CTAB法从新鲜或冷冻材料提取DNA的方法

(1)DNA 的粗提①试剂a.2倍 CTAB 提取缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巯基乙醇。b.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/L NaCl。c.1倍 CTAB 沉淀缓冲液:50mmol/L Tris·Cl(pH8.0),10mmol/L EDTA,1%CTAB,20mmol/Lβ-巯基乙醇。②操作a.取1~50g 新鲜植物材料,于液氮中研成粉。b.将冻粉转入预冷的离心管中,立即加入等体积65℃预热的2倍 CTAB 提取缓冲液充分混匀,65℃保温10~20min,其间不时摇动。c.加入等体积的氯仿/异戊醇,轻缓颠倒离心管混匀,室温下,12000r/min 离心10~20min。d.将上清液转入另一离心管中,加入1/10体积的10%CTAB,混匀,加入等体积的氯仿/异戊醇,颠倒离心管混匀,室......阅读全文

CTAB-法从新鲜或冷冻材料提取-DNA的方法

(1)DNA 的粗提①试剂a.2倍 CTAB 提取缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巯基乙醇。b.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/L NaCl。c.1倍 CTAB 沉淀缓

CTAB-法从干燥材料中提取DNA的方法

从干燥材料中提取(1)粗提①试剂a.1倍 CTAB 提取缓冲液:2倍 CTAB 贮存液稀释1倍,使用前每100mL 加入巯基乙醇0.14mL。b.其他试剂与从新鲜材料中提取相同。②操作a.称取 1g 干燥材料置研钵中,加入3~4g 铝粉研磨。b.将粉末转入离心管中,加入0.6~15mL 1倍 CTA

如何从新鲜或冷冻材料提取-DNA

  (1)DNA 的粗提   ①试剂   a.2倍 CTAB 提取缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巯基乙醇。   b.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/

病毒-DNA-的提取实验——新鲜或冷冻组织中病毒-DNA-的提取

实验材料新鲜或冷冻组织试剂、试剂盒匀浆缓冲液裂解液仪器、耗材剪刀匀浆器离心机实验步骤1. 取新鲜或刚解冻的组织去除血水和结缔组织,在冰浴上剪成小碎块。2. 将组织碎块移入预冷的匀浆器中,按 10 ml/g 加入匀浆缓冲液,混匀,制成匀浆液。3. 将匀浆液移人 Ep 管, 5000 r/min 离心1

CTAB法提取植物总DNA

实验概要CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法,通过实验掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。 实验原理CTAB  (hexadecyltrimethylammonium  bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特

采用改进的CTAB法提取细菌总DNA

实验概要通过改进的CTAB法可快速简便的提取细菌总DNA,通过本实验可掌握CTAB法从细菌提取DNA的原理和方法。 实验原理CTAB  (hexadecyltrimethylammonium  bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特

利用CTAB法提取植物基因组DNA

一、实验原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物,该复合物在高离子强度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。在酚仿变性的条件下,去除残留的CTAB和蛋白质等杂质,然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分

DNA提取方法洗涤-DNA(或-RNA)

当裂解物通过硅胶膜进行离心分离,现在所提取的 DNA 或 RNA 应该与柱子结合,杂质、细胞蛋白和多糖应该已经通过了。 但是,膜仍然被残留的细胞蛋白质和盐弄脏。如果样品来自植物,仍然会有多糖,也许一些色素留在膜上,或者如果样品是血液,膜可能会被染成棕色或黄色。洗涤步骤用于去除这些杂质。通常有两次洗涤

如何从干燥材料中提取DNA

  (1)粗提   ①试剂   a.1倍 CTAB 提取缓冲液:2倍 CTAB 贮存液稀释1倍,使用前每100mL 加入巯基乙醇0.14mL。   b.其他试剂与从新鲜材料中提取相同。   ②操作   a.称取 1g 干燥材料置研钵中,加入3~4g 铝粉研磨。   b.将粉末转入离心管中

从精子中提取DNA的方法

步骤:1、从棉签上取下有检材的棉花并置于1.5塑料离心管中。2、管中加入400微升TNE缓冲液;25%微升sarcosyl(硅鱼精);75微升水;5微升蛋白酶K溶液手混匀,37度保温2小时。3、用一新的灭菌牙签将棉花拧干后管中取出,再用12000rpm离心5分钟。4、.移上清液(内含裂解细胞或雌性片

核酸提取仪CTAB法用途以及步骤

  CTAB为一种阳离子去污剂,其的特性为能够在低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,然而不会沉淀核酸。再利用有机溶剂抽提,将蛋白、多糖、酚类等杂质去除以后,将乙醇加入沉淀,就能够分离出核酸。  用途  主要用

水稻总DNA的快速少量抽提CTAB法

DNA分子是分子生物学研究的基本材料,依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的 DNA 。 实验目的:了解植物  DNA 抽提的主要方法,掌握 CTAB 法快速抽提水稻 DNA 。 实验材料及试剂: 水稻  叶片,1.5 × CTAB ,氯仿 / 异戊醇 (24:1) ,

离心机离心法提取食品中的DNA

1、从新鲜或冷冻材料提取 DNA(1)DNA 的粗提①试剂a.2倍 CTAB 提取缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巯基乙醇。b.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/L Na

植物组织提取高质量的DNA五大方法详解(一)

     蛋白质纯化是旨在从细胞,组织或整个生物体中分离出一种或几种蛋白质。蛋白质纯化对于表征目的蛋白质的功能,结构和相互作用至关重要。蛋白质分离与提取是生命科学研究基础中的基础。植物细胞由于存在细胞壁的结构,因此比动物细胞蛋白的提取相对复杂。        提取植物中的DNA对植物基因工程,植

体外DNA重组技术1

在体外将两个或多个来源相同或不相同的DNA片段连接成新的重组DNA分子,再转到特定宿主细胞中进行自主复制并表达。这是分子生物学中的基本技术。DNA重组技术的基本程序包括:(1)获得外源DNA:外源DNA是进行DNA重组的目的DNA片段,一般采用 DNA聚合酶链式反应(PCR)或逆转录-DNA聚合酶链

植物组织制备基因组DNA实验——CTAB法

实验方法原理加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。实验材料植物组织试剂、试剂盒CTAB液2-疏基乙醇TE高盐TE氯仿异戊醇仪器、耗材研钵离心机培养箱实验步骤1.  在所需量

植物总DNA的快速少量抽提实验——CTAB法

DNA分子是分子生物学研究的基本材料,依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。实验目的是了解植物DNA抽提的主要方法,掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。实验方法原理CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,

一种无酚/无氯仿组织研磨从热带木本植物中提...(一)

一种无酚/无氯仿组织研磨从热带木本植物中提取核酸的方法概述:木本热带植物中含有大量复杂的有机化合物,这些有机化合物会抑制提取RNA或DNA所需的化学程序,从而不利于后续研究及应用,如RNA测序和基因表达分析。为了克服这个问题,研究人员必须使用CTAB / PVP缓冲液的提取方案,而不能使用市售的

DNA提取中的常见问题分析2

A260/280比值较低?或者A260/280比值较高?参考见解:用水作为洗脱液比较偏低,或者蛋白质残留,但如果操作过程中使用了苯酚,则更可能是苯酚残留。而比较高可能是大量RNA残留,没有使用RNaseA,或RNaseA活性下降。A260 值提示的含量与电泳检测时提示的含量有可见的误差则为苯酚残留。

如何从细胞中提取dna

提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行SDS十二烷基磺酸钠:可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离CATB是一种抽提液,破坏细胞膜的~具体忘了~DNA不溶于异丙醇,异丙醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了以下

植物基因组DNA及总RNA提取技术1

幼嫩组织的细胞处于旺盛的分裂阶段,核较大而胞质较少,核酸浓度高,且内含物少、次生代谢产物少,蛋白质及多糖类物质相对较少,在SDS或 CTAB物质存在时,经机械研磨,使细胞破裂并释放出内含物,提取的DNA、RNA的产量高,纯度好。 提取DNA所用的提取液、吸头、离心管等需要高压灭菌以灭活DNase。R

DNA的不同提取方法及比较

DNA的不同提取方法及比较传统的DNA提取方法传统的DNA 提取与纯化,如 CTAB 法、SDS 法是在裂解细胞的基础上,多次苯酚氯仿等有机溶剂抽提使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA; 然后加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70

高通量测序中植物样本的制备方法

高通量测序技术已广泛应用于植物研究中,但植物材料中较多的蛋白质、多糖以及酚、脂类等次生代谢物质,提取核酸的难度往往比动物或原核生物样本大,因此如何从植物样本中得到高质量的核酸进行后续的测序,成为在植物高通量测序应用中的首要因素。根据核酸类型,可有如下制备方法可参考: 1. 植物基因组 DNA

种子DNA提取仪对云南紫苏的种子DNA提取

云南各地收集到20份紫苏品种并进行了多年的栽培和经济性状评估,发现在紫苏种内存在 着丰富的遗传变异,并且已用形态聚类分析的方法对云南境内紫苏的种下变异进行了探讨,将其分为5个变种。由于形态特征是基因型和环境相互作用的产物,紫苏 的形态聚类分析结果仅从表现型上间接地反映出了云南境内紫苏的遗传多样性。试

CTAB法抽提核酸

CTAB 法 ①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 0

DNA的提取方法

一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,所得DNA大小为100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,

SDS法提取小麦DNA

在提取DNA的过程中SDS的主要作用裂解细胞以及是蛋白质与核酸分离。在提取核酸的过程中,经常会用到高温(一般65-70摄氏度)加SDS一起裂解细胞,这样会让核酸释放的更快,更彻底;高温也是裂解细胞的一种方法。但加热本身对SDS没有任何辅助作用。但在低温条件下SDS的溶解度没有那么高,所以会有一定的沉

DNA提取试剂盒与苯酚氯仿提取DNA法的异同

酚-氯仿方法是提取核酸的经典方法,主要原理是利用核酸、蛋白等杂质在水相和有机相中溶解度不同而重新分配。试剂盒原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(一般是硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。酚氯仿方法经典、便宜,用的都是实验室常用试剂,提纯效率和

CsCl法从组织中提取RNA

            试剂、试剂盒 液氮 组织胍溶液 十二烷基肌氨酸钠 CsCl 组织重悬液   乙酸钠 酚 氯仿

CsCl法从组织中提取RNA

试剂、试剂盒 液氮 组织胍溶液 十二烷基肌氨酸钠 CsCl 组织重悬液 乙酸钠酚 氯仿 异戊醇 异戊醇 无水乙醇仪器、耗材 组织捣碎机 离心机实验步骤 一 材料与设备1)液氮2)组织胍溶液:590.8 g 异硫氰酸胍溶于 400ulDEPC 处理的水中,加入 25 mmol/LTris-Cl(p