酶联免疫吸附测定法的概述

酶联免疫测定方法是以抗原和抗体分子为测定 靶标的方法,亦是目前最为常用的实验室诊断方法之一。 从理论上说,一种 生物或生理活性物质,只要有办法得到其特异的抗体,就可以建立这种物质的酶联免疫测定方法。在以前看来一些难以进行质量测定的微量生物活性物质,如受体、 细胞因子以及酶等均可使用酶联免疫测定技术来测定。酶联免疫测定方法是以抗原抗体间的特异反应为基础的,其与生化的化学反应有着本质的区别,并且由于标记物如 同位素、 酶、 荧光素、 微量元素、发光物质等的掺人,酶联免疫测定技术从低灵敏的 免疫沉淀和免疫凝集反应进入到了高灵敏的放射免疫、酶免疫、荧光免疫和发光免疫测定时代,可见酶联免疫测定更多的是用于生物活性物质的微量测定。 目前在上,很多重要的疾病诊断标志物均使用酶联免疫测定方法来检测,如抗HAVIgM,乙肝“ 两对半”、抗HCV,抗HIV,梅毒抗体、优生优育TORCH系列、性病病原体的抗原或抗体等传染性病原体血清标志物、激......阅读全文

关于酶联免疫吸附测定的结果判断

  定性测定定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答,分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果,即用滴度来表示反应的强度,其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中,将标本作一系

酶联免疫吸附测定方法介绍

双抗体夹心法双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:一、将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。二、加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。三、加酶标抗体:使固

酶联免疫吸附试验ELISA方法简介

近二十几年来,免疫学分析方法发展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后,使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后,在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。由于酶的高效生物催化作用,一个酶

酶联免疫吸附试验及其应用(二)

三、ELISA的影响因素这是ELISA检测中的重要部分,可从9个方面加以说明。(一)固相载体:可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式,这是进行酶标记测定的基本条件。许多物质可作为固相载体,如纤维素、交联右旋糖苷、琼脂糖珠、聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯及聚氯乙烯等等。但在ELISA中最常用的是聚苯乙

酶联免疫吸附试验及其应用(一)

一、 前 言  近二十几年来,免疫学分析方法发展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后,使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后,在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。由于酶的高效生物

酶联免疫吸附试验及其应用(三)

如采用改良过碘酸钠简化法制备酶结合物,比原法更简便、快速,所获制品质量良好。其方法是取10mg HRP加1ml0.1 mol/L醋酸钠或水溶解,充分混匀,约5分钟后加0.08 mol/L NaIO4,水溶液1.0ml混合后,置冰箱内20分钟,加0.4 mol/L乙二醇溶液0.5ml终止氧化反

酶联免疫吸附试验及其应用(四)

表1:ELISA操作步骤      方法步骤间接法(测抗体)双抗体夹心法(测抗原) 竞争法(测抗原) 抑制性测定法1包被抗原:用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(5~20μg/ml)各0.3ml加于微反应板每个凹孔中,4℃过夜或37℃水浴2~3小时,贮存冰箱包被抗体:用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最

无需危险试剂的水分测定法

水分在许多分析检测工作中都被作为一种特性参数。本文介绍了一种创新的水分测定方法,无需使用有毒化学试剂,同时又具有良好的检测效果。 水分的存在可能为许多工业生产过程带来影响。水分影响物质的物理和化学性质,从而也影响其质量或寿命。例如食品中的水分含量不仅决定其稳定性,而且还影响其加工性能和组织结构。

纸板耐破强度的测定法

 范围 本标准规定了以液压增加法测定瓦楞纸板的耐破强度的方法。 本标准适用于耐破度为350-5500kpa的瓦楞纸板。2 引用标准 下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准版本的可能性。 GB

旋光度测定法的测定方法

旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面:1、仪器旋光计:《中国药典》规定,应使用读数至0.01。并经过检定的旋光计。旋光计的检定:可用标准石英旋光管进行校正,读数误差应符合规定。2、测定方法将测定管用供试液体或固体物质的溶液(取固体供试品,按各药品项下的方法制成)冲洗数次,缓缓注入供试液或溶液适

血糖酶法测定法的特点

  目前血糖测定主要采用酶法,包括:  ①已糖激酶法,该法准确度和精密度高,特异性高于葡萄糖氧化酶法,适用于自动化分析,为葡萄糖测定的参考方法;  ②葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法,该法准确度和精密度都能达到临床要求,并且操作简便,适用于常规检验;  ③葡萄糖氧化酶-极谱分析法,该法是GOD-POD的改

免疫比浊测定法的种类

1.免疫透射比浊法 抗原抗体结合后,形成免疫复合物,在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时,可被免疫复合物吸收。免疫复合物量越多,光线吸收越多。光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊计测定光密度值,复合物的含量与光密度值成正比,同样当抗体量一定时,光密度值也与抗原含量成

灰分测定法的概念和定义

食品中的灰分是指食品经高温灼烧后残留下来的无机物,灰分指标可以评定食品是否污染,判断食品是否掺假。如果灰分含量超标,说明了食品原料中可能混有杂质或在加工过程中可能混入一些泥沙等机械污染物。灰分中主要成分无机盐是六大营养素之一,因此灰分含量也是评价食品营养的重要参考指标之一。

甲氧基测定法的测定方法

  取干燥的供试品(相当于甲氧基10mg),精密称定,置烧瓶中,加熔融的苯酚2.5ml与氢碘酸5ml,连接上述装置;另在两个接受容器内,分别加入10%醋酸钾的冰醋酸溶液6ml与4ml,再各加溴0.2ml;通过支管将CO2或N2气流缓慢而均衡地(每秒钟1~2个气泡为宜)通入烧瓶,缓缓加热使温度控制在恰

脂肪酸的β氧化测定法

实验概要本实验利用酮体测定法对脂肪酸的β-氧化进行了测定,介绍了该方法的原理及步骤等。实验原理酮体包括乙酰乙酸、b—羟丁酸和丙酮三种物质。在肝脏中,脂肪酸经b—氧化作用生成乙酰CoA。生成的乙酰CoA可经代谢缩合成乙酰乙酸,而乙酰乙酸既可脱羧生成丙酮,又可经b—羟丁酸脱氢酶作用被还原生成b—羟丁酸,

微生物测定法

微生物测定法是指在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法。被测定的物质可以是某些生物生长所必需的维生素、氨基酸等,也可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农药等。常使用的有液体稀释法和固体平板扩散法

复钙时间测定法

【原理】 在去钙离子的抗凝血浆中,重新加入适量的钙后,血浆就发生凝固,这一过程所经历的时间即为复钙时间(recalcification time,RT)。 【方法学评价】通常有两种方法: ①表面玻璃皿法:本法比试管法敏感,但不如试管法简便。 ②试管法:仅用试管替代玻璃皿作试验医|学教育网搜集整理。

折光率测定法

折光率测定法光线自一种透明介质进入另一透明介质时,由于光线在两种介质中的传播速度不同,使光线在两种介质的平滑界面上发生折射。常用的折光率系指光线在空气中进行的速度与在供试品中进行速度的比值。根据折射定律,折光率是光线入射角的正弦与折射角的正弦的比值,即  式中 n为折光率; sin i为光线的入射角

浊度计测定法

  使用浊度计时,需要两个参照标准物质:浊度标准可用来设定电流ii的灵敏度,空白标准(蒸馏水或未接种的培养基)可用来对仪器调零。浊度计使用的磨砂有机玻璃浊度标 准或磨砂玻璃浊度标淮可以从生产厂商处购得。  浊度计灵敏度的测定极限约为105/mL个微生物(实际的数字取决于微生物的 种类)。  一些浊度

熔点测定法所需仪器

仪器包括熔点测定仪、温度计和毛细管。熔点测定仪由加热用容器和搅拌器组成。温度计为具有0.5刻度的分浸型温度计,应经熔点测定用标准品校正,其分浸线的高度宜在5-80mm,温度计的汞球宜短,汞球的直径宜与温度计柱身的粗细接近。毛细管是用洁净的中性硬质玻璃管制成,内径为0.9~1.1mm,壁厚为0.10~

免疫酶测定法简介

免疫酶测定法是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或抗体的方法。本法将抗原抗体反应的高度特异性与酶对底物高效催化作用结合起来,根据酶作用底物后显色,以颜色变化判断实验结果。目前常用的方法有酶免疫组化技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)。前者测定细胞表面抗原和组织内的抗原,后者主要测定可溶性抗原或抗体

土壤含氮测定法

一 土壤样品的采集与处理1 风干和去杂从田间采回的土样,要及时风干。其方法是将土壤样品放在阴凉干燥通风、又无特殊的气体(如氯气、氨气、二氧化硫等)、无灰尘污染的室内,把样品弄碎后平铺在干净的牛皮纸上,摊成薄薄的一层,并且经常翻动,加速干燥。切忌阳光直接曝晒或烘烤。在土样稍干后,要将大土块捏碎(尤其是

干燥失重测定法简介

取供试品,混合均匀(如为较大的结晶,应先迅速捣碎使成2mm以下的小粒)。分取约1g或各药品项下所规定的重量,置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称瓶中,精密称定,除另有规定外,照各药品项下规定的条件干燥至恒重。从减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。供试品干燥时,应平铺在扁形称瓶中,厚度不可超过5

氯化钠测定法

  本法系用硝酸破坏供试品中的蛋白质后,再加入过量的硝酸银,使供试品中的氯离子与硝酸银完全反应,生成氯化银沉淀析出,过量的硝酸银用硫氰酸铵滴定液滴定。根据硫氰酸铵滴定液消耗的量,可计算出供试品中氯化钠的含量。  测定法  精密量取供试品1.0ml,精密加入0.1mol/L硝酸银溶液(称取硝酸银17.

熔点测定法所需仪器

(1)容器:供盛装传温液用。可用b形管、烧杯或其他适宜容器。  (2)搅拌器:玻璃棒或磁力搅拌器等。  (3)温度计:供测定传温液的温度及供试品的熔点用。医学教育`网搜集整理《中国药典》规定使用分浸型、具有0.5℃刻度的温度计,温度计应预先用熔点测定用对照品进行校正。  (4)毛细管:熔点测定用毛细

面粉粘度简易测定法

1仪器和用具1.1 磁力搅拌加热器1.2 1000ml烧杯1.3 200ml量筒1.4 感量0.1g天平1.5 涂-4粘度计1.6 量程为200℃的水银温度计2方法原理一定浓度的谷物粉或淀粉的水悬浮液,按一定的升温速率加热,使淀粉糊化,由于淀粉吸水膨胀使悬浮液逐渐变成粘状物,粘度不断增高,随着温度增

沥青灰分测定法

 沥青经燃烧和煅烧后,所余无机物质即为灰分,以质量百分数表示。沥青的灰分是沥青中无机矿物质的含量。含有微量金属的分子燃烧煅烧后形成的无机物和灰分的测定可以检查沥青中矿物质的含量。另外,在回收沥青时对回收的沥青要先进行灰分的测定,以确定是否因矿粉的存在影响了回收沥青的分析测定结果。蟸 二、设备2.1 

氮测定法常量法

取供试品适量(相当于含氮量25~30mg),精密称定,供试品如为固体或半固体,可用滤纸称取,并连同滤纸置干燥的500ml凯氏烧瓶中;然后依次加入硫酸钾(或无水硫酸钠)10g和硫酸铜粉末0.5g,再沿瓶壁缓缓加硫酸20ml;在凯氏烧瓶口放一小漏斗并使凯氏烧瓶成45°斜置,用直火缓缓加热,使溶液的温度保

织物撕破性能测定法

本标准与原标准相比在技术内容上有重大变化:1.方法与试样:原标准为单舌法,现标准为舌形试样法,包括单舌试样和双舌试样两种方法。与此相应试样尺寸也作了改变;2.使用仪器:原标准为等速牵引型(CRT)或等速伸长型(CRE),现标准规定为等速伸长型(CRE);3.牵引速度:原标准一般织物为(200±10)

酶联免疫吸附测定的基本原理

①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合