞的污染,使用频率较小的旋塞容易成为微生物污染的对象,一旦污染,若不长时间放水冲洗,无法恢复原状态。3、市售次氯酸钠溶液容易氧化分
应用－PCR－的遗传工程
实验方法原理 本方案（由德克萨斯大学西南医学中心的 Andereson 提供）叙述在克隆化的哺乳动物 cDNA 的 5' 与 3' 端同时导入限制性内切核酸酶酶切位点，有时在此 cDNA 5' 末端，改变部分密码子为大
应用－PCR－的遗传工程
实验方法原理 本方案（由德克萨斯大学西南医学中心的 Andereson 提供）叙述在克隆化的哺乳动物 cDNA 的 5' 与 3' 端同时导入限制性内切核酸酶酶切位点，有时在此 cDNA 5' 末端，改变部分密码子为大肠杆菌的偏爱密码子等。实验材料 限制性内切核酸酶热稳定 D
应用－PCR－的遗传工程
本方案（由德克萨斯大学西南医学中心的 Andereson 提供）叙述在克隆化的哺乳动物 cDNA 的 5' 与 3' 端同时导入限制性内切核酸酶酶切位点，有时在此 cDNA 5' 末端，改变部分密码子为大肠杆菌的偏爱密码子等。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实
重组体的定义
重组体是指两种（或两种以上）不同来源的DNA片段，经DNA连接酶处理拼接而构成的重新组合的DNA。
在质粒载体中进行定向克隆实验
在质粒载体中进行定向克隆实验 实验方法原理 大多数常用质粒都含有可被不同内切酶识别的多克隆位点。由于可供选择的克隆位点很多 [ 如 Invitrogen 公司
在质粒载体中进行定向克隆实验
实验方法原理 大多数常用质粒都含有可被不同内切酶识别的多克隆位点。由于可供选择的克隆位点很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 质粒的克隆位点有 46 个之多，而且还可以设计含有更多克隆位点的多聚接头（Brosius 1992 ) ]，因此一般来说总是能够找到一个带有与某一
在质粒载体中进行定向克隆实验
大多数常用质粒都含有可被不同内切酶识别的多克隆位点。由于可供选择的克隆位点很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 质粒的克隆位点有 46 个之多，而且还可以设计含有更多克隆位点的多聚接头（Brosius 1992 ) ]，因此一般来说总是能够找到一个带有与某一特定外源 DNA 片段
DNA重组技术
连接反应的策略 可以采用几种策略来进行外源ＤＮＡ片段和质粒载体的连接。对此，可依据外源ＤＮＡ片段未的性质，以及质粒载体与外源ＤＮＡ上限制酸切位点的性质来作出选择。（一）外源ＤＮＡ片段未的性质带有各种未的外源ＤＮＡ的克隆方法见下表：────────────────────────────────
应用PCR遗传工程实验方法
应用PCR遗传工程实验方法1. 设计与合成预期的末端修改的寡核苷酸引物。例如，根据 cDNA 模板设计的 5'引物为 5' dATCATATGGCTCTG GATGAACT- GTGCCTGCTGGACATGCT3'，3' 引物为 5' dATAAGCTTTT
cDNA－文库的构建（四）
方法cDNA 末端的削平1.cDNA样品（来自步骤 11)于 68°C 加热5 min。这一步骤是使cDNA分子的单链突出端可能形成的双链结构发生变性。2. 将cDNA溶液冷却至37°C并加入下列试剂：5xT4噬菌体DNA聚合酶修复缓冲液
PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点
实验方法原理实验材料噬菌体 T4 DNA 连接酶限制性内切核酸酶靶 DNA试剂、试剂盒氯仿EDTA乙醇酚氯仿乙酸钠TE仪器、耗材琼脂糖凝胶水浴箱实验步骤一、材料1. 缓冲液与溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L, pH 8.0)乙醇酚：氯仿（1:1，V/V)乙酸钠（3 mol/L, pH 5.2
通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶...
通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点实验方法原理 实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶限制性内切核酸酶靶 DNA试剂、试剂盒 氯仿EDTA乙醇酚氯仿乙酸钠TE仪器、耗材 琼脂糖凝胶水浴箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L, pH 8.
PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点
实验方法原理 实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶 限制性内切核酸酶 靶 DNA
高容量载体中基因组DNA片段末端的分离(小载体PCR)
许多真核生物的基因所包含的 DNA，远非单个重组子所能容纳得了的。对于大多数染色体来说，更是如此。因此，必须构建一套重叠的 DNA 克隆，这些克隆的 DNA 按次序排列能形成叠连序列（叠连群），可以涵盖一个很大的基因或目的区域。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理许多真核生物
质粒DNA的去磷酸化实验
去除 5' 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中，DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的 5' 端带有磷酸基另一分子的 3' 端带有羟基时，这一反应才能完成。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理
琼脂糖凝胶栓中DNA的限制性内切核酸酶消化
实验方法原理 从哺乳动物细胞、酵母或细菌分离的染色体 DNA 在琼脂糖栓中可用所需的内切酶消化。低熔点琼脂糖栓的孔足以使内切酶进入，与作为底物的基因组 DNA 相作用。消化后，经 PFGE 分离，然后回收或做 Southern 印迹分析。实验材料 限制酶基因组 DNA试剂、试剂盒 限制酶缓冲液TE仪
琼脂糖凝胶栓中DNA的限制性内切核酸酶消化
实验方法原理 从哺乳动物细胞、酵母或细菌分离的染色体 DNA 在琼脂糖栓中可用所需的内切酶消化。低熔点琼脂糖栓的孔足以使内切酶进入，与作为底物的基因组 DNA 相作用。消化后，经 PFGE 分离，然后回收或做 Southern 印迹分析。
琼脂糖凝胶栓中DNA的限制性内切核酸酶消化
从哺乳动物细胞、酵母或细菌分离的染色体 DNA 在琼脂糖栓中可用所需的内切酶消化。低熔点琼脂糖栓的孔足以使内切酶进入，与作为底物的基因组 DNA 相作用。消化后，经 PFGE 分离，然后回收或做 Southern 印迹分析。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理从哺乳动物细胞、
琼脂糖凝胶栓中DNA的限制性内切核酸酶消化
一、材料1. 缓冲液和溶液1X 限制酶缓冲液TE ( pH 7.6)2. 酶和缓冲液限制酶3. 凝胶脉冲场电泳用的凝胶4. 核酸和寡核苷酸包埋在低熔点琼脂糖栓中的基因组 DNA5. 专用设备设定在酶切最佳温度的水浴二、方法1. 如果凝胶栓未在 TE 中存放（如通过邮寄收到的凝胶栓或一直存放在 0.5
DNA重组技术－连接
实验概要 体外连接获得重组分子，用于转化受体细胞。实验原理 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(＜10kb)且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆，从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段， 然后体外使