PCR实验室SOP文件（二）
PCR实验室设置及管理1. 目的：根据卫生部卫医发[2002]10号文件关于临床基因扩增检验实验室管理暂行办法及临床基因扩增检验实验室基本设置标准精神，确保PCR扩增质量和检验结果的准确性，防止实验污染、减少检验医学差错与医疗事故的发生为目的，特制订本程序。2. 范围；实验室的设置、设备、工作流程及内务管理等。3. 职责：3.1临床PCR检验实验室工作人员共同遵守、相互监督。3.2 因科研需要，进入实验区域（试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区）的非本室人员需首先熟悉本程序的各项规定并严格执行。4. 程序：4.1 临床基因扩增实验室是检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关实验工作。4.2 本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分为试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区共三个区，实验室布局见基因扩增实验室设置平面图。4.3 各工作区有专用的仪器设备、办公用品......阅读全文
建立PCR实验室的基本条件（二）
（二）软件建设--质量手册编写与实施、人才资源（上岗证培训与相关知识学习） 临床基因扩增检验实验室的质量手册编写质量手册是阐明临床基因扩增检验实验室的质量方针，并描述过其质量体系的文件。质量手册规定了质量体系的基本结构，是实施和保持质量体系应长期遵循的文件。临床基因扩增检验实验室质量手册编写
PCR实验室最容易忽视的环节（二）
3.滤芯吸头测试吸头需使用经校准的移液器（1）准确性：将n个吸头分别吸取定量的纯水称重，重量与体积的关系按照1 g/mL换算。（2）气密性：取n个吸头，吸取最大量程的含有1％甘油的墨水，观察有色液体不出现在滤塞之上，液面相同为合格。（3）防气溶胶性能：取n个吸头，吸取阳性核酸，反复吹吸10次，换另一
PCR实验操作注意事项有哪些
1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室。2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证。4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;PCR实
PCR实验室的条件
1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室;实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。本文试就其定量原理、方法及参照
聚焦LDT丨如何规范化实验室自建检测方法
尽管国内法规层面仍无对LDT的准确定义、范围界定及管理规定，但已小范围展开了试点。早在 2013 年 9 月，原国家卫生计生委医政管理局就批准成立“国家卫生计生委个体化医学检测试点单位”（也称为“LDT 试点单位”），首批试点单位包括中国医科大学第一附属医院、中南大学湘雅医学检验所、北京博奥医学检验
实验室的文件怎么整理才规整？
实验室的各类档案文件，一般都有几十到上百种，整理起来可谓千头万绪，那么如何将这些档案文件，分类、整理、保存，做到条理清楚呢？本文按照ISO17025的条款来将这些文件归类归纳，在实际工作中大家也可以结合自己实验室的实际情况，按照这种方法来管理实验室的文件。本文罗列的条款并不一定适合每个实验室，大家根
实验室编制体系文件应注意什么？
体系文件在编写过程中应注意以下三个问题：（1）体系文件的先进性和经济性。认可准则提出的要求是对实验室能力的通用要求。有的基础薄弱的实验室，在按照认可准则的要求编写体系文件时，担心今后难以施行。为促进质量管理的科学性、先进性。实验室应坚持认可准则的要求，严格对各项质量活动的控制。同时，考虑到管理成本，
SOP介绍（一）
WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）试用稿 适用于所有使用此仪器者1 流动相的处理1.1 过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择
血培养SOP
【标本要求】采集原则：培养瓶的消毒：加70％的异丙基乙醇到橡胶塞1分钟。无菌操作抽取静脉血，成人5～10ml，幼儿1～5ml，（血液与增菌之比1：5～1：10），采血后立即行无菌操作将血液接种于血液培养瓶内，混匀立即送检。转运：最好立即送检，否则保温35度2H内。采集次数：急性脓毒病，10min内从
尿常规SOP
（一）检测原理 通过肉眼观察判断尿外观。透明度，可分为清晰透明、轻度混浊（雾状）、混浊（云雾状）、明显混浊4个等级。 （二）方法学评价 尿色和透明度判断，受主观因素影响。尿透明度还易受某些盐类结晶的影响。临床应用仅作参考。 （三）质量控制 1.使用新鲜尿尿放置时间过长，盐类结晶析出、尿胆
PCR检测方法（二）
3.实验操作注意事项：尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：（1）戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套。（2）使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不
数字PCR应用（二）
4、能够有效区分浓度差异（变化）微小的样品：更好的准确度、精密度和重复性，可以用于精确测定靶基因的相对表达，基因拷贝数变异分析等。图4. qPCR和dPCR的对比 四．dPCR的多指标检测的实现 如同qPCR一样，dPCR中实现多指标的并行检测能显著降低检测成本，获取更丰富的检测信息。 不同于qPC
PCR实验技术（二）
【方法】方法一、基本的PCR方法下面介绍的基本PCR方法可作为任何PCR扩增的一般指导和出发点。由于各种PCR反应条件（如PCR扩增次数、温度、Taq DNA聚合酶的浓度、引物、氯化镁以及模板DNA）变异极大，应根据具体情况，对各种PCR反应条件进行相应调整。1．按以下次序，将各成分加入0.2 ml
PCR－Primer－Design（二）
Terminal Nucleotides Make a Difference Both the terminals of the primer are of vital importance for a successful amplification. The 3'-end
检验人眼中的核酸检测“金标准”到底定义了什么？
随着疫情的常态化，大家越来越熟悉新冠核酸检测。新冠核酸快速检测是新冠病毒检测“金标准”，可是对于检验人来说，这个金标准可不简单，众所周知PCR检测技术本来就属于高技术检测。再加上新冠核酸检测的特殊性，对标本的检测带来巨大困难，随之而来的就是各种假阳性、假阴性的结果。那么如何解决这些问题就成为检验人
直接PCR技术，让PCR更简单（二）
直接PCR（Direct PCR）是一种不经核酸提取而直接使用动物或植物组织等直接进行扩增的反应。在许多方面，直接PCR的工作方式类似于常规PCR。主要区别是直接PCR中使用的定制缓冲液，样本可不经过核酸抽提，直接进行PCR反应，但对于参与直接PCR反应的酶的耐受性和buffer的兼容性有相对应的要
PCR技术（二）：PCR反应模板的制备
PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等).除去抑制Taq DN
“标准实验室规范”的标准操作流程
国际上将GLP原则应用于药品、杀虫剂、化妆品、兽药以及食品、饲料添加剂和工业用化学品的毒理学安全性评价,决定产品能否进入市场或阐明安全使用条件,制定相关法律、法规、标准和条理,作为国家行政监督执法的依据。标准操作规程是GLP精神的具体贯彻,也是GLP的核心;SOP的建立可以尽可能地减少不同国家间、不
“标准实验室规范”的标准操作流程
国际上将GLP原则应用于药品、杀虫剂、化妆品、兽药以及食品、饲料添加剂和工业用化学品的毒理学安全性评价,决定产品能否进入市场或阐明安全使用条件,制定相关法律、法规、标准和条理,作为国家行政监督执法的依据。标准操作规程是GLP精神的具体贯彻,也是GLP的核心;SOP的建立可以尽可能地减少不同国家间、不
建立PCR实验室的基本条件
临床基因扩增实验室采用PCR技术用于临床基因诊断，由于PCR技术对所检测的核酸模板进行大量扩增，容易出现实验室污染导致临床检测标本假阳性结果；另外由于PCR技术要求高、影响因素多（特别是RNA标本），实验过程处理不当易导致核酸模板无扩增现象，导致临床标本假阴性结果。因此临床基因扩增检验实验室技术验收
TSQ质谱仪校正SOP
博客：TSQ质谱仪校正SOP
尿液常规检测SOP
（一）检测原理 通过肉眼观察判断尿外观。透明度，可分为清晰透明、轻度混浊（雾状）、混浊（云雾状）、明显混浊4个等级。 （二）方法学评价 尿色和透明度判断，受主观因素影响。尿透明度还易受某些盐类结晶的影响。临床应用仅作参考。 （三）质量控制 1.使用新鲜尿尿放置时间过长，盐类结晶析出、尿胆
尿液常规检测SOP
（一）检测原理 通过肉眼观察判断尿外观。透明度，可分为清晰透明、轻度混浊（雾状）、混浊（云雾状）、明显混浊4个等级。 （二）方法学评价 尿色和透明度判断，受主观因素影响。尿透明度还易受某些盐类结晶的影响。临床应用仅作参考。 （三）质
TruboMass用户操作SOP
上海交大测试中心，SOP：：本细则根据《有机质谱分析方法通则》（JY∕T 003－1996）和美国PerkinElmer公司AutoSystem GC/TurboMass MS气相色谱质谱仪操作说明书制定。 TruboMass用户操作SOP
尿液常规检测SOP
（一）检测原理 通过肉眼观察判断尿外观。透明度，可分为清晰透明、轻度混浊（雾状）、混浊（云雾状）、明显混浊4个等级。 （二）方法学评价 尿色和透明度判断，受主观因素影响。尿透明度还易受某些盐类结晶的影响。临床应用仅作参考。 （三）质量控制 1.使用新鲜尿尿放置时间过长，盐类结晶析出、尿胆
氮吹仪SOP
1 目的规范氮吹仪操作程序，严谨使用氮吹仪，保证检测工作的进行，操作人员的人身安全和设备安全。2 适用范围适用于氮吹仪工作的使用操作。3 职责3.1操作人员按照本规程使用氮吹仪。3.2保管人员负责监督使用操作是否符合规程，并定期维护测试。3.3科室负责人负责综合管理。4 操作方法4.1准备工作。操作
尿液常规检测SOP
（一）检测原理 通过肉眼观察判断尿外观。透明度，可分为清晰透明、轻度混浊（雾状）、混浊（云雾状）、明显混浊4个等级。 （二）方法学评价 尿色和透明度判断，受主观因素影响。尿透明度还易受某些盐类结晶的影响。临床应用仅作参考。 （三）质量控制 1.使用新鲜尿
精液常规检查SOP
1. 实验原理记录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化。显微镜检查包括精子计数、活动力、活动率、形态。2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：必须禁欲（包括遗精和手淫）3～7天。这是因为少于48小时采取的精液，因相距时间太短，精液中精子的数量可能偏少，容易造成少精症的假象。如果超过7天，精子活率
PCR污染的处理（二）
PCR污染及解决对策 PCR检测微量感染因子时，一定要注意产物残留污染的问题。 一． 污染的预防进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。（一）划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，
PCR注意事项（二）
3)如果没有回收到目的片段，还需要作什么对照实验？A）涂布未转化的感受态细胞。如有菌落，表明氨苄失效，或污染上带有氨苄抗型的质粒，或产生氨苄抗型的菌落。B）转化完整质粒，计算菌落生长数，测定转化效率。例如，将1ug/ul质粒1:100稀释,1ul用于100ul感受态细胞转化。用SOC稀释到1000u