怎么鉴别引物二聚体和产物
这个不好说:一般引物二聚体小于150BP.条带模糊、条带宽、跑的比较快在溴酚蓝前面.你可以跑胶过程总观察一下。如果不是可能为非特异性扩增。您片段要是比较短建议您克隆后测序效果比较好.......阅读全文
PCR基因扩增2
（4）引物的熔点温度（Tm值）要适当。Tm值与引物的碱基组成和长度有关；PCR引物的GC/AT应与要扩增的模板DNA相当或略高些。一般熔点温度以大于55℃为宜。（5）引物的3，末端必须与模板严格互补，而5，末端的要求可灵活些。（6）目前在引物选择中已广泛应用计算机软件，从EMBL或Genebank中
PCR技术
PCR常见问题总汇 PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模
PCR仪关于引物的问题及解决办法？
1. 应该选择哪种纯化方法? 取决于实验目的和引物的长度 2. 为什么我订购了50nmol,但是收到却只有40nmol? 50nmol是起始量 3. 怎样制备100μM的储液? 体积(μl)=质检报告上的nmol数目×10 4. 怎样设计引物? *一般长度20-30bp； *至少
PCR引物设计的11条黄金法则
PCR引物设计的11条黄金法则1.引物zui好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基
PCR引物设计，如何进行编辑
PCR引物设计的11条黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引
PCR引物设计的11条黄金法则
PCR引物设计的11条黄金法则 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之
PCR引物设计的11条黄金法则
实验概要设计PCR引物。实验步骤1. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2. 引物长度一般在15~30碱
探针引物和探针有什么区别
如果你做的事荧光定量PCR，其引物和一般引物在构成上是没有什么区别的，只是要更加注意引物二聚体、PCR产物大小等问题。染料法不需要其他东西，探针法还需要taqman探针，这个探针的设计是比较有讲究的，并且上面有荧光集团和猝灭基团。具体设计，一般使用相关软件进行。
核酸扩增引物设计的要求
1、避免重复碱基，尤其是G。 2、引物退火温度Tm控制在58～60℃。 3、G+C为30%～80%。 4、3'端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C。 5、正向引物与探针离得越近越好，但不能重叠。 6、扩增产物长度不能太大，一般在80～250 bp，80～150bp最为合适。
荧光探针的化学性质
荧光定量PCR所使用的荧光化学制剂可分为两种：荧光探针和荧光染料。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切
扩增曲线异常，请问原因
具体要看你做什么实验，模板和扩增的基因实怎样的。1、扩增曲线：一般来说如果你做双ΔCT法那么你的扩增曲线必须是S型，有明显的四个时期，且复孔的CT值尽量一致，相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。比如同一种CDN
pcr引物设计的基本原则有哪些
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到3’
PCR无扩增产物的原因及处理办法
原因： 1、模板:含有抑制物，含量低 2、Buffer对样品不合适 3、引物设计不当或者发生降解 4、反应条件：退火温度太高，延伸时间太短对策： 1、纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量 2、更换Buffer或调整浓度 3、重新设计引物（避免
溶解曲线双峰可以用吗
如果不是很明显的话，是可以用的，但是很明显，就要重新设计实验一般的主峰前面出峰的话，是引物二聚体，而如果主峰后面出峰的话，一般的是非特异性的大片段的扩增。如果主峰相对强于次峰，可以通过改变引物浓度，退火温度和镁离子浓度来解决，但如果次峰强于主峰，就是说杂带的特异性高于目的条带，一般的只能换引物了。扩
qPCR常见问题及其分析解决方法
常见问题 1. 无Ct值出现 检测荧光信号的步骤有误: 一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。 引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性。 模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。 模板降解: 避免样品制备中杂
基因扩增PCR的扩增与克隆方法介绍
①引物的序列应位于基因组DNA的高度保守区,且与非扩增区无同源序列。这样可以减少引物与基因组的非特异性结合,提高反应的特异性 ②引物长度:15-40bp为宜。引物过短或过长均可使反应的特异性下降。 ③引物的碱基尽可能随机发布,避免出现数个嘌呤或嘧啶的连续排列,G+C碱基的含量在40%-75%
详述D二聚体临床应用价值
D-二聚体 D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。D-二聚体来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块。英文缩写D-Dimer D-二聚体的临床价值已经得到普遍的认同，它以其高度的敏感性，在深静脉血栓和肺栓
D二聚体，你了解它多少－？
D-二聚体增高提示了与体内各种原因引起的血栓性疾病相关。同时也说明了纤溶活性的增强； 临床上常见于弥慢性血管内凝血（DIC）、深静脉血栓（DVT）、肺栓塞（PE）、急性心肌梗塞、脑梗塞、恶性肿瘤、卵巢癌、肺癌、败血症、肝病、妊高征孕妇、先兆子痫、烧伤、外科手术、创伤和脓毒血症等均可使
血浆D二聚体测定的简介
血浆D-二聚体测定是对人体血浆中的血浆D-二聚体进行含量测定，被检血浆中加入标记D-二聚体单抗的胶乳颗粒悬液，根据被检血浆的稀释度可计算出血浆D-二聚体的含量。
D－－二聚体检测及临床意义
D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。D-二聚体主要反映纤维蛋白溶解功能。 D-二聚体增高提示了与体内各种原因引起的血栓性疾病相关。同时也说明了纤溶活性的增强； 临床上常见于弥慢性血管内凝血（
D二聚体临床应用价值详述
D-二聚体 D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。D-二聚体来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块。英文缩写D-Dimer D-二聚体的临床价值已经得到普遍的认同，它以其高度的敏感性，在深静脉血栓和肺
D－－二聚体检验的那些事儿（二）
应用价值 自从1971年Wilson⑸等首先应用纤维蛋白降解产物用于诊断肺动脉栓塞（Pulmonary artery embolization PE）。D-二聚体的检测在诊断肺动脉栓塞方面发挥了巨大的作用，随着研究的开展和深入，临床工作者对D-二聚体在肺动脉栓塞中的意义认识日益
跑胶时二聚体为什么很亮
在我印象里我们实验室PCR没出现过这种情况,也没有人专门研究这种情况,文章估计就更没有了=.=我提一点我自己的看法吧.你们做过没做过对照试验?如果没有的话建议做两个对照试验：一是PCR体系里加模板和酶,不加引物；二是PCR体系里加引物和酶,不加模板.这两个和正常实验组一起P一起跑胶,然后对照着看一下
D－－二聚体检测及临床意义
D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。D-二聚体主要反映纤维蛋白溶解功能。 D-二聚体增高提示了与体内各种原因引起的血栓性疾病相关。同时也说明了纤溶活性的增强； 临床上常见于弥慢性血管内凝血（DI
你可知道DD二聚体？
D-D二聚体主要反映纤维蛋白溶解功能。D-D二聚体增高提示了与体内各种原因引起的血栓性疾病相关，同时也说明了纤溶活性的增强。临床上常见于弥慢性血管内凝血（DIC）、深静脉血栓（DVT）、肺栓塞（PE）、急性心肌梗塞、脑梗塞、恶性肿瘤、卵巢癌、肺癌、败血症、肝病、妊高征孕妇、先兆子痫、烧伤、外科手术、
D二聚体，你了解它多少－？
D-二聚体增高提示了与体内各种原因引起的血栓性疾病相关。同时也说明了纤溶活性的增强； 临床上常见于弥慢性血管内凝血（DIC）、深静脉血栓（DVT）、肺栓塞（PE）、急性心肌梗塞、脑梗塞、恶性肿瘤、卵巢癌、肺癌、败血症、肝病、妊高征孕妇、先兆子痫、烧伤、外科手术、创伤和脓毒血症等均可使
D－－二聚体检验的那些事儿（一）
血浆D-二聚体（DD)是特异性交联纤维蛋白降解产物，正常人血中含量很低，遇血栓形成的疾病可导致DD 升高，近年来血浆DD 检测作为PE 诊断的过筛试验已得到业界认同，相关文献报道D-二聚体对急性肺血栓栓塞的阴性预测价值接近100%，也就是D-二聚体不高可以排除急性肺血栓。由于有检查方便与非创
寡聚体和二聚体的区别
低聚物又称寡聚物，旧称齐聚物。低聚反应产物。分子量在1500以下和分子长度不超过5纳米的聚合物。分子量和分子长度在上述范围以上的是高聚物。低聚物的性质与高聚物不同，能溶解、蒸馏、形成晶形或无定形物质。 低聚物的物理化学性能随分子量不同而变化，是一个不完全聚合的聚合物。如未交联固化前的环氧树脂、不饱和
核酸扩增引物设计的原则
引物设计的必要条件是与引物互补的靶DNA序列必须是已知的，两引物之间的序列未必清楚，这两段已知序列一般为15～20个碱基，可以用DNA合成仪合成与其对应互补的两条引物。除此之外，引物设计一般遵循的原则包括： 一、引物长度根据统计学计算，长约17个碱基的寡核苷酸序列在人的基因组中可能出现的几率为1
pcr反应体系包括哪几个组分
PCR反应体系由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成。设计PCR引物时的一般原则：(1)引物长度一般15~ 30碱基，过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增。(2) 避免内部二级结构，避免序列内有较长的回文结构，使引物自身不