原生质体转化中peg8000可以高压灭菌吗吗
拟南芥作为模式植物在生物学研究中有着十分重要的作用和极大的优势。本文以Columbia野生型拟南芥为材料,用酶解法对拟南芥叶肉进行原生质体分离,用PEG介导的转化法将外源基因转化到原生质体中进行瞬时表达。文章着重分析了影响拟南芥叶肉原生质......阅读全文
PEG8000融化的气味对人体有害吗
PEG-8000只要在150度分解条件以下熔化对人体无毒，它和4000相近是常见于药品胶囊外壳的组成助剂之一，全系列分子量打开包装时会嗅到一股疑似酸不拉叽的气味是聚乙二醇自身味道对健康没有危害类似乙醇和乙酸。工业级可能要您去咨询一下生产厂商是否含有其他杂质。
聚乙二醇PEG8000怎样溶解与水相容
聚乙二醇是聚环氧乙烷与水的加聚物，简称"PEG"。分子量在700以下者，在20℃时为无色无臭不挥发粘稠液体，略有吸水性；分子量在700～900之间者为半固体;分子量1000及以上者为浅白色蜡状固体或絮片状石蜡或流动性粉末。随着分子量的提高，其水溶性、蒸汽压、吸水性和有机溶剂的溶解度等相应下降，而凝固
原生质体转化中peg8000可以高压灭菌吗吗
拟南芥作为模式植物在生物学研究中有着十分重要的作用和极大的优势。本文以Columbia野生型拟南芥为材料,用酶解法对拟南芥叶肉进行原生质体分离,用PEG介导的转化法将外源基因转化到原生质体中进行瞬时表达。文章着重分析了影响拟南芥叶肉原生质
慢病毒的浓缩与纯化——PEG8000浓缩法
实验概要本实验介绍了用PEG-8000浓缩法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。主要试剂1. NaCl2. PEG8000主要设备1. 高压灭菌锅2. 0.45μm滤头3. 高速离心机4. 低温冰箱实验步骤1. 5X PEG8000 NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在2
DNA的重组连接
目的：了解T4DNA连接酶的几种生物学功能及用途；学习在T4DNA连接酶的作用下，载体与目的基因的几种不同的连接方式以及在标准的连接反应体系中，质粒载体和插入的外源DNA的比率关系和各自的用量；掌握用Pmd18-Tvector与PCR产物进行T-A克隆的机理及其应用。原理：外源DNA片段和线状质粒载
大量提取质粒DNA（CsCl－密度梯度离心法）
大量提取质粒DNA（CsCl 密度梯度离心法） 2010-7-7大量提取质粒DNA（CsCl 密度梯度离心法）李渊越1. 预约摇床、超速离心机。2. 配 TB 培养基（1L 锥形瓶中装250 ml 培养液），并灭菌。质粒做好转化，并涂板。3. 第一天早上，往 TB 中加入适量的Amp 或Kana。挑
平端DNA连接的优缺点、要求条件和实验步骤
T4噬菌体DNA连接酶不同于大肠杆菌DNA连接酶，它可以催化平端DNA片段的连接（Sgaramella和 Khorana，1972;Sgaramella和Ehrlich，1978），由于DNA很容易成为平端，所以这是一个极为有用的酶学物性。有了这样的物性，才能使任何DNA分子彼此相连。优点：1、
PCR产物常规纯化方法
大批量、廉价、用于测序的PCR产物纯化方法--PEG沉淀 最近，摸索了一下PEG沉淀PCR产物的方法，贴出来，与大家共享。 目的：探索一种方法，能将PCR产物大批量地、廉价地、纯度比较高地纯化出来，并且最好能去掉200bp以下的小片段DNA，用于DNA测序。 有文献和方法说，不同浓度的PEG能沉淀不
慢病毒的浓缩与纯化
实验概要本文介绍了慢病毒浓缩与纯化的两种方法：超速离心沉淀法，PEG-8000浓缩法。实验材料慢病毒上清液实验步骤超速离心沉淀法： 1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟； 2. 每个Ultra-clear SW28离心管中
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 乙醇 氯化钠 苯酚 醋酸钠 TE 琼脂糖凝胶 原始的重组 M13 噬菌体
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液乙醇氯化钠苯酚醋酸钠TE琼脂糖凝胶原始的重组 M13 噬菌体单链 DNAYT 培养基仪器、耗材 Corex 离心机管巴斯德滴管柱层析树脂大肠杆菌菌株 CJ236大肠杆菌菌株 TG1JM109 或相当的菌株实验步骤 材料缓冲液和溶液各种贮存液，缓冲液和试剂成分请参阅附录 1。
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
经典的 Kunfcel 寡核苷酸指导的诱变方法利用大肠杆菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特异地筛除去含尿嘧啶碱基的 DNA 的选择性作用（请参考寡核苷酸诱变信息栏）。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒缓
慢病毒的浓缩与纯化
方法一 超速离心沉淀法1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一
纯化质粒（碱裂解法）
1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心机上离心 2 分钟以沉淀大肠杆菌。吸掉培养液。4. 用 100 μl 葡萄
脉冲场凝胶电泳的分子质量标准
实验方法原理 PFGE 用于分离很大的 DNA 分子，因而需要很高分子质量的标准。这种标准可以按照 Lauer 等（1977 ) 介绍的方法从噬菌体，如 T7 (40kb)、T2 (166kb）和 G (758kb) 提取获得。但是一个更好的覆盖范围更广的系列标准是 λ 噬菌体 DNA
荀鲁盈/谷立川合作团队在常规DNA克隆技术取得重要进展
DNA组装作为一种方便快捷高效的DNA克隆手段在已经在生物学领域得到广泛的应用。各种商业化的组装试剂盒更是层出不穷。其中，著名的Gibson组装（NEB）是DNA组装技术的奠基之作，因其最初被用于人造生命构建而闻名遐迩【1】。Gibson方法功能强大，一开始被用于100Kb大片段组装。后来由于其
脉冲场凝胶电泳的分子质量标准
实验方法原理 PFGE 用于分离很大的 DNA 分子，因而需要很高分子质量的标准。这种标准可以按照 Lauer 等（1977 ) 介绍的方法从噬菌体，如 T7 (40kb)、T2 (166kb）和 G (758kb) 提取获得。但是一个更
酶切、回收、连接－常识（5）
一．单选题1．用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤维素膜，该裂缝长度与DNA条带相比应（C）A． 略短 B. 等长 C. 略长 D. A或B都可 E . A、B、C都可2．用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA片段时，再区带
纯化DNA实验_纯化质粒（碱裂解法）
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LB葡萄糖缓冲液乙酸钾仪器、耗材离心管实验步骤1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心
脉冲场凝胶电泳的分子质量标准
PFGE 用于分离很大的 DNA 分子，因而需要很高分子质量的标准。这种标准可以按照 Lauer 等（1977 ) 介绍的方法从噬菌体，如 T7 (40kb)、T2 (166kb）和 G (758kb) 提取获得。但是一个更好的覆盖范围更广的系列标准是 λ 噬菌体 DNA 的系列串联体。后面介绍的具
酵母剪接体分析实验（一）
实验方法原理 前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋白复合体，它由 5 种 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白组成，每一种 snRNP 由一个 snRNA 和几种蛋白质构成。试剂、试剂盒 Tris HCI 溶液EDTATE乙酸钠SDSRNA 的匀浆缓冲液RNA 的溶解缓冲液T
腺病毒系统使用指南（二）
2.2 rAAV shRNA克隆服务 维真生物为您提供了多种表达shRNA的rAAV，包括U6或H1启动子和作为哺乳动物表达标记的GFP或RFP。同时，也可根据您感兴趣的基因提供shRNA设计服务。2.3 rAAV载体容量腺相关病毒载体能够感染分裂和非分裂细胞。毒性和免疫原性低，适合以相对较高的转染
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验（一）
实验方法原理 噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合，在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白，即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料 载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒 抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂
大肠杆菌质粒DNA的提取实验_碱裂解法
实验方法原理碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离它们。在碱性pH环境，DNA变性，当恢复中性并在高盐离子浓度时，绝大多数质粒DNA可以准确复性，留在上清中；而线性染色体DNA不能准确复性，相互交联缠绕附着在细胞壁碎片上与蛋白质发生沉淀。离心后获得大量质粒的上清液，利用
P1噬菌体及其克隆系统的应用
实验方法原理 P1 噬菌体与 λ 噬菌体同年被发现（Bertani 1951)。两种噬菌体在天然宿主中都是温和噬菌体，它们在实验室的研究历程也几乎相同。λ 噬菌体一经被发现，立刻就被当时有影响的实验室选作分子水平研究溶原性噬菌体的模型。
P1噬菌体及其克隆系统的应用
实验方法原理 P1 噬菌体与 λ 噬菌体同年被发现（Bertani 1951)。两种噬菌体在天然宿主中都是温和噬菌体，它们在实验室的研究历程也几乎相同。λ 噬菌体一经被发现，立刻就被当时有影响的实验室选作分子水平研究溶原性噬菌体的模型。实验材料 限制性内切核酸酶大肠杆菌菌株试剂、试剂盒 乙醇IPTG
双水相萃取水蛭多肽的方案
双水相萃取 3.1 双水相萃取的原理及特点 3.1.1 双水相萃取的原理 双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配，但萃取体系的性质不同。当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等)的存在和环境因素的影响，使其在上、下相中的浓度
DNA连接试验
当我们已经获得目的基因片段，选择好适当的克隆（或表达，转化）质粒载体， 并确定重组方案后，下面要进行的就是ＤＮＡ片段之间的体外连接，从而获得重组子。 此重组子可转入相应的宿主菌中用于对目的基因的扩增以及目的基因表达（如现代基因工程药物的生产），还可用于序列分析和转基因等重要生物技术的研究中。 DNA
毕氏酵母氯化锂转化法
试剂1M LiCl 50% PEG3350 (氯化锂转化法只能PEG3350,不能用PEG8000,PEG3350在北京莱博生物有售,80元/100克)2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA）-20℃保存注：醋酸锂对毕
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤2
10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6)50mmol/K MgCl250mmol/L二硫苏糖醇500μg/ml 牛血清白蛋白（组分Ｖ.Sigma产品）（可用可不用）该缓训液应分装成小份，贮存于－20℃。另外，再设立两个对照反应，其中含有（1）只有质粒载体；（