简述转基因植物的农杆菌介导法
农杆菌的Ti质粒可以作为载体。Ti质粒上有两个区域，一个是T-DNA区，这是能够转移并整合进植物受体的区段；另一个是Vir区，它编码实现质粒转移所需的蛋白质。将待转化的外源基因先克隆在大肠杆菌质粒上，然后将此质粒转入不会引起冠瘿瘤的农杆菌（这种菌的Ti质粒已除去了T-DNA），使外源基因通过同源重组整合在Ti质粒上；然后用带有外源基因的这种农杆菌去转化植物细胞，将外源基因转入植物细胞的基因组。......阅读全文
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验——选择
实验材料愈伤组织仪器、耗材选择培养基Magenta 培养盒实验步骤1. 将培养物转移至第一轮选择培养基中（表 5.1，选择培养基 1 ) ( 见注 15)。一些愈伤组织在转移时会自然散开，尽管这无关紧要，但放置时应将散开的愈伤块彼此靠近，以标记它们是来自同一幼胚。2. 培养 3 或 4 周后，筛选出
农杆菌的转化
实验概要本实验介绍了农杆菌感受态细胞的制备及转化方法。主要试剂YEP固体培养基，含有相应抗生素的YEP培养基，0.15mM NaCl，20mM CaC12，液氮，选择平板(Rif 100ug/mL加Gm 50ug/mL加Kan 50ug/mL )主要设备培养箱，摇床，离心机，-80℃冰箱实验步骤1.
转基因植物及其安全性研究进展（一）
摘要：介绍了目前常用的植物转基因方法，并简要就转基因植物的生态安全性、35S启动子安全性、栽体骨架序列安全性、抗生素抗性标记基因安全性和食品安全性五个方面进行了综述。 21世纪，生命科学成为了自然科学中的主导科学。生物技术的核心是基因工程技术，新的技术带来了巨大的科学发展及经济效益，同时也带来了新
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验——幼胚的接种
实验材料幼胚盾片试剂、试剂盒Silwet农杆菌菌液仪器、耗材培养皿实验步骤1. 幼胚盾片接种于侵染培养基后，从摇床上取出一管菌液（见注 9），向管中加入 60 μl 1%（V/V）的 Silwet，至终浓度为 0.015%。2. 完成 3.2 节的步骤 3 后，立即将离心管中所有的农杆菌菌液（4
农杆菌的分类介绍
农杆菌主要有两种：根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）和发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）。根癌农杆菌的Ti质粒和发根农杆菌的Ri质粒上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种
植物基因转化技术
相关知识植物基因转化技术是指将外源基因导入植物细胞或组织，获得转基因植物的技术。植物基因转化技术总体上可分为两大类：1 以生物体为介导的基因转移法；2 DNA直接导入法。前者如农杆菌介导法，植物病毒介导法；后者如基因枪法、电击法、聚乙二醇法、脂质体法及花粉管通道法。其中应用最广的是根癌农杆菌介导法。
什么是发根农杆菌？
发根农杆菌是一类宿主范围广泛的G-土壤杆菌。农杆菌在侵染植物后，能够诱导植物产生大量高度分支的不定根，通常称为发根。发根农杆菌侵染植物所产生的发根具有生长速度快、分化程度高、生理生化和遗传性稳定、易于进行操作控制等特点。 土壤发根农杆菌(Ag.rhizogenes)是一种侵染性非常广泛的土壤细
简述基因工程的迅速发展阶段
自基因工程问世以来的这二十几年是基因工程迅速发展的阶段。不仅发展了一系列新的基因工程操作技术，构建了多种供转化（或转导）原核生物和动物、植物细胞的载体，获得了大量转基因菌株，而且于1980年首次通过显微注射培育出世界上第一个转基因动物——转基因小鼠，1983年采用农杆菌介导法培育出世界上第一例转
转基因植物的直接转入法
这是将裸露的DNA直接导入植物细胞，然后将这些细胞在体外培养再生出植株。裸露的DNA的转化效率较低，因而要辅之以高效率的组织培养系统。 植物细胞有一层很厚的细胞壁，因此需先去除植物细胞壁，使之成为原生质体，然后用来直接转入外源DNA。当然，也可用机械的方法将DNA直接注入植物细胞而毋须去除细胞
转基因植物及其安全性研究进展
摘要：介绍了目前常用的植物转基因方法，并简要就转基因植物的生态安全性、35S启动子安全性、栽体骨架序列安全性、抗生素抗性标记基因安全性和食品安全性五个方面进行了综述。 21世纪，生命科学成为了自然科学中的主导科学。生物技术的核心是基因工程技术，新的技术带来了巨大的科学发展及经济效益，同时
转基因植物及其安全性研究进展
摘要：介绍了目前常用的植物转基因方法，并简要就转基因植物的生态安全性、35S启动子安全性、栽体骨架序列安全性、抗生素抗性标记基因安全性和食品安全性五个方面进行了综述。 21世纪，生命科学成为了自然科学中的主导科学。生物技术的核心是基因工程技术，新的技术带来了巨大的科学发展及经济效益，同时
发根农杆菌的特征有哪些？
发根农杆菌Ri质粒诱发植物细胞大量繁殖，形成发根瘤。它与根癌农杆菌Ti质粒所诱发的冠瘿瘤有相似之处，也有其独特的特征。两者相似于： （1）根癌农杆菌的大质粒Ti质粒是诱发冠瘿瘤所必须的，发根农杆菌的大质粒Ri质粒是诱发发根瘤所不可缺少的，两种瘤都是由大质粒所引起的； （2）发根农杆菌所感染的
农杆菌的生存形状相关介绍
根癌农杆菌生活在土壤，特别是耕种过的田地里，因为经过耕种的土壤疏松，适宜根癌农杆菌生长。根癌农杆菌的菌体为棒状，有两三个微米长，靠几根鞭毛运动，鞭毛一般生在侧边。用显微镜放大到1000倍时，人们就能把它看得很清楚了。 在许多双子叶植物靠近地面的根茎交界处，根癌农杆菌能诱发一种帽状肿瘤，人们称之
关于发根农杆菌的分类介绍
根诱导质粒( root inducing plasmid, Ri质粒)是发根农杆菌( Agrobacterium rhizogenes)染色体外的遗传物质。在带有完整T-DNA的Ri质粒的转化植物细胞中都能检测到一类特殊的非蛋白态的氨基酸，这一类氨基酸被总称为冠瘿碱。在Ri质粒转化细胞中检测到的
直接导入法将中间载体质粒导入根癌农杆菌
一、原理同大肠杆菌一样，根癌农杆菌细胞在对数生长的早中期，经一定浓度的CaCl2处理后也可进入感受态。通过低温处理和37℃热击可使中间载体质粒DNA容易进入到根癌农杆菌细胞中，并在其中复制与表达。已摄入外源质粒DNA的细胞可在含有适当抗生素的培养基上生长，而不含质粒细菌则不能在上面生长，借此可分离出
补体介导的细胞毒实验——补体介导法
细胞毒实验可应用于：（1）检查细胞膜抗原；（2）鉴定抗体的特异性。实验方法原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死
说说转基因植物“那点事儿”
设想，你要把一台机器，从生产厂里运输到需要这台机器的工厂里，并让它顺利工作，要通过几个步骤呢？首先呢，我们要先把这台机器生产出来，然后打包，装到汽车上并运输到目的工厂内，安装机器，最后经过一系列调试，才能让工厂使用这台新机器进行新产品的生产。和这一过程相似，生产转基因植物，也需要上面一系列步骤。在一
梨树农杆菌转化体系的建立
实验概要 以西洋梨丰产为试材建立农杆菌转化体系，将抗真菌γ-硫堇蛋白Rs-afp1基因转入梨离体叶片获得了抗病的转化植株。 主要试剂1. YEB（5.0g/L牛肉胨，5.0g/LDifco Bacto提取物，1.0g/L酵母提取物，5.0g/L蔗糖，15g/L琼脂，50mg/L卡那霉素，pH值
关于农杆菌的基本内容介绍
农杆菌是指生活在植物根表面依靠由根组织渗透出来的营养物质生存的一类普遍存在于土壤中的革兰氏阴性细菌。农杆菌主要有两种：根癌农杆菌和发根农杆菌。根癌农杆菌能在自然条件下趋化性地感染140多种双子叶植物或裸子植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤。引发冠瘿瘤的原因是，Ti质粒上的T-DNA上有8个左右的基
农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法
制备转化用的农杆菌菌液准备：1．灭菌 试管 400毫升细长烧杯2瓶，离心瓶4-6个（250ml）。2．试剂：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶）+Kan 1;1000，Rif1:500。 1/2MS+2%蔗糖（灭菌115度20分钟），Silwet在-20℃贮存。3．步骤：共转化农杆菌：
发根农杆菌诱根现象观察
一、原理发根农杆菌是一种寄主范围非常广泛的土壤细菌，可以侵染几乎所有的双子叶植物和少数单子叶植物。植物伤口感染发根农杆菌后，一到数周出现毛状根。毛状根没有向地性，除菌后在无激素培养基上可迅速生长并产生许多分枝。通过培养可直接从毛状根上再生植株，或经愈伤组织途径分化出再生植株。发根农杆菌转化系统是实现
农杆菌感受态的制备和转化
双元载体的农杆菌转化1.1农杆菌感受态细胞的制备1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，
农杆菌感受态的制备和转化
实验方法原理 主要原理是通过电击法或CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂处理，使农杆菌细胞膜的通透性发生暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。 实验材料
农杆菌感受态的制备和转化
双元载体的农杆菌转化1.1农杆菌感受态细胞的制备1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，
农杆菌感受态的制备和转化
农杆菌感受态细胞主要用于将目的基因导入植物细胞。实验方法原理主要原理是通过电击法或CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂处理，使农杆菌细胞膜的通透性发生暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。实验材料农杆菌重组质粒试剂、试剂盒链霉素YM液体培养基CaCl2溶液甘油仪器、耗材离心管E
农杆菌侵染植物相关的注意事项
根癌农杆菌侵染植物是一个非常复杂的过程。根癌农杆菌具有趋化性，即植物的受伤组织会产生一些糖类和酚类物质吸引根癌农杆菌向受伤组织集中。研究证明，主要酚类诱导物为乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，这些物质主要在双子叶植物细胞壁中合成，通常不存在于单子叶植物中，这也是单子叶植物不易被根癌农杆菌侵染的原因。还
发根农杆菌用于生产次生代谢产物
利用植物细胞培养技术生产次生代谢物真正实现商品化生产的还为数甚少，其主要原因在于植物细胞生长缓慢，有些还需要激素维持，次生代谢物含量太低，以及生产能力不稳定等，因而工业化生产的成本太高。发根能合成植物特征的次生代谢产物，而且其含量往往比植物的含量还高，尤其是它的稳定性和生长迅速的特点是工业化生产
关于农杆菌的基因工程的基本介绍
如果想将一个抗病毒基因转入小麦，也可以用农杆菌，但要注意两点： ①要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物； ②要加趋化和诱导的物质，一般为乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物组织的受伤部位靠拢（趋化性）和激活农杆菌的Vir区（诱导）的基因，使T-DNA转移并插入到
脂质体介导DNA转染法
脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞
基因枪在棉花转基因中的优势
在迄今发展起来的棉花转基因技术中，农杆菌介导的遗传转化应用最为广泛。自1987年Umbeck等通过农杆菌介导法成功获得坷字棉转基因植株后，农杆菌介导法逐渐成为国际上最普遍的转化手段，并且取得很大进展。中国农科院棉花研究所成功建立了20多个棉花品种的高效、稳定的规模化转化体系，实现了流水线操作，建立了