HPLC是做什么的?原理?操作方法?

HPLC是高效液相色谱,英文全称是High Performance Liquid Chromatography。该方法在化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中被用来做重要的分离分析技术。用途:高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质,因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂,抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。原理:高效液相色谱以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析和分离。操作方法:如下图所示,溶剂贮器中的流动相被泵吸入,经梯度控制器按一定的梯度进行混合然后输出,经测其压力和流量,导入进样阀(器)经保护柱、分离柱后到检测器检测,由数据处理设备处理数据或记录仪记录色谱图,馏分收集器收集馏分,废......阅读全文

原料药含量测定:HPLC法or滴定法

  实验聊吧中,看到有关于两种方法用于含量测定的些许疑问,今天小编就专门开设了这样一个题目,摘录了很多网友的不同意见。在跟肖博士交流时,他也明确表示,的确没有相关法规文件明确表示,滴定法或是HPLC法,其中哪一种更优或是更推荐。一般建议依照方法的便利性、可重复性来选择适合的方法。再具体点呢?到底如何

高效液相HPLC溶剂的选择及使用(二)

2、溶剂的处理和更换 液相色谱溶剂应尽量使用HPLC级溶剂。HPLC级试剂是用特殊方法生产的含有最少的微粒和最低的紫外吸收物质。水也应达到HPLC级。液相色谱实验室应配有纯水发生器。非色谱纯溶剂可通过蒸馏方法进行提纯,除掉大部分有紫外吸收的杂质。另外,用氧化铝或硅胶柱可除去极性强的化合物。

影响液相色谱仪(HPLC)分析结果的因素

.颗粒颗粒可以损坏泵和注射器。颗粒也可以堵塞色谱柱并且熔化它,这会导致回压增大。颗粒还会表现为另一种固相,可能改变样品的组分。2.有机物超纯水中的有机物可能影响色谱峰的分离度和积分、可能导致鬼峰、还可能改变固定相的选测性以及影响色谱基线。3.离子离子浓度的改变会影响分离结果,部分能吸收UV的离子会对

hplc的各种物质出峰时间有什么决定

HPLC出峰时间和很多因素有关,比如流动相的配比、流速、温度还有色谱柱的吸附能力等等。

hplc法测定白桦三萜的含量实验原理

hplc法测定白桦三萜的含量实验原理是利用色析分离技术分离出白桦三萜中含有的杂质。高效液相色谱法HPLC是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项高效、快速的分析分离技术,是现代分离测试的重要手段。色谱法的分离原理是:溶于流动相中的各组分经过固定相时,与固定相发生作用吸附、分配、排阻、亲和的大小、强弱不同

做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在

1. 泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;2. 比例阀失效,更换比例阀即可;3. 泵密封垫损坏,更换密封垫即可;4. 溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;5. 系统检漏,找出漏点,密封即可;6. 梯度洗脱,这时压力波动是正常的。

普瑞邦饲料中伏马毒素HPLC检测(二)

普瑞邦伏马毒素检测方案介绍(一)   免疫亲和柱-高效液相色谱法:符合GBT 25228-2010 粮油检验 玉米及其制品中伏马毒素含量测定 免疫亲和柱净化高效液相色谱法Pribolab®(普瑞邦)应用免疫亲和柱净化,利用高效液相色谱仪和荧光检测器检测可提供伏马毒素测定的HPLC检测方案,得出的结果

HPLC压力持续偏低原因分析及解决方法

1、流速设定过低。解决方法:将流速适当调高。2、系统漏液。解决方法:检查色谱柱接口、泵等位置,确定漏液位置并维修。3、色谱柱选择不当。解决方法:更换合适的色谱柱。

离子交换高压液相色谱法HPLC的介绍

  使用离子交换高压液相色谱HPLC(high pressure liquid chromatography)来测定糖化血红蛋白(HbA1c)的百分含量目前被认为是分析HbA1c的金标准。采用HPLC方法工作的全自动糖化血红蛋白分析仪器,仪器快速、简便、精巧、准确等特点,受到越来越多用户的欢迎。  

Agilent支持Aurora-SFC系统公司开发HPLC/SFC复合系统

  2009年3月20日,北京—安捷伦科技公司(NYSE:A)和 Aurora SFC系统公司宣布,安捷伦将为Aurora SFC Fusion A5TM 的开发提供技术支持,这是一种将现有的高效液相色谱(HPLC)系统转换成超临界流体色谱(SFC)系统的新型分析仪器。SFC Fusion

博纳艾杰尔科技参加HPLC2010展会

        HPLC2010展会将于2010年6月21-24日在美国波士顿开办,在这次展会中博纳艾杰尔科技将重点推荐我们的AQ-C18, Unisol Amide, ASB-C18,和 Durashell C18 HPLC产品,并展开“装柱子,得奖品”游戏竞赛。我们的展位号是

迪马科技国内2.7μm-HPLC/UPLC通用柱上市

  迪马科技国内2.7μm HPLC/UPLC通用柱Leapsil震撼上市   迪马科技,国际知名色谱耗材制造生产商,在新品璀璨的二零零九年末又为国内市场带来了巨大惊喜,凝聚世界领先科技的全新产品——LeapsilTM色谱柱。本款色谱柱适用于任何HPLC/UPLC/UHPLC系统,令方法开发更加灵

柱后衍生技术―HPLC的延伸、农药残留检测利器

  色谱是一种分离科学,HPLC象其他类的色谱一样,依据样品的结构进行分离,HPLC分很多种,它们往往可以将物质分离,被分离的组分峰应该被检测到,通常zui常用的检测器为UV/VIS或荧光检测器,但是很多物质不能够被检测,或者很难与背景区分以致不能被检测.柱后衍生技术则很好地解决了这一问题.柱后衍生

离子色谱与高效液相色谱(HPLC)有什么不同

离子色谱和HPLC本质上是一样的,结构几乎一样,只是离子色谱用于测试阴阳离子,液相色谱用于测试有机物,色谱分离系统有些差异,IC用离子交换柱,LC用吸附柱。

超纯水对高效液相(HPLC)分析结果的影响

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)是一种有效可靠的技术,目前已成为许多实验室研究的重要工具。HPLC最常见的一个问题就是溶剂中的污染物对分析结果的影响。颗粒物可以损坏柱塞杆和密封圈以及进样阀。颗粒物也能堵塞色谱柱并且熔化它,这

高效液相色谱HPLC操作流程及注意事项

高效液相色谱HPLC使用前期准备工作:1.    始终保持高效液相色谱仪器包括内在系统的清洁。2.    室内温度始终保持恒定,因为室温的变化对高效液相色谱检测器有影响。3.    所有溶液、试剂、样品、标准溶液、注射剂等都应事先准备好。4.    最好提前准备好备用电源防止停电。高效液相色谱HPL

高效液相色谱(HPLC)流动相的性质要求

高效液相色谱(HPLC)流动相溶剂具有粘度低、与检测器相容性好、产品易得、毒性低等特点。选择填料(固定相)后,强溶剂对填料表面溶质的吸附降低,相应的容量因子K降低。然而,较弱的溶剂增加了溶质在填料表面的吸附,相应的容量因子k也增加了  因此,k值是流动相组成的函数  塔板数n通常与流动相的粘度成反比

Alliance-HPLC高效液相色谱溶剂管理是如何的?

  Alliance HPLC高效液相色谱该单元的溶剂管理系统最多对四路色谱溶剂进行脱气并以精确的比例混合,并无脉动地平稳输送溶剂;   Alliance HPLC高效液相色谱有下述特征:   仅配备两个入口阀的串行流路可降低复杂性,并大程度缩短故障停机时间   自动化溶剂压缩性(无错溶剂

液相色谱HPLC过程中柱压升高的原因

楼主,把柱子拆下来再走流动相看,如果压力很小的话就是柱子的问题,如果不接柱子压力也高的话,则问题出在系统,需要逐步排除,可以从滤头,单向阀等方面考虑,戴安的液相不是很清楚,你可以找说明书看看啊把柱子卸下来看看压力大不大?一段一段的检查.单项阀出毛病一般回引起压力波动,把溶剂滤头和再线过滤器卸下来清洗

高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法

  症状   (一)保留时间变化   可能的原因:解决方法   1.柱温变化:柱恒温   2.等度与梯度间未能充分平衡:至少用10倍柱体积的流动相平衡柱   3.缓冲液容量不够:用>25mmol/L的缓冲液   4.柱污染:每天冲洗柱   5.柱内条件变化:稳定进样条件,调节流动相

与HPLC相比,用TOC分析进行清洁验证的优势

科技的发展和生产成本的提高促使全球制药工业开始衡量提高效率和产量的其他途径。在这个竞争激烈的行业中,至关重要的事务是降低过高的成本,消除那些不必要且冗长的验证工作,同时最大限度地确保药品的质量。在过去七年里,将总有机碳分析这种非特异方法用于清洁验证的做法受到了越来越多的关注,因为事实证明,高效液相色

高效液相(HPLC)流动相走干了怎么办

1.换上足量新的流动相或超纯水;2.拧开排气阀,开大流速进行排气,如果泵不能吸液,可以拧开出口单向阀的出口螺丝,直至有液体流出再拧紧(建议用注射器把溶剂过滤头到比例阀入口那段管路的气泡抽光,免得柱塞杆长时间干跑而损坏柱塞杆);3.把柱子换成双通,不接流通池,拧紧排气阀,开大流速把系统管路里的气泡冲走

Alliance-HPLC高效液相色谱溶剂管理是如何的?

  Alliance HPLC高效液相色谱该单元的溶剂管理系统最多对四路色谱溶剂进行脱气并以精确的比例混合,并无脉动地平稳输送溶剂;   Alliance HPLC高效液相色谱有下述特征:   仅配备两个入口阀的串行流路可降低复杂性,并大程度缩短故障停机时间   自动化溶剂压缩性(无错溶剂

柱后衍生技术―HPLC的延伸、农药残留检测利器

  色谱是一种分离科学,HPLC象其他类的色谱一样,依据样品的结构进行分离,HPLC分很多种,它们往往可以将物质分离,被分离的组分峰应该被检测到,通常zui常用的检测器为UV/VIS或荧光检测器,但是很多物质不能够被检测,或者很难与背景区分以致不能被检测.柱后衍生技术则很好地解决了这一问题.柱后衍生

HPLC测定多种食品和饲料中的胶霉毒素

烟曲霉是侵袭性曲霉病(inva-siveaspergillosis,IA)最常见的病原菌,可产生多种免疫抑制性真菌毒素。胶霉毒素是烟曲霉产生的真菌毒素之一,是其重要的毒力因子,对人和一些哺乳动物细胞具有免疫抑制及促凋亡作用。关于胶霉毒素的毒害作用,报道主要集中在侵袭性曲霉病患者血清中[1]。周万青等

选购HPLC时应考虑的几个常见问题(二)

三、色谱柱  色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10μm等

HPLC-柱验收测试时柱压过高原因分析

柱压过高是 HPLC 柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。 拆去保护柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查; 把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查。 将柱子的进出口反过来接在

谈提高HPLC检测限、溶剂脱气等的几点经验

提高HPLC检测限、溶剂脱气等的几点经验仅针对用反相碳十八烷基硅烷化填料的柱子和紫外检测器的HPLC通常在理论教学时,HPLC分析总要求实用HPLC纯的试剂、用孔径比填料粒度小的微孔滤膜过滤流动相、最好用真空或氦气脱气。实际上,按照不同的精确度,有时候并不需要做得那么严格。这里首先申明,虽然许多做法

选购HPLC时应考虑的几个常见问题(三)

四、检测器  检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。其作用是把洗脱液中组分的量转变为电信号。HPLC的检测器要求灵敏度高、噪音低(即对温度、流量等外界变化不敏感)、线性范围宽、重复性好和适用范围广。  1.分类  1)按原理可分为光学检测器(如紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射)、热学检测

高效液相色谱仪HPLC泵故障如何处理?

下面列出预防泵故障的几项措施:  (1)用高质量试剂和HPLC级溶剂;  (2)过滤流动相和溶剂;  (3)脱气;  (4)每天开始使用时放空排气,工作结束后从泵中洗去缓冲液;  (5)不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中;  (6)定期更换垫圈;  (7)需要时加润滑油;  (8)查阅有关泵操作手册中的其它