3分钟读懂环介导等温扩增（LAMP）那些事儿
什么是LAMP？ 环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是Notomi等人于2000年提出来的一种新的核酸扩增技术。针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)作用下，可以在60-65℃温度范围内进行恒温扩增。在扩增的初始阶段，由于引物的延伸和初级扩增子的连续链置换，形成了哑铃状反应中间体，相较于PCR反应扩增机制更为复杂，但是却大大缩短了扩增时间，15-60分钟内即可实现109-1010核酸扩增，可以一步完成基因的扩增和检测，已被广泛地应用于病原微生物检测和传染性疾病诊断等领域。 LAMP的作用机制 LAMP 反应可分为复制起始、循环扩增，延伸三个阶段（如下图所示）。LAMP不同于PCR，它不需要通过热变性来促进双链DNA转化为单链。在复制起始阶段，由于双链DNA在65°C条件下处于动态平衡稳定状态......阅读全文
酶促重组等温扩增技术（ERA）的反应原理
1、重组酶首先与上下游引物结合,寻找同源双链DNA,一旦定位发生链交换2、同时SSB蛋白与亲本链绑定,阻止其与其脱离的模板链发生相互作用3、DNA聚合酶从上下游引物的3”端启动合成,形成两条双链DNA,如此循环重复扩增
等温扩增时出现假阳性的应对策略
等温扩增技术作为一种核酸分子诊断技术，从诞生之日起就不断受到研究者的青睐，但也少不了质疑，甚至摒弃。引起这种截然相反的态度的原因在于等温扩增技术自身所存在的缺陷。而最为突出的一点是，在建立方法或者实际样本检测的过程中，等温扩增技术引起假阳性结果的概率相对较高，使得其实际应用范围变窄，未能真正显示出其
快检革命前夜：等温扩增－vs－胶体金
不知道作者是不是故意放漏洞，引导大家讨论。既如此，我就发表一下个人观点，给读者参考。首先优思达的家用快检Cov19-FluA-FluB三合一的确是个好设计。展会上看到让人眼前一亮。性能不知道，有待考察。下面讲下我反对的地方。文中观点一：它是第一款宣传自测核酸的概念产品并非如此。2020年已经有报道杭
深圳先进院首创CRISPR等温扩增基因检测技术
近日，中国科学院深圳先进技术研究院博士周文华等在CRISPR等温扩增基因检测技术领域取得新进展。相关工作“A CRISPR-Cas9-triggered strand displacement amplification method for ultrasensitive DNA detecti
核酸扩增—普通聚合酶链反应
把DNA分子变性后解链，两条单链DNA分别经复性与两条引物互补结合，在4种dNTP存在和合适的条件下，由DNA聚合酶催化引物由5'到3'扩增延长，每经过变性、复性、延伸一个循环，模板DNA增加1倍，新合成的DNA链又可作为下一个循环的模板，经过30-50个循环，可使原DNA量增加
LAMP原理及引物设计与实例
1．LAMP引物的设计LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3' 端的F3c、F2c和Flc区以及5' 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基
中国LAMP研究会第四届大会即将召开
2000年日本荣研化学的Notomi博士发明了LAMP(环介导等温扩增)技术，该技术方法可以在短短15-60分钟内，将目标基因扩增109～1010倍，具有其他基因扩增方法无法比拟的优势，并且LAMP方法灵敏度极高，为待检样品的简单化前处理提供了可能。中国LAMP 研究会是日本荣研化学
HPV16检验中捕获LAMP产物的方法
2020年6月3日，由Lena Landaverde等在《Analytical and Bioanalytical Chemistry》期刊中发表了《Method for the elucidation of LAMP products captured on lateral flow str
HPV16检验中捕获LAMP产物的方法
2020年6月3日，由Lena Landaverde等在《Analytical and Bioanalytical Chemistry》期刊中发表了《Method for the elucidation of LAMP products captured on lateral flow st
最杰出的等温扩增方法之一——解旋酶依赖性扩增HDA
解旋酶依赖性扩增技术（helicase-dependent amplification，HDA）于2004年发明，是模拟动物体内DNA的复制机制的一种体外恒温基因扩增技术。随着技术的发展，在反应速度、特异性和灵敏度上也不断被提升，至少有三代HAD技术，整个系统比较简单，高效。 系统核心组成：解旋酶，
美研制出寨卡病毒快速检测工具
《科学·转化医学》杂志近日载文称，美国科学家研制出一种快速、高灵敏且便宜的新型检测工具，不仅能直接检测到蚊子体内和人体体液中的寨卡病毒，还能区分寨卡病毒的非洲株和亚洲株，可更有效地追踪寨卡病毒的传播。 寨卡病毒是一种虫媒传播病毒，与登革热、黄热病和西尼罗河病毒同属。寨卡病毒属于单链RNA
溶藻弧菌核酸检测的原理是什么
溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）为海水中常见嗜盐性弧菌，1973年开始明确对人类致病，易污染食物，引起腹泻及创伤部位感染。溶藻弧菌可导致食物中毒，其主要症状为不同程度的头晕、乏力和腹痛、腹泻等消化道症状。也可导致肠道外感染，如经伤口感染可导致人体引起蜂窝组织炎，游泳者为中耳炎
重组酶聚合酶扩增（RPA）技术简介
核酸检测革命：可替代PCR的犀利技术——RPA重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）和链置换DNA
聚合酶链式反应（PCR）扩增和扩增产物克隆
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤：(1) 变性(Denature)：目的双链DNA片段在94℃下解链；(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
第一节 概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃
如何利用LAMP引物设计平台设计IMSA引物？1
IMSA，全称为isothermal multiple-self-matching-initiated amplification，中文名为等温多自配引发扩增。该技术的详细介绍可见本公众号历史文章：“分子诊断万花筒” 开篇——等温多自配引发扩增技术简介。在这里隆地熊为大家介绍一种如何利用LAMP引物
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（四）
[注意]1、纯化树脂在使用前必须充分混匀。 2、PCR产物中矿物油应尽量吸去，否则会影响提取DNA的 产量。四、载体加dT尾1、将1μg pUC19用SmaⅠ全酶切。 2、在小管中按上述PCR反应，加入各种混合物，除将4μl 4种dNTP改为4μl 25mM dTTP。 3、加入1μl(
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（一）
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤：(1) 变性(Denature)：目的双链DNA片段在94℃下解链；(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（三）
材料、设备及试剂一、材料不同来源的模板DNA。二、设备移液器及吸头，硅烷化的PCR小管，DNA扩增仪(PE公司)，琼脂糖凝胶电泳所需设备(电泳槽及电泳仪)，台式高速离心机。三、试剂：1、10×PCR反应缓冲液：500mmol/L KCl， 100mmol/L Tris·Cl， 在25℃下， pH9.
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆（二）
二、PCR反应参数1、变性：在第一轮循环前，在94℃下变性5-10min非常重要，它可使模板DNA完全解链，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，这样可减少聚合酶在低温下仍有活性从而延伸非特异性配对的引物与模板复合物所造成的错误。变性不完全，往往使PCR失败，因为未变性完全的DNA
酶促重组等温扩增（ERA）的原理和核心技术
酶促重组等温扩增技术(ERA技术)是一种等温核酸扩增技术,它是利用抗体制药领域先进的Molecular Design、Directed Evolution、Affinity Maturation 等技术手段,将来源于细菌,病毒和噬菌体的特定工具酶进行改造突变并筛选其功能,通过不同的核酸扩增反应体系进
恒温核酸扩增技术的扩增速度
由于恒温核酸扩增只需要在一个温度下进行，相比较于PCR不同温度之间的循环，恒温扩增不需要反复的升温降温过程，有些恒温扩增的速度是快于PCR的扩增速度的。例如：环介导恒温核酸扩增（LAMP），重组聚合酶扩增法（RPA）以及切刻内切酶恒温扩增（NEAR）。目前英国公司optigene已经成功的改造了
聚合酶链反应的扩增平坡概述
扩增反应并不是可以无穷地进行下去的，经过一定的循环周期后需扩增的片段不再按指数增多而逐渐进入平坡；进入平坡的循环次数，取决于起始时存在的模板拷贝数以及合成的DNA总量。所谓平坡就是批PCR循环的后期，合成产物达0.3～1pmol时，由于产物的堆积，使原来以指数增加的速率变成平坦的曲线。造成PCR
长崎大学成功研制新冠检测系统－LAMP基因扩增上“热搜”
目前，新型冠状病毒感染(COVID-19)已成为世界各地的威胁，作为全球公共卫生的首要议题，需要尽快采取措施。 但是在医疗领域，如今日本的新型冠状病毒快速检测方法还没有确立完成。 但是最近也有一个好消息。 3月19日，长崎大学研究团队宣布：长崎大学与佳能医疗系统株式会社共同开发的新型冠状病
聚合酶链式反应体外扩增DNA：PCR
聚合酶链式反应体外扩增DNA1. 按以下次序，将各成分加在0.5 ml灭菌离心管、扩增管或灭菌滴定板的孔内混合：10×扩增缓冲液 5μl20 mmol/L 4种dNTP混合液（pH 8.0） 1μl20 μmol/
聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段
一、实验目的1．学习PCR基因扩增的基本原理和操作方法。2．理解PCR基因扩增在分子生物实验技术中的重要性。3．了解引物设计的一般要求。二、实验原理多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR )：原理类似于DNA的变性和复制过程，即在高温（93-95℃）下，待扩增的
twistDx－的重组酶聚合酶扩增（RPA）技术原理
twistDx 的重组酶聚合酶扩增（RPA）将彻底改变在资源有限的现场环境中扩增和检测核酸的能力。RPA 技术原理RPA 体系的重点是重组酶，这些酶与寡核苷酸引物形成复合体，并使引物与双链 DNA 中的同源序列配对。单链 DNA 结合（SSB）蛋白与被取代的 DNA 链结合，并使形成的 D 环保
各种PCR的“酶”你不行！
聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的核苷酸片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊核苷酸复制，PCR的最大特点是能将微量的核苷酸进行大幅扩增，从而达到容易鉴定和识别程度。 各种PCR到底需要哪些种类的酶？请看中心法则，分子生物学的中心教条。体外的各种聚合酶链式反应就是中心法则的完美
LAMP方法通过微波照射检测疟原虫
图片：Blockthermostat BT 200微波照射是有前景的平台，一套程序通过微波照射从人血和疟原虫体内快速可靠地提取核酸。虽然血液涂片的显微镜检仍被视为诊断疟疾感染的金标准，但是显微镜检常检测不到低密度感染，且要求高度技巧。德国蒂宾根大学的科学家与刚果共和国的同行合作收集了严重恶性疟原虫感