连接酶动态变换核酸纳米结构
DNA连接酶凭借其稳定且出众的连接能力,不仅肩负细胞内DNA的损伤修复,更在DNA分子重组中有许多妙用。DNA连接酶修复磷酸骨架的缺口来实现分子间的共价连接从而增强分子结构的稳定性。但你是否有想象过,利用DNA连接酶的特性来实现DNA纳米结构的多样动态变换?在缺口处断裂的磷酸二酯键,是否能分开本就锁住的双链?DNA连接酶好似巧夺天工的笔,勾勒磷酸二酯键的有与无,连接或者不连接,将会给我们描绘出不一样的图案和动态世界。在DNA纳米技术领域,得益于其可编码性和可寻址性,多样而复杂的DNA结构展示出纳米尺度上的多种可能性。特别是在以DNA自组装为基础的动态变构领域,存在许多种动态调节纳米结构的方法,如由链置换反应介导的或酶-DNA互作介导的动态变构效应,从而衍生出巧妙独特的可行使特定功能的动态核酸结构工具,如纳米机器人等。在本研究中,本文作者构建了一种基于DNA连接酶与DNA纳米结构相互作用的自定义可编码平台,利用DNA连接酶有效地增......阅读全文
RNA连接酶与DNA连接酶的区别
RNA连接酶与DNA连接酶的区别RNA聚合酶是在转录的时候,以核苷酸为原料,DNA的一条链为模板,合成RNA的酶RNA连接酶是可以识别特定RNA序列,将两端RNA链接起来的酶
RNA连接酶与DNA连接酶的区别
真核细胞RNA前体形成成熟的功能RNA分子时,需要经过剪切和连接过程.RNA连接酶可能在此过程中起连接作用.真核细胞RNA前体形成成熟的功能RNA分子时,需要经过剪切和连接过程.RNA连接酶可能在此过程中起连接作用.RNA连接酶与DNA连接酶的区别RNA聚合酶是在转录的时候,以核苷酸为原料,DNA的
连接酶的分类
连接酶在EC编号中分类为EC6,并再细分为6个子类:EC6.1包括形成C-O键的连接酶EC6.2包括形成C-S键的连接酶EC6.3包括形成C-N键的连接酶EC6.4包括形成C-C键的连接酶EC6.5包括形成磷酯键的连接酶EC6.6包括形成N-金属键的连接酶
DNA连接酶简介
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD
DNA连接酶的缺点
无3’→5’阅读校正功能,在PCR扩增过程可引起错配,30次循环错配率约0.25%。措施:选择高保真Taq酶,如Pfu。原因:Pfu具有3’→5’外切酶活性。注意:Pfu扩增产物为平末端。
DNA连接酶的特性
良好的热稳定性;70℃ 2h,残留90%活性;93℃ 2h,残留60%活性;94℃ 2h,残留40%活性。5’→3’聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性;5’→3’外切酶活性;无3’→5’外切酶活性。
DNA连接酶的用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。
DNA-连接酶的用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。
DNA连接酶的用途
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物,3’末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基,而这个碱基几乎总是A,因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性,故可用T载体克隆。
DNA-连接酶的分类
T4DNA连接酶T4DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可接双链DNA的平末端、相容黏末端及其中的单链切口,在分子生物学中有广泛的应用。T4DNA连接酶是经原核表达,柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶,SDS-PAGE显示为一条6
DNA连接酶的性质
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数
什么是DNA连接酶?
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖N
DNA-连接酶的性质
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数
DNA连接酶作用特点
1. 连接的两条链必须分别具有自由3’-OH和5’-P,而且这两个基团彼此相邻;2. 在羟基和磷酸基团间形成磷酸二酯键是一种耗能过程。E.coli DNA连接酶 -连接具互补碱基黏性末端(最初研究表明),现在研究可连接平末端;需NAD+辅助因子,活性低,不常用。T 4DNA连接酶-连接具互补碱基黏性
何谓连接酶链反应?
连接酶链反应(ligase chain reaction, LCR)属于一种探针扩增技术,是依赖靶核苷酸序列的寡核苷酸探针的连接技术。这种方法应用4种寡核苷酸探针(即两对互补的引物),当它们在体外结合到靶序列上以后,用耐热DNA连接酶将它们连接起来。两条探针被连接上以后又可以作为新的模板。由于使
DNA连接酶及其应用
(一)DNA连接酶的发现环形DNA分子的发现使科学家相信一定有一种能连接这种切口的酶存在。首个DNA连接酶(ligase)——大肠杆菌DNA连接酶,是1967年发现的,是大肠杆菌基因编码。1970年,发现了T4DNA连接酶,由大肠杆菌T4噬菌体基因编码的。(二) DNA连接酶作用特点1. 连接的两条
连接酶的基本信息
连接酶(英语:Ligase,或称连结酶和结合酶)是一种催化两种大型分子以一种新的化学键结合一起的酶,一般会涉及水解其中一个分子的团。
简述DNA连接酶的用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。 人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。
DNA-连接酶参与哪些过程
DNA连接酶主要应用于基因工程中连接两个粘性末端时使用。DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。
DNA连接酶的功能介绍
限制性核酸内切酶(以下简称限制酶):限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并且能在特定的切点上切割DNA分子。是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶("分子手术刀")。发现于原核生物体内,现已分离出100多种,几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DN
DNA连接酶的基本介绍
DNA连接酶也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是把两条DNA黏合成一条。无论是双股或是单股DNA的黏合,DNA黏合酶都可以借由形成磷酸酯键将DNA在3'端的尾端与5'端的前端连在一起。虽然在细胞内也有其他的蛋白质,例如像是DNA聚合酶在其中一股DNA
DNA-连接酶参与哪些过程
dna连接酶在人体中也有存在,不过并不是用来复制dna从而进行细胞分裂的,人体细胞分裂所需的酶是dna聚合酶。人体中的dna连接酶是用来将入侵人体的外援细菌或病毒的dna剪碎的,在没有外源细菌或病毒入侵时,dna连接酶不发挥作用基因工程中的dna连接酶大多取自于原核生物体内
连接酶链反应的原理
连接酶链反应(Ligase chain reaction,LCR),是在连接酶扩增反应或连接酶检测反应的基础上,引入热稳定的连接酶而建立的类似PCR 技术的新方法。LCR 既可扩增,又可鉴定D N A 异常,与PCR 技术一样可用于已知病因的遗传病大面积普查。
DNA连接酶的主要分类
T4DNA连接酶T4DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可接双链DNA的平末端、相容黏末端及其中的单链切口,在分子生物学中有广泛的应用。T4DNA连接酶是经原核表达,柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶,SDS-PAGE显示为一条6
裂合酶与连接酶的差异
在七大酶类(去年八月,IUBMB新增加了转位酶分类)中,最容易混淆的就是裂合酶与连接酶了。裂合酶(EC 4),简称合酶,英文一般称为synthase。连接酶(EC 6),又叫合成酶,英文是synthetase。真是巧了,中文容易混淆不说,连英文都这么接近。但是,如果光是名称接近,就不会有那么多人搞错
连接酶的结构与功能
中文名连接酶外文名ligase拼音名Lian Jie Mei又 称合成酶 连结酶 结合酶分 类EC6EC6子类数6个子类结构连接酶是酶分类中重要的一类(EC 6):6.1形成C-O键;6.2形成C-S键;6.3形成C-N键;6.4 形成C-C键。连接酶的催化反应过程需要Mg离子。定义又称
DNA连接酶的结构特点
DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链一个碱基3‘-OH末端和它相邻碱基的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两个相邻的碱基连接起来。连接酶的催化作用需要消耗ATP。
DNA连接酶的发现历史
环形DNA分子的发现使科学家相信一定有一种能连接这种切口的酶存在。首个DNA连接酶(ligase)——大肠杆菌DNA连接酶,是1967年发现的,是大肠杆菌基因编码。1970年,发现了T4DNA连接酶,由大肠杆菌T4噬菌体基因编码的。
核酸扩增—连接酶链反应
LCR由基因扩增技术和连接酶方法结合而成,是继PCR之后的快速DNA扩增方法。与PCR不同的是,LCR采用2对寡核苷酸探针,每对寡核苷酸探针与变性正负靶链杂交时处于相邻的位置,两者之间形成一个缺口,只有当它们与靶DNA碱基配对且3'与5'端相邻位置均正确时,DNA连接酶才能将其连
DNA连接酶的反应条件
影响连接效率的因素有:1. 温度(通常在4-15℃ )2. ATP的浓度(10μM/L - 1mM/L )3. 连接酶浓度(一般平末端大约需1~2U,黏性末端仅需0.1U)4. 反应时间(通常连接过夜)5. 插入片段和载体片段的摩尔比( 1∶1~5∶1)