N端加flag标签增加P21Cip1／WAF1蛋白质稳定性
【摘要】背景与目的: 已知细胞分裂周期抑制因子P21 通过蛋白酶体通路降解,其氨基端的泛素化可能参与了这一过程。Flag 为一蛋白标签,常用于标记重组蛋白质,以便对靶蛋白进行生物学功能分析。本文旨在研究N- 端加flag 对P21 蛋白质稳定性的影响。材料与方法: 建立稳定表达外源flag-p21 蛋白质的NIH3T3 细胞株,应用蛋白印迹法(WB) 检测NIH3T3 细胞表达的flag-p21 ,并比较其与内源P21 蛋白质半衰期的差异;确定阻断蛋白酶体水解通路对其降解过程的影响。结果: NIH3T3 细胞表达的内源P21 蛋白质半衰期约30 min , 而同一细胞表达的flag-p21 融合蛋白半衰期则明显延长; 用抑制剂MG-132 阻断蛋白酶体水解通路后, P21 蛋白质的量明显增加,但同一细胞内表达的flag-p21 量却无明显改变。结论: N- 端加flag 标签可增加P21 蛋白质的稳定性。在对P21 蛋白质的生物......阅读全文
蛋白酶体的降解过程
需要被蛋白酶体降解的蛋白质会先被连接上泛素作为标记，即蛋白质上的一个赖氨酸与泛素之间形成共价连接。这一过程是一个三酶级联反应，即需要有由三个酶催化的一系列反应的发生，整个过程被称为泛素化信号通路。在第一步反应中，泛素活化酶（又被称为E1）水解ATP并将一个泛素分子腺苷酸化。接着，泛素被转移到E1的活
解析泛素蛋白酶体系统：蛋白质降解的主要途径
泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system, UPS)是细胞内蛋白质降解的主要途径，参与细胞内80%以上蛋白质的降解。泛素对蛋白质来说无异于“死神来了”，一旦被盯上，终将被摧毁。 泛素-蛋白酶体系统降解蛋白的途径包括两个主要阶段。第一阶段
研究阐明类泛素蛋白NEDD8经蛋白酶体降解的分子机制
10月25日，国际学术期刊The Journal of Biological Chemistry发表了中科院上海生科院生物化学与细胞生物学研究所胡红雨课题组的研究论文NEDD8 Ultimate Buster-1 Long (NUB1L) Protein Promotes Transfe
Cell子刊：蛋白酶体的新调节机制
泛素-蛋白酶体系统的功能紊乱与多种疾病有关，包括严重的神经退行性疾病(如阿尔茨海默症和帕金森症)、特定类型的癌症和一些肌肉退化疾病。 蛋白酶体是一种大型蛋白复合体，负责通过降解蛋白，来维持细胞内的蛋白平衡。泛素是一个作为标签的小蛋白，带有泛素标签的蛋白会被蛋白酶体摧毁。如果这一系统无法有效
蛋白酶体的基本特征
蛋白酶体核心复合物约700，沉降系数为20S，由4个同轴的环组成，每个环由7个亚基组成，形成一种桶状结构．位于桶状结构外侧的两个环称为α环，由7个α亚基组成。桶状结构内侧的两个环为β环， 由7个β亚基组成, 其中β1、β2和β5具有苏氨酸蛋白酶活性位点，具体来说β，具有Caspase样肽酶活性，β2
概述蛋白酶体的基本特征
蛋白酶体核心复合物约700，沉降系数为20S，由4个同轴的环组成，每个环由7个亚基组成，形成一种桶状结构．位于桶状结构外侧的两个环称为α环，由7个α亚基组成。桶状结构内侧的两个环为β环， 由7个β亚基组成, 其中β1、β2和β5具有苏氨酸蛋白酶活性位点，具体来说β，具有Caspase样肽酶活性，
蛋白酶体的基本特征的介绍
蛋白酶体核心复合物约700，沉降系数为20S，由4个同轴的环组成，每个环由7个亚基组成，形成一种桶状结构．位于桶状结构外侧的两个环称为α环，由7个α亚基组成。桶状结构内侧的两个环为β环， 由7个β亚基组成, 其中β1、β2和β5具有苏氨酸蛋白酶活性位点，具体来说β，具有Caspase样肽酶活性，
蛋白酶体的基本特征
蛋白酶体核心复合物约700，沉降系数为20S，由4个同轴的环组成，每个环由7个亚基组成，形成一种桶状结构．位于桶状结构外侧的两个环称为α环，由7个α亚基组成。桶状结构内侧的两个环为β环， 由7个β亚基组成, 其中β1、β2和β5具有苏氨酸蛋白酶活性位点，具体来说β，具有Caspase样肽酶活性，β2
蛋白酶体的基本特征
蛋白酶体核心复合物约700，沉降系数为20S，由4个同轴的环组成，每个环由7个亚基组成，形成一种桶状结构．位于桶状结构外侧的两个环称为α环，由7个α亚基组成。桶状结构内侧的两个环为β环， 由7个β亚基组成, 其中β1、β2和β5具有苏氨酸蛋白酶活性位点，具体来说β，具有Caspase样肽酶活性，β2
蛋白酶体的基本特征
蛋白酶体核心复合物约700，沉降系数为20S，由4个同轴的环组成，每个环由7个亚基组成，形成一种桶状结构．位于桶状结构外侧的两个环称为α环，由7个α亚基组成。桶状结构内侧的两个环为β环， 由7个β亚基组成, 其中β1、β2和β5具有苏氨酸蛋白酶活性位点，具体来说β，具有Caspase样肽酶活性，β2
蛋白酶的基本特征
蛋白酶体核心复合物约700，沉降系数为20S，由4个同轴的环组成，每个环由7个亚基组成，形成一种桶状结构．位于桶状结构外侧的两个环称为α环，由7个α亚基组成。桶状结构内侧的两个环为β环， 由7个β亚基组成, 其中β1、β2和β5具有苏氨酸蛋白酶活性位点，具体来说β，具有Caspase样肽酶活性，β2
生化与细胞所等揭示一种新的蛋白质部分降解机制
国际学术期刊Developmental Cell于6月6日在线发表了中科院上海生科院生物化学与细胞生物学研究所赵允研究组、张雷研究组关于Ter94复合物选择K11连接形式泛素化修饰的Ci蛋白被蛋白酶体部分降解的最新研究成果。该工作与加拿大多伦多大学Chi-chung Hui教授合作
中加合作研究揭示蛋白质部分降解新机制
中科院上海生物化学与细胞生物学研究所赵允研究组、张雷研究组在与加拿大多伦多大学教授Chi-chung Hui进行合作研究的过程中，揭示了一种新的蛋白质部分降解机制。相关研究成果日前在线发表于学术期刊《发育细胞》。 据介绍，蛋白质的泛素化降解作为一个重要的调控机制参与了细胞内的
诺华、礼来青睐，这家蛋白降解疗法初创公司有何不同？
今日，Amphista Therapeutics公司宣布完成数额为5300万美元的B轮融资。本轮融资由Forbion和Gilde Healthcare公司领投，其它投资者包括诺华风投基金（Novartis Venture Fund）和礼来公司（Eli Lilly and Company）。获得的
活细胞蛋白质光遗传控制技术获重要进展
基因编辑、转录调控和RNA干扰是目前广泛应用的活细胞蛋白质操纵方法，可以用于研究特定蛋白在复杂生物过程中的功能。作为一种灵活而强大的基因组编辑工具，CRISPR-Cas系统近年来得到了广泛应用。然而，这些技术是在基因或mRNA水平对蛋白质进行控制，而mRNA转录生成和翻译均需要时间，使得这些方法在表
活细胞蛋白质光遗传控制技术获重要进展
近日，华东理工大学药学院教授杨弋团队在《自然—通讯》发表论文，描述了一种超高灵敏的光诱导蛋白质稳定标签，可用于调控活细胞蛋白质稳定性。 基因编辑、转录调控和RNA干扰是目前广泛应用的活细胞蛋白质操纵方法，可以用于研究特定蛋白在复杂生物过程中的功能。作为一种灵活而强大的基因组编辑工具，CRISP
泛素蛋白酶体途径
泛素(ubiquitin，UB)是一类含76个氨基酸、大小约为8.6 kDa的小蛋白质，在真核生物中普遍存在且高度保守。人类基因组中有四个基因编码泛素的基因： UBB ， UBC ， UBA52 和 RPS27A 。泛素氨基酸序列：MQIFVKTLTGKTITLEVEPSDTIENVKAKIQDKE
泛素依赖降解途径
大多数蛋白酶（包括溶酶体酶体系）降解底物时不需要三磷酸腺苷（ATP）提供能量，如胃蛋白酶、胰蛋白酶等。20世纪50年代初，Simpson在肝脏组织培养的切片中检测到了氨基酸的产生，揭示出细胞内大部分蛋白质的降解需要能量。真核生物如何识别和选择性降解蛋白质是细胞生命过程中的重要环节，对于维持蛋白质在细
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE 仪器、耗材 Eppendorf 试管 实
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材 Eppendorf 试管实验步骤 实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质：2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液（含有释放的 cDNA 标签）4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材Eppendorf 试管实验步骤实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质：2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液（含有释放的 cDNA 标签）4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体积的
一次性可生物降解的标签肥皂可清除卫生方面成本障碍
虽然洗手对公共卫生的好处众所周知，但在一些发展中国家，肥皂却经常是一种负担不起的奢侈品。 研究人员现在已经开发出一种一次性、可生物降解的肥皂片，在改善没有自来水的地区的公共卫生方面显示出巨大的希望。用肥皂洗手一直是预防许多传染病传播的简单而高效的方法。 虽然肥皂和水不能杀死细菌，但它们可以通过机械方
常见蛋白标签6xHis标签
6xHis标签，也称为多组氨酸标签（polyhistidine ），His6标签或hexa组氨酸标签，这是一种在转染的细胞中目标蛋白的C端或N端上由至少6个组氨酸残基链接上所组成的氨基酸序列，它的序列如下所示：相对小的分子量，低的免疫原性，亲水性和在去污剂和其他添加剂存在的情况下的易变性，因此在天然
生物可降解塑料降解机理与不同的降解环境下的降解能力
常见的生物可降解塑料与降解机理：参考文献：金琰，蔡凡凡，王立功等. 生物可降解塑料在不同环境条件下的降解研究进展. 生物工程学报， 2022, 38(5): 1784-1808.可降解塑料就是依靠存在于堆肥、淡水、海水、厌氧污泥和土壤中的各种细菌、真菌所分泌的各种酶，才被生物降解的。这些微生物和所分
蛋白酶体的分布情况
蛋白酶体广泛分布于细胞质和细胞核中，26s蛋白酶体是一种分子量为2000的多亚基复合物，约有50种蛋白质亚基组成。具有多种蛋白水解酶活性，并且具有泛素依赖性。
蛋白酶体的分布情况
蛋白酶体广泛分布于细胞质和细胞核中，26s蛋白酶体是一种分子量为2000的多亚基复合物，约有50种蛋白质亚基组成。具有多种蛋白水解酶活性，并且具有泛素依赖性。
防止细胞内错误的蛋白降解新技术
细胞中的蛋白酶体通过识别泛素标签来降解丧失功能的蛋白，以维持细胞稳态。错误的泛素标记会导致功能完整的蛋白被降解，从而诱发相关疾病，例如部分癌症和神经退行性疾病的发生归咎于这种原因。美国加州大学伯克利分校的研究团队开发出清除蛋白错误泛素化标记的新技术，相关成果在《Nature Chemical
免疫系统“刹车”分子调控新机制被发现
北京时间11月29日凌晨，国际顶尖学术期刊《自然》，在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室许琛琦研究团队的研究成果。该研究成果首次揭示了人体免疫系统“刹车”分子PD-1的降解机制，以及该机制在肿瘤免疫反应中的功能。 T细胞作为人体免疫系统的一部分，能清除体内突变
RNA降解
新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如 果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。 2. 新鲜组织：某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏，胸腺等)，即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮条件下将组织
蛋白酶体的结构和功能
蛋白酶体广泛分布于细胞质和细胞核中，26s蛋白酶体是一种分子量为2000的多亚基复合物，约有50种蛋白质亚基组成。具有多种蛋白水解酶活性，并且具有泛素依赖性。