基因组探针的制备方法
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。......阅读全文
用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法(二)
2 结果与讨论2.1 PCR模板DNA的快速制备本方法是将少量植物叶片在TE溶液或去离子水中,经钨合金珠在离心管内的振荡破碎,直接获得DNA溶液。用多功能组织细胞研磨器(MTM-60)一次可操作60个样品。琼脂糖凝胶电泳表明,用TE和去离子水都可获得分子量较大的DNA片段(图1A)。用TE制备的DN
采用热扫描探针光刻和激光直写相结合的方法快速制备
制造高品质的固态硅基量子器件要求高分辨率的图形书写技术,同时要避免对基底材料的损害。来自IBM实验室的Rawlings等人利用SwissLitho公司生产的3D纳米结构高速直写机NanoFrazor,结合其高分辨热探针扫描技术和率的激光直写功能,制备出一种室温下基于点接触隧道结的单电子晶体管
转基因植物检测的探针制备过程
转基因植物检测的探针制备以含中间载体质粒的大肠杆菌材料为例进行介绍。(一)中间载体质粒 DNA 提取(略)(二)质粒 DNA 限制酶切及探针片段回收1、操作(1)限制性内切酶消化在0.5mL Eppendorf 管中,按如下顺序及用量加入试剂,建立 20μL 酶切体系:无菌蒸馏水6μL,10倍缓冲液
离子探针方法
离子探针方法是将质谱测定技术与离子发射显微镜技术相结合的现代仪器分析方法。能提供一般质谱分析所不能提供的试样微区质谱。由于它能对固体物质作微区、微量及深度成分分析,在某些条件下检测灵敏度可达ppb数量级,因此被广泛地应用于半导体、冶金、地质和生物研究等部门。其原理是利用聚焦的高能一次离子束轰击试样表
高通量的PCR模板植物基因组DNA制备方法(四)
2.3 高通量的分子标记检测 本方法制备的DNA浓度虽然低,用96针复制器加入0.5~1 µL模板进行33~35个PCR循环就可获得足够浓度的产物,并不需要加入特别多的Taq酶(甚至使用量为每45~50 µL PCR反应液1 U也能扩增分子标记)。该方法已对数万份水稻样品进行了分子标记(S
高通量的PCR模板植物基因组DNA制备方法(三)
将纯化定量的水稻品种(93-11)基因组DNA标准样品(0.5~8 ng)与1.0 µL本方法制备的水稻品种(02428)基因组DNA混合作为模板,用InDel 标记引物(表1)进行PCR扩增和PAGE检测。箭头指某反应(或2个反应之间)其02428与93-11条带的信号值大致相等(即DNA
高通量的PCR模板植物基因组DNA制备方法(一)
摘 要:制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费人工的工作。本文介绍一种高通量的植物基因组DNA(gDNA)快速制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(长度约30 mm或40 mm,与96方孔板的孔深大致相同) 或一小块(约2~4 mg)双子叶植物叶片放入9
高通量的PCR模板植物基因组DNA制备方法(二)
1.2 植物材料 1.2.1 水稻秧苗。将1.6-mL 96方孔板底部用6 mm电钻头打穿,或将旧96孔PCR板的底部剪去约4 mm。使用时将方孔板压入少量泥巴。每孔放入1粒萌动的水稻种子,在自然日光下(或人工气候箱)生长至3~4片叶。其他植物小苗也可用类似方法种植。 1.2.2 水稻大植株的鲜
关于寡核苷酸探针的制备的介绍
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针前,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外
细菌中制备基因组DNA实验——小量制备
真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。实验方法原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液
一种原子力显微镜探针及其制备方法与流程
背景技术:传统的原子力显微镜探针是由微电子机械技术加工而成,其材料成分为硅或者氮化硅,其缺点是缺乏韧性,容易破损。本发明引入聚合物通过紫外固化、并引入金、镍纳米颗粒,使得探针既有一定硬度,亦有一定的韧性。技术实现要素:目的:为了克服现有技术的缺陷,本发明提供一种原子力显微镜探针及其制备方法,既可以增
李峰团队发现蛋白质AIE纳米点光学探针制备方法
2001年,香港科技大学教授唐本忠团队发现了一种与传统聚集淬灭相反的现象,称为聚集诱导发光(aggregation-induced emission, AIE)现象,其主要原理是由于分子内运动受到限制,导致非辐射衰减渠道被抑制,辐射衰变增强而发光。与传统的有机染料相比,AIE荧光材料具有抗光漂白
SECM探针的清洗方法
1.快速循环伏安法 设置足够的阴极电位区间,在1M H2SO4溶液中做一个快速的循环伏安曲线,使金属表面循环吸氢放氢。同样地,如果电位区间是足够的阳极电位区间,铂表面会形成氧化层,然后在还原过程中会被清除。电位快速扫描将帮助清洁铂表面。典型的电位范围是-0.65VSCE~0.85VSCE
基因探针的标记方法
为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交,有必要对探针加以标记,以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素、地高辛配体等作为标记物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。
IL2质粒DNA探针制备的操作步骤
实验概要本实验介绍了IL-2质粒DNA探针制备的详细步骤。实验步骤1. 含IL-2质粒DNA探针的提取 1) 取含IL-2质粒DNA的单个菌落置两个25ml LB培养基(含100μg/ml Amp),37℃ 220r/min 振摇过液(约16h ); 2) 取10ml菌液加200ml LB培
以大肠杆菌为材料探讨转基因植物检测的探针制备方法
以含中间载体质粒的大肠杆菌材料为例进行介绍。(一)中间载体质粒 DNA 提取(略)(二)质粒 DNA 限制酶切及探针片段回收1、操作(1)限制性内切酶消化在0.5mL Eppendorf 管中,按如下顺序及用量加入试剂,建立 20μL 酶切体系:无菌蒸馏水6μL,10倍缓冲液2μL,质粒 DNA10
小鼠肝基因组DNA制备
原理DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中,制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
小鼠肝基因组DNA制备
原理DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中,制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
Northern杂交试验指导手册(5)-RNA探针制备
五、RNA探针制备(根据the DIG system user's guide)A. 地高辛标记的体外转录试剂及其配制(试剂盒提供):10× NTP标记混合物:in Tris-HCl (pH 7.5)10mmol ATP10mmol CTP10mmol GTP6.5mmol UTP3.5mm
简述探针标记方法
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´;端核苷酸,同时在3´;端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分
利用单拷贝基因组探针及染色体彩绘方法进行荧光原位...
利用单拷贝基因组探针及染色体彩绘方法进行荧光原位杂交(FISH)实验材料 SSCD-PBSA糖原RNase多聚甲醛甲酰胺试剂、试剂盒 固定液乙醇杂交缓冲液标记探针橡胶乳黏剂封固剂实验步骤 含有重复序列探针的沉淀:大分子量黏粒探针往往含有重复序列,如果在杂交前不能封闭这些序列,将导致严重的非特异性杂交
李峰团队发展新型蛋白质AIE纳米点光学探针制备方法
2001年,香港科技大学教授唐本忠团队发现了一种与传统聚集淬灭相反的现象,称为聚集诱导发光(aggregation-induced emission, AIE)现象,其主要原理是由于分子内运动受到限制,导致非辐射衰减渠道被抑制,辐射衰变增强而发光。与传统的有机染料相比,AIE荧光材料具有抗光漂白
材料基因组方法制备出钝感高能炸药分子
记者27日从中国工程物理研究院化工材料研究所获悉,该所含能材料基因研究中心的含能分子创制团队已首次运用材料基因组方法,实现对新型钝感高能炸药分子的快速设计与筛选,并成功通过两步法制备一种新型钝感高能炸药分子,这是材料基因组思想首次在炸药研制领域的成功范例。目前,该研究成果已在线发表于《自然·通讯
生物素酰化探针的制备实验——切口平移法
在标准的切口平移实验体系中,生物素-11-dNTP取代了dNTP,DNA酶I 的浓度调整到可生成长100~500个核苷酸的范围,其他生物素酰化的核苷酸也可代替生生物素-11-dNTP。实验材料DNA试剂、试剂盒DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材注射器电
动物细胞基因组DNA的制备
实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA的制备原理及操作流程。本方法一般可从5×107培养的非整倍体细胞(如HeLa细胞)中获得大约200μg DNA。DNA的长度可达到100~150kb。20ml正常血的DNA产量约为250μg。实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组
一种包裹二维材料的原子力显微镜探针制备方法
本发明的实施例提供一种包裹二维材料的原子力显微镜探针制备方法,涉及原子力显微镜探针的修饰与加工技术领域。本发明实施例提供的方法,能够在空气或真空中,在500℃的环境中能稳定粘附在针尖上,可以在空气和真空中应用于原子力显微镜实现各种原子力显微镜图像的获取;可以应用于对二维平面材料的表面性能
基因探针的标记方法介绍
为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交,有必要对探针加以标记,以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素、地高辛配体等作为标记物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。
关于探针标记方法的介绍
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´;端核苷酸,同时在3´;端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分
基因探针的标记方法介绍
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,同时在3´端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分子DNA标记,(>100
哺乳动物中制备基因组DNA实验——制备DNA
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。实验材料动物组织试剂、