原生质体培养的意义
①植物原生质体是细胞无性系变异和突变体筛选的重要来源;②植物原生质体是细胞融合工作的基础;③植物原生质体是植物遗传工程的理想受体和遗传饰变的理想材料;④在细胞生物学与遗传理论研究上的应用。......阅读全文
简述原生质体融合的原理
植物体细胞杂交(plant somatic hybridization),又称原生质体融合(Protoplast fusion )是指将植物不同种、属,甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合,然后进行离体培养,使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁,未脱壁的两个细胞是很难融合的,植物细胞只有
原生质体的鉴定方法介绍
即检验所获得的原生质体是否是真正的原生质体(1)低渗胀破法:把原生质体放入低渗透溶液中,在显微镜下观察原生质体从低渗溶液中吸水胀破的过程。如果是真正的原生质体,因为没有细胞壁,这样在胀破后留下的残迹应该是无形的。如果原生质体还带有部分细胞壁,则原生质体从无壁部分吸水向外膨胀直至胀破,破碎后留下的残迹
诱导原生质体融合的方法
诱导原生质体融合的过程中可用的方法有三种:物理法、化学法、生物法。将不同植物体细胞放在一起培养,必须通过一定的技术手段进行人工诱导。诱导方法有物理法和化学法两大类。物理法就是利用离心、振动、电刺激等促使原生质体融合;化学法是用聚乙二醇等试剂作为诱导剂诱导细胞的原生质体融合,聚乙二醇简称为PEG;诱导
PEG介导的原生质体转化
PEG介导的原生质体转化法是通过PEG的介导作用将遗传因子转入受体细胞原生质体中的一种方法,原生质体的制备与再生是转化的关键,此外CaCl2也是不可或缺的成分。目前,多数丝状真菌的转化以原生质体作为感受态细胞,在一定浓度的CaCl2和PEG等条件下和需转化的外源DNA混合完成的。因此,PEG介导的原
植物原生质体的特点介绍
植物原生质体具有以下的特点: ①无细胞壁的物理障碍; ②能获得遗传性状和生理性状较一致的细胞群体; ③植物原生质体同样具有全能性; ④用组织培养方法可进行大量繁殖。 这些有利的特征决定了原生质体是一个极好的实验体系,在植物育种上有广泛用途。
原生质体融合的原理是什么?
原生质体融合即植物体细胞杂交,是指将植物不同种、属,甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合,然后进行离体培养,使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁,未脱壁的两个细胞是很难融合的,植物细胞只有在脱去细胞壁成为原生质体后才能融合,所以植物的细胞融合也称为原生质体融合。 根据融合时细胞的完整程
关于玉米原生质体的提取方法
一、酶解液的组成:1 纤维素酶0.7% 果胶酶0.5% 山梨醇14% 氯化钙5mmol•L-1, pH5.8二、漂洗液的组成:山梨醇14%,硝酸钾 1mmol•L-1, 磷酸二氢钾0.2 mmol•L-1, 氯化钙0.5 mmol•L-1,硫酸铜0.01 µmol•L-1三、材料预处理: 取黄化叶片
原生质体融合的发展与研究
1960年,Cocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功;1970年,Power首次用硝酸钠进行为诱导剂进行了较大规模的原生质体诱导融合;1971年,Nagata和Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株;1972年,Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种,这也是
原生质体融合的融合过程介绍
将植物细胞A与植物细胞B用纤维素酶和果胶酶处理,得到不含细胞壁的原生质体A和原生质体B,运用物理方法或是化学方法诱导融合,形成杂种细胞,再利用植物细胞培养技术将杂种细胞培养成杂种植物体。①杂交时间:植物细胞杂交是从细胞融合开始,到培育成的新植物体结束。a.原生质体制备:用酶解法去除细胞壁(纤维素酶和
影响原生质体融合技术的因素
首先,原生质体质量对细胞的融合起着至关重要的作用,高质量的原生质体是细胞融合的首要条件。其次,融合方法其三是融合参数,包括各种融合液都应选择适当。c.方法:物理方法(离心、振动、电激)、化学方法(聚乙二醇)。d.杂种细胞的筛选和培养:机械法、生理法、遗传法。e.杂种细胞的再生和鉴定:由愈伤组织再培养
原生质体融合的发展趋势
1、 诱导融合及杂种细胞的各种生理、生化、遗传机理的研 究2、电融合的程序化控制研究3、 各种类型原生质体(胞质体、核质体、细胞器)的制备技术研究4、 杂种细胞培养技术的程序化研究
关于原生质体黏菌的简介
原生质体黏菌的特色是没有单一细胞,而形成一整团的原生质。其生活史可分为二倍体时期与单倍体时期。 二倍体时期从两个单倍体细胞经由配子生殖形成合子开始,之后合子进行有丝分裂之后,会形成拥有许多细胞核,但是只有一团原生质的原生质团,称为变形体(plasmodium)。变形体发展成熟之后,会形成网状型
原生质体的其他结构相关分布
高尔基体(golgi apparatus)主要分布在细胞核的周围或上方,是由两层膜所构成的平行排列的扁平囊泡、小泡和大泡(分泌泡)组成。植物细胞中,高尔基体的功能是合成和运输多糖,并且能够合成果胶、半纤维素和木质素,参与细胞壁的形成,还与溶酶体的形成有关,初级溶酶体的形成过程与分泌颗粒的形成类似
原生质体分离常用的酶制剂
常用的酶制剂有:纤维素酶有Cellulase Onozuka R-10,Cellulase Onozuka RS,Cellulase。果胶酶有Pectolyase Y23,Macerozyme,Pectinase等。半纤维素酶有Rhozyme Hp-150,大多数植物分离原生质体时,纤维素酶浓度在1
植物原生质体的分离和融合
实验概要本实验介绍了原生质体分离的方法及利用PEG原生质体融合的原理和方法。实验原理植物原生质体是除去细胞壁后为原生质所包围的“裸露细胞”,是开展基础研究的理想材料。其中酶解法分离原生质体是一个常用的技术,其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成,因而使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶能降
原生质体的再生有哪些过程
原生质体再生过程是指分离、纯化的原生质体在适当的培养方法和良好的培养条件下,很快恢复细胞壁,再生细胞持续分裂形成细胞团,最后或通过愈伤组织或通过胚状体分化出完整植株的过程。
酵母原生质体制备实验
原生质体由原生质分化形成,具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器。植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等,而细菌如核糖体、拟核等。实验材料酵母试剂、试剂盒YPD酵母消解缓冲液山梨醇抽提缓冲液贮存缓冲液液氮仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 将酵母菌接种于YPD培养基(
什么是原生质体融合技术
原生质体融合(protoplast fusion)指通过人为的方法,使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合,借以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程。意义:打破了微生物的种界界限,可实现远缘菌株的基因重组。可使遗传物质传递更为完整、获得更多基因重组的机会。可与其他育种方法相结合,如把常规诱变和
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天,将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中,于30℃培养过夜(如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养)。2. 转化前一天晚上,从5 ml 过夜培养
真菌原生质体(protoplast)制备技术
1. 灭菌物品: (1) 大滤纸: (2) 灭菌针筒(含脱脂棉和玻璃钎维) (3) 脱脂棉 (4) 离心管 (5) 无菌ddH2O (6) 0.6M MgSO4 (7) 培养基: A. 等渗培养基(RCM):麦芽汁 1%,酵母膏 1%,蛋白胨 0.4%,葡
原生质体的细胞核的介绍
除细菌和蓝藻外,所有的植物细胞都含有细胞核,通常一个细胞只具有一个细胞核。细胞核位于细胞中央,一般呈圆形、卵圆形,或稍伸长,也有其他形状的,如某些植物花粉的营养核为不规则裂瓣。细胞核大小相差很大,直径般为10~20um,在光学显微镜下可以观察到,经过固定和染色后可以看到其内部构造,有核膜、核仁、
原生质体的细胞膜相关介绍
细胞膜又称质膜,是指细胞质与细胞壁相接触的一层生物膜,在光学显微镜下不可见,须采用高渗溶液处理后发生质壁分离时,能在是原生质体表面看到一层光滑的薄膜。细胞膜的主要功能包括选择透性和调节代谢等。选择透性表现在能阻止可溶性蛋白质和糖等多种有机物从细胞内渗出,同时又能使水、无机盐和其他的必需营养物质进
原生质体分离的基本原则
原生质体分离的最基本原则是保证原生质体不受伤害及不损害它的再生能力。
影响原生质体分离的因素(酶法)
从理论上讲,只要用适当的酶处理,就能从任何活组织中分离得到原生质体。但是对于原生质体培养来说,要得到活性高、能进行分裂、形成愈伤组织、最后再生完整植株的原生质体则受许多因素的影响。
关于原生质体的现生特性介绍
融合后的原生质体具有生物活性,但不具有细胞壁,无法表现优良的生产性状,不能在普通培养基上生长,必须设法让它长出细胞壁,所以将重新形成细胞壁的过程称为再生。再生培养基必须具有与原生质体内相同的渗透压,常用含有Ca2+、Mg2+或增加渗透压稳定剂的完全培养基。把融合的原生质体涂布于添加渗透稳定剂的高
关于原生质体融合的历史进展介绍
1960年,Cocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功; 1970年,Power首次用硝酸钠进行为诱导剂进行了较大规模的原生质体诱导融合; 1971年,Nagata和Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株; 1972年,Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的
植物原生质体融合的原理及进展
摘要 本文对植物的原生质体融合技术得研究进展进行了综述。阐述原生质体制备、培养方面的研究进展,随后介绍了原生质体融合方法、融合机理和融合方式等的研究进展,最后对其今后的应用前景进行了展望,为原生质体融合技术的发展提供了参考。 关键词 原生质体 融合技术 研究进展 01 — 原生质体制
原生质体融合技术有哪些原理
多年来,都用有性杂交方式改良作物品种,但多数情况下,有性杂交种局限于栽培品种或是一些近缘野生种同栽培品种间的杂交。因此,种间隔离限制了作物改良上有性杂交的应用。20世纪70年代兴起的一项新技术——原生质体融合,是使分离下来的不同亲本的原生质体在人工控制条件下,像性细胞受精作用那样相互融合成一体。它使
原生质体融合技术有哪些原理
多年来,都用有性杂交方式改良作物品种,但多数情况下,有性杂交种局限于栽培品种或是一些近缘野生种同栽培品种间的杂交。因此,种间隔离限制了作物改良上有性杂交的应用。20世纪70年代兴起的一项新技术——原生质体融合,是使分离下来的不同亲本的原生质体在人工控制条件下,像性细胞受精作用那样相互融合成一体。它使
拟南芥原生质体制备转化方法
实验概要本实验介绍了拟南芥原生质体制备转化操作流程。主要试剂1. 纤维素酶解液:试剂15ml酶液体系11-1.5﹪ Cellulase R10 (YaKult Honsha)0.225g干粉20.2-0.4﹪ Mecerozyme R10 (YaKult Honsha)0.045g干粉30.4M m