关于单克隆抗体制备脾细胞的选择介绍
1.材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 单克隆抗体制备流程 单克隆抗体制备流程 (2)1640培养液(3)2.5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。 (3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中,冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。 (4)用镊子轻轻挤压脾,做成脾细胞悬液,用毛细管将悬液移入小试管中。 (5)直立小试管3min,使大块的结缔组织下沉,把细胞悬液移入离心管中。 (6)以2.5%FCS—1640充满离心管,并以400g离心7min~10min(与此同时应开始制备骨髓细胞)。 (7)把沉淀用约10ml的新鲜培养液再悬浮。 (8)重复⑹、⑺步骤。 (9)计算细胞,以台盼兰染色用相差显微镜检查,活细胞数应高于80%为合格。......阅读全文
关于单克隆抗体制备脾细胞的选择介绍
1.材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 单克隆抗体制备流程 单克隆抗体制备流程 (2)1640培养液(3)2.5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。 (
单克隆抗体细胞选择脾细胞
1.材料(1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。单克隆抗体制备流程(2)1640培养液(3)2.5%FCS-1640营养液2.操作方法(1)拉颈或用CO2处死小白鼠。(2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中,冰
关于单克隆抗体制备骨髓瘤细胞的介绍
骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白,这样的瘤细胞融合后,可能影响或降低所分泌抗体的滴度,所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。 选择骨髓瘤细胞的条件: ①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系,以便两者的组织相容性抗原一致; ②骨髓瘤细胞必须是静息状态,不产生γ球蛋白
关于单克隆抗体的制备过程介绍
1.免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用二
杂交瘤细胞免疫小鼠和脾细胞的制备介绍
免疫小鼠:取 6~8 周龄 Balb/C 雌鼠,基础免疫 2 周,静脉再加强免疫一次,3~5 天后用于融合。 脾细胞制备: 1.引颈处死小鼠,用酒精消毒表体。 2.无菌条件下取出脾脏,剃除结缔组织和脂肪,用 5ml 无血清培养液冲洗一次。 3.把脾脏置于已消毒的 90~100 目不锈钢网
单克隆抗体制备饲养细胞的相关介绍
在体外的细胞培养中,单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖,必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖,加入的细胞称之为饲养细胞(Feedercell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中,就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体,因此在这一过程中必须使用饲养细胞。许多种类的动物细胞都可以做饲养细胞
单克隆抗体技术:细胞的选择
脾细胞 1.材料 (1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2) 1640培养液 (3) 2.5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2) 将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。 (3) 把脾放入5ml含有2.5%FCS的
单克隆抗体的细胞如何选择?
(一)脾细胞1.材料(1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。单克隆抗体制备流程(2)1640培养液(3)2.5%FCS-1640营养液2.操作方法(1)拉颈或用CO2处死小白鼠。(2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的16
单克隆抗体细胞的选择
实验概要本文介绍了单克隆抗体细胞的选择实验。实验原理在体外的细胞培养中,单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖,必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖,加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中,就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体,因此在这一
单克隆抗体细胞的选择
实验概要本文介绍了单克隆抗体细胞的选择实验。实验原理在体外的细胞培养中,单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖,必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖,加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中,就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体,因此在这一
单克隆抗体制备动物的选择与免疫
1、动物的选择目前应用最广的是小白鼠和大白鼠,尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广,因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱 导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的,雌雄均可,以8~12周龄为宜。大白鼠也可,能产生较多量的单抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上,发展了
单克隆抗体细胞选择饲养细胞
在体外的细胞培养中,单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖,必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖,加入的细胞称之为饲养细胞(Feedercell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中,就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体,因此在这一过程中必须使用饲养细胞。许多种类的动物细胞都可以做饲养细胞,如
关于脾破裂的检查介绍
1.B型超声检查 这是一种常用的无创检查,能显示破碎的脾脏,较大的脾包膜下血肿及腹腔内积血。 2.CT检查 能清楚地显示脾脏的形态,对诊断脾脏实质裂伤或包膜下血肿的准确性很高。同时可发现腹腔内多脏器伤。 3.核素扫描 可采用99m锝胶态硫扫描或γ照相等技术诊断脾损伤,方法安全,因扫描所
关于脾约的病因介绍
本证为素体阳气偏盛,或因饮酒过多,过食辛辣厚味,导致胃肠积热;或热病之后余热未清:或发汗利小便太过,使津液耗伤,胃肠热积;或因过服辛燥药物,从而使津液耗损,胃肠淤热。上述诸种原因使胃热偏盛,津液失于输布,不能下润大肠,大肠传导不及,而形成脾约证。病位在胃与大肠,为正虚邪实之候。
关于脾囊肿的检查介绍
1.实验室检查 血常规中嗜酸性粒细胞比例显著增加。包虫囊液皮内试验(Casoni皮肤敏感试验)呈阳性反应。 2.其他辅助检查 B超常作为脾囊肿的首选检查,CT和磁共振等可进一步了解脾囊肿形态、大小、数目,囊腔与囊壁的特点,以及与周围脏器的关系等。对极为罕见的脾囊肿如脾皮样囊肿(畸胎瘤)、内
关于脾约的检查介绍
1.直肠指检应仔细观察有无外痔,肛裂及肛瘘等病变,触诊时需注意有无内痔,肛门括约肌有无痉挛,直肠壁是否光滑,有无溃疡或新生物等。 2.X线钡剂灌肠检查及腹部平片X线钡剂灌肠检查对结肠,直肠肿瘤,结肠狭窄或痉挛,巨结肠等病变的诊断有较大帮助,对结肠的运动功能(蠕动)也可有较全面的了解,X线腹部平
关于脾约的症状介绍
大便秘结或使出不畅,大便干结,甚则如羊屎状,或数日不大便,腹部胀满不甚,无腹痛,饮食如常,小便数而短赤,或有心烦、口干口臭,舌质红,舌苔黄燥,脉滑数,趺阳脉浮而涩。
单克隆抗体细胞选择骨髓瘤细胞
骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白,这样的瘤细胞融合后,可能影响或降低所分泌抗体的滴度,所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。选择骨髓瘤细胞的条件:①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系,以便两者的组织相容性抗原一致;②骨髓瘤细胞必须是静息状态,不产生γ球蛋白或不分泌到细胞外
关于单克隆抗体技术的细胞筛选的介绍
杂交瘤细胞在融合后2周左右即可筛选,即把分泌所需抗体的杂交瘤孔从众多的孔中选出来,通常也称为抗体检测。抗体检测的方法很多,通常根据所研究的抗原和 实验室的条件而定。但作为杂交瘤筛选的抗体检测方法必须具有快速、准备、简便,便于一次处理大量样品等特点。因为往往有几百个样品需要在短短几个小时就报 告结
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇(PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株(杂交瘤细胞)。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査(ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握),然后对理想的杂交瘤细胞加
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇(PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株(杂交瘤细胞)。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査(ELISA 筛
单克隆抗体的制备
实验方法原理使用聚二乙醇(PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株(杂交瘤细胞)。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査(ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握),然后对理想的杂交瘤细胞加以扩增、冷冻和
关于脾边缘带B细胞淋巴瘤的类型介绍
边缘带B细胞淋巴瘤包括三种病理类型:结外粘膜相关淋巴瘤,结内边缘带B细胞淋巴瘤和脾边缘带B细胞淋巴瘤。三种病理类型具有明显的临床特征和不同的预后,治疗原则也有所不同。早期结外粘膜相 关淋巴瘤以放射治疗为主。 在REAL分类中,边缘带B细胞淋巴瘤被认为是一种具有明显临床病理特征的B细胞来源NHL
关于脾边缘带B细胞淋巴瘤的病理介绍
脾边缘带B淋巴瘤(splemicmarginalzonelymphoma,SMZL)是“WHO2000造血和淋巴组织分类”中正式确定的一个新独立类型。是原发于脾脏的低度恶性B细胞淋巴瘤,好发于老年。由于报告的病例数很少,对该病的认识还不全面,国内仅有1例报告对临床及肿瘤细胞的特征进行了阐述。
关于单克隆抗体技术的细胞融合的介绍
首先制备细胞培养基、 氨基喋呤(A)贮存液、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷(HT)贮存液等各种细胞生长所需的营养物质。然后制备髓瘤细胞和脾淋巴细胞,之后进行细胞融合。在细胞融合后选择性培养过程中,由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡,此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活,通常必须加入其他活细胞使之繁
关于小儿脾大的基本介绍
小儿脾大是婴儿及儿童时期的常见体征,一般见于全身性疾患,如感染、血液病、代谢病、肿瘤等,仅限于脾脏本身的疾病则少见。急性感染时,常于数天内即见脾脏充血,可在左肋缘下触及;慢性感染所致的脾大则主要由于增生性浸润。应指出,在多数早产儿及30%的足月儿,刚出生后即可摸到脾脏,5~6个月的正常婴儿则仅有
关于小儿脾大的检查介绍
1、小儿脾大的穿刺及活体组织检查 (1)肝穿刺活检 有助于鉴别慢性肝炎、门脉性肝硬化所致脾大、脂肪肝、糖原代谢病、成肝细胞瘤、肝硬化、黏多糖代谢病所致肝脾大的鉴别。 (2)脾穿刺检查 危险性大,尤其是显著脾大,因纤维组织增生,质地变硬而脆,容易破裂出血,故不轻易用,在小儿更不常用。在疑为脾脓
关于单克隆抗体细胞融合的过程介绍
融合的方法很多,常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等。3:1或5:1最为常用。 1.试剂与材料 (1)供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。 (2)1640培养液100ml。 (3)完全1640液100ml。 (4)2.5%FCS-1640液50ml。
单克隆抗体的制备实验
单克隆抗体的制备实验可以用于:(1)将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交, 获得既能产生抗体, 又能无限增殖的杂种细胞,并以此生产抗体;(2)该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体,对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo
单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物选择免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处