辣根过氧化物酶实验的HRP的制备的简介

⒈水提取: 称取 10斤用水冲刷干净的鲜辣根(辣根皮中亦含有丰富的HRP),用菜刀切成小碎块,在搅肉机中搅碎1~2次。碎渣浆用1倍体积的水在低温下搅拌提取过夜(亦可采用高速抽提法)。次日用甩干机(或离心机)甩干,收集滤液,碎渣再用1/4倍体积水浸泡提取一次,合并两次滤液,量总体积和度,0。 ⒉硫酸铵分级分离: 在不断搅拌下,每升滤液中慢慢加入226克硫酸铵粉末(相当于0.40饱和度),大约在1~2小时内加完,置冷室中放置过夜。次日将上清液小心地用虹吸管移出,下面浑浊液以3000转/分离心15分钟,弃沉淀,合并上清液。再按每升上清液加258克硫酸铵粉末(0.8饱和度)随加随搅拌,当硫酸铵全部溶解后,置冷室过夜。次日,虹吸出上清液,沉淀部分在冰冻离心机中以13000转/分离心20分钟,弃去上清液,收集沉淀。将沉淀悬浮于100~150毫升蒸馏水中(加水量要使沉淀全部溶解为止),分装于透析袋内,放在流动自来水中进行透析1~2天......阅读全文

酒剂、酊剂的制备实验

实验材料 谷类酒试剂、试剂盒 当归黄芪蜜炙牛膝防风白酒黄酒蔗糖仪器、耗材 天平烧杯玻璃棒实验步骤 1.  将当归,黄芪(蜜炙),牛膝,防风4味,粉碎或粗粉。2.  按渗漉法,用白酒2400 ml与黄酒8000 ml的混合液作溶剂,浸渍48小时后,缓缓渗漉。3.  在渗漉液中加入蔗糖840 g搅拌溶解

质粒DNA的大量制备实验

实验方法原理 大量碱裂解方法不仅相当快捷可靠,而且可获得相当纯净的粗制DNA。煮沸法的大量制备也简单易行,但得到的DNA比较粗制。高纯度的质粒DNA可通过氯化铯/溴化乙锭平衡离心法或层析法进一步纯化粗制DNA得到。实验材料 培养基菌株试剂、试剂盒 EDTASDS乙醇乙酸钾异丙醇仪器、耗材 离心管实验

抗原和免疫血清的制备实验——抗菌血清的制备

抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。在免疫学实践,为制备抗体常以抗原性物质(细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质)给动物注射。经过一定时间后,动物血清中可以产生大量的特异性抗体。这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。实验材料家兔试剂、试剂盒普通培养基甲醛盐水石灰酸盐水生理盐水仪

质粒DNA的小量制备实验——煮沸小量制备法

实验方法原理当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。推荐采用本方案从1-24个菌落培养液中制备少量的质粒DNA,尽管该方案十分快捷,但制备的DNA的

HRP底物归类以及操作流程

  二氨基联苯胺/金属盐   DAB是辣根过氧化物酶最比较敏感、常见的底物。它造成明显的深棕色物质,在水和醇中不融解。大部分状况下,强烈推荐在DAB中添加不一样的金属正离子。当添加金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶能够更为比较敏感。该类反映物质呈暗灰蓝色至灰黑色,且在水及醇中平稳。DAB/金

HRP底物分类及其操作步骤

底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。二氨基联苯胺/金属盐 DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑

制备色谱简介

(1)分析色谱的目的,是分析出混合物中一个(或者几个)纯物质的含量。制备色谱的目的,是从混合物中得到纯物质。为了加快分离的时间与提高分离的效率,制备色谱的的进样品量很大,导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大,也就必须加大色谱柱填料,增大制备色谱的直径和长度,使用的相对多的流动相。然而,当色谱柱上样品

甲烷的制备和烷烃的性质实验

试剂、试剂盒 无水NaAc碱石灰NaOH (sBr2∕CCl4 KMnO4 aqH2SO4正庚烷仪器、耗材 硬质大试管玻璃导管试管玻璃水槽大抽滤试管滴液漏斗9.锡纸玻璃棒气压塞红外灯实验步骤 1. 制备:将5 g NaAc (无水)、3 g碱石灰、2 g NaOH(s),放在研钵中快速研细混

用于表达分析的-mRNA-的制备实验

实验方法原理 扩增步骤完全决定于干净、完整的起始 RNA。对培养的细胞,作者采用胍盐裂解再用树脂纯化(如 Qiagen RNeasy Kit)的方案。 扩增 mRNA 可从 Poly(A)+或总 RNA 开始。尽管 poly(A)+灵敏度更高,因为除 掉了 cDNA 反应期间大部分与 rRN

用于表达分析的-mRNA-的制备实验

基本方案 用于表达监测以及与寡核苷酸芯片杂交的 mRNA 扩增 备择方案 cDNA 和体外转录产物的固相可逆固定(SPRI)纯化             实验方法原理 扩增

甲烷的制备和烷烃的性质实验

试剂、试剂盒无水NaAc碱石灰NaOH (sBr2∕CCl4KMnO4 aqH2SO4正庚烷仪器、耗材硬质大试管玻璃导管试管玻璃水槽大抽滤试管滴液漏斗9.锡纸玻璃棒气压塞红外灯实验步骤1. 制备:将5 g NaAc (无水)、3 g碱石灰、2 g NaOH(s),放在研钵中快速研细混合均匀后用锡纸包

实验动物组织标本的制备实验_解剖法

通常选用家兔、豚鼠、大白鼠或小白鼠等动物,禁食24 小时。击头致昏,以避免麻醉或失血对胃肠道机能的影响。立即打开腹腔,取出所需的胃、肠、胆囊等。去除附着的系膜或脂肪等组织。迅速放入充氧(或95%O2+5%CO2 )保温(37 ℃)的营养液中,并以注射器用营养液将管腔内的食物残渣清洗干净。实验材料家兔

为什么辣根过氧化酶(HRP)可以作为ELISA实验中常见的酶

ELISA实验中的每一个试剂都是试剂盒的重要组成部分,特别是对酶的要求更高,ELISA中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定,继续保留着它的活性部分和催化能力。在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。另外它的相应底物应易于制备和保

吲哚实验的简介

  吲哚实验 :有些细菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚,与对二甲基氨基苯甲醛结合生成红色的玫瑰吲哚。本实验主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

颗粒剂的制备实验_感冒退热颗粒剂的制备

实验材料大清叶板蓝根连翘拳参试剂、试剂盒纯化水乙醇蔗糖粉糊精仪器、耗材烧杯玻璃棒天平旋蒸仪圆底烧瓶桑皮纸实验步骤一、准备 1.  原辅料的处理: 根据药材的有效成分不同,可采用不同的溶剂和方法进行提取,一般多用煎煮法提取有效成分,用等量乙醇精制时放置的时间、回收乙醇后放置的时间可根据实验安排情况,适

简介磁致溅射仪的制备优点

  不仅可以得到很高的溅射速率,而且在溅射金属时还可以避免二次电子轰击而使基板保持接近冷态,这对单晶和塑料基板具有重要的意义。磁控溅射可以用DC和RF放电工作,故能制备金属膜和介质膜。但是它的缺点是:不能实现强磁性材料的低温高速溅射,因为几乎所有的磁通都通过磁性靶子,所以在靶面附近不能外加强磁场;绝

简介离子交换膜的制备方法

  离子交换膜分均相膜和非均相膜两类,它们可以采用高分子的加工成型方法制造。  ①均相膜  先用高分子材料如丁苯橡胶、纤维素衍生物、聚四氟乙烯、聚三氟氯乙烯、聚偏二氟乙烯、聚丙烯腈等制成膜,然后引入单体如苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯等,在膜内聚合成高分子,再通过化学反应,引入所需的功能基团。均相膜也可以通

单克隆抗体的制备原理简介

  原理1:单克隆抗体(MAb)与抗血清(又称多克隆抗体,PAb)最主要的区别是MAb为单一种B细胞克隆所产生的一种均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B细胞克隆的标志,是一种独特型的抗体,它的特异性是针对一个抗原决定簇的。制备单克隆抗体不能用化学分离的方法从多克隆抗体中去分离纯化得到它,而是用分离产

用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测的实验步骤

(1)将盖玻片、载玻片或培养板置于水平面上;如为1h或1h以下的短程孵育,则勿需湿孵,可将盖玻片或载玻片直接放置在实验台上。多个盖玻片则需置于Parafilm膜上,因为Parafilm膜有弹性,能够防止抗体溢出盖玻片边缘,也便于镊子操作。但如果圆形盖玻片数量过多,最好将其置于细胞生长与固定的2

质粒DNA的小量制备实验——碱裂解小量制备法

实验采用国产的质粒小量抽提试剂盒。它是一种新型的离子交换柱,在特定的条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。实验材料DNA试剂、试剂盒葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS乙酸甲乙醇仪器、耗材离心机漩涡混合器分光光度计实验步骤1

用于-PCR-的模板-DNA-制备实验

实验方法原理 实验步骤 1. 10 mm 厚石蜡切片 10~15 张,置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl,9000 r/min,8 min×3。3. 脱水无水乙醇 1200 μl,9000 r/min,5 min×3。4. 打开 Eppendor

抗肽抗体的制备实验1

实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1.  将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中,置于一个2 ml 的玻璃试管,加50 μl MBS/DMF溶液,于室温下温和搅拌30 min。 2.  加

核提取物的制备实验

            实验方法原理 通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。对于特定的蛋白质,影响蛋白质盐析的主要因素:无机盐的种类、浓度、温度和PH值。

细胞膜的制备方法实验

从悬浮细胞中制备细胞膜从组织培养皿中的汇合或部分汇合细胞中分离顶层膜、基底膜或中间膜从生长于微载体上的细胞中分离细胞膜实验材料胶原酶                                                          试剂、试剂盒EDTA                

抗肽抗体的制备实验2

实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1.  将10 mg 的血蓝蛋白溶于2 ml pH10的硼酸缓冲液中,置于15 ml 的玻璃试管中,温和振摇。2.  加10 μmol 的合成肽。3.  缓慢加入1 ml 的0.3%戊二醛溶液,于室温

反转录病毒载体的制备实验

实验材料二个反转录病毒包装细胞株反转录病毒载体包含选择性标记试剂、试剂盒PBS细胞染色液组织培养皿仪器、耗材完全的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基低蛋白质结合的纤维素乙酸盐注射器式滤器克隆形成环实验步骤展开

酵母提取物的制备实验

实验方法原理酵母细胞的裂解方法有很多种,包括自溶、压力破碎(如French加压罐)、研磨(玻璃珠振荡)和酶裂解(如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨,是最简便的方法之一。这对于小体积(如<1mL的)和数升体积都很有效。经相差显微镜检测,细胞破碎率一般>95%。实验材料新鲜培养的酵母细胞

卵黄抗体制备的实验原理

通过免疫注射产蛋鸡,即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体,并可用于相应疾病的预防和治疗,这类制剂称为卵黄抗体。卵黄抗体在临床上应用较为广泛,其优点是鸡蛋比动物血清更容易获得,且卵黄中抗体含量较高。禽类的免疫器官法氏囊主要控制机体的体液免疫,机体的免疫应答发生后,体液中成熟的骨髓依赖性淋巴细胞受相关免疫

灰黄霉素测定实验的试样制备

  1、对照品溶液的制备  精密称取灰黄霉素对照品约50mg,置50mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,精密量取5mL,置50mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即为对照品溶液。  2、供试品溶液的制备  取供试品10片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于灰黄霉素100mg),置100mL量

DNA荧光染色的样品制备实验

试剂、试剂盒PBS仪器、耗材DNA荧光染料流式细胞仪实验步骤DNA是细胞内含量比较恒定的参量,随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料(如PI)可选择性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的双螺旋碱基之间,与细胞特异性结合,DNA含量与荧光染料的结合量成正比,因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况