酵母原生质体制备实验
原生质体由原生质分化形成，具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器。植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等，而细菌如核糖体、拟核等。实验材料酵母试剂、试剂盒YPD酵母消解缓冲液山梨醇抽提缓冲液贮存缓冲液液氮仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 将酵母菌接种于YPD培养基（100 ml 到20 L），剧烈摇动或强制通气条件下培养至对数中期（OD600≈1~5）。培养物在预称重的离心瓶中于4℃， 1 500 g 离心5 min。 2. 确定酵母细胞的湿重，它与压紧的细胞体积大致相同。在所有的后续步骤中菌体的量将当作1体积来考虑。 3. 细胞用2~4体积冰水重悬，并立即于4℃，1 500 g 离心5 min，加入1体积含30 mmol/l DTT的酵母消解酶缓冲液重悬细胞、室温放置15 min。4. 于4℃，1 500 g 离心5 min，菌......阅读全文
酵母原生质体制备实验
原生质体由原生质分化形成，具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器。植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等，而细菌如核糖体、拟核等。实验材料酵母试剂、试剂盒YPD酵母消解缓冲液山梨醇抽提缓冲液贮存缓冲液液氮仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 将酵母菌接种于YPD培养基（
酵母原生质体制备
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD酵母消解缓冲液山梨醇抽提缓冲液贮存缓冲液液氮仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 将酵母菌接种于YPD培养基（100 ml 到20 L），剧烈摇动或强制通气条件下培养至对数中期（OD600≈1~5）。培养物在预称重的离心瓶中于4℃， 1 500 g 离
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养过夜（如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养）。2. 转化前一天晚上，从5 ml 过夜培养
植物原生质体的制备
实验材料 油菜或菠菜或烟草试剂、试剂盒 氯化钙、蒸馏水、2蔗糖、酶解液仪器、耗材 显微镜、离心机、离心管、剪刀、镊子、吸管、培养皿、载玻片、盖玻片
概述原生质体的制备
原生质体是植物或微生物细胞去掉壁以后的内含物。原生质体的制备主要是在高渗压溶液中加入细胞壁分解酶，将细胞壁剥离，结果剩下由原生质膜包住的类似球状的原生质体，它保持原细胞的一切活性。 制备原生质体首先需要选择供融合的两个亲株。要求亲株的性能稳定并带有遗传标记，一般以营养缺陷型和抗药性等遗传性状为
植物原生质体的制备
植物原生质体的制备可以用于：（1）由于其具有再生细胞壁，进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力；（2）具有摄取外源大分子、细胞器，以及细菌，病毒的能力，因此是进行遗传操作，基因转移的好材料；（3）通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，培育出新品种。实验方法原理去掉植物细胞
植物原生质体的制备
原生质体是指植物细胞去掉细胞壁的裸露部分。它在培养条件下，①具有再生细胞壁，进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有摄取外源大分子、细胞器，以及细菌，病毒的能力，因此是进行遗传操作，基因转移的好材料；③通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，培育出新品种。 实验原理
真菌原生质体（protoplast）制备技术
1． 灭菌物品： （1） 大滤纸: （2） 灭菌针筒（含脱脂棉和玻璃钎维） （3） 脱脂棉 （4） 离心管 （5） 无菌ddH2O （6） 0.6M MgSO4 （7） 培养基： A. 等渗培养基（RCM）：麦芽汁 1%，酵母膏 1%，蛋白胨 0.4%，葡
拟南芥原生质体制备转化方法
实验概要本实验介绍了拟南芥原生质体制备转化操作流程。主要试剂1. 纤维素酶解液：试剂15ml酶液体系11-1.5﹪ Cellulase R10 (YaKult Honsha)0.225g干粉20.2-0.4﹪ Mecerozyme R10 (YaKult Honsha)0.045g干粉30.4M m
G.灵芝原生质体的制备与再生
实验概要G.灵芝原生质体的制备与再生，对G.灵芝原生质体单核化十分重要。本实验主要介绍G.灵芝原生质体的制备与再生方法。灵芝有两种不同类型的菌丝（单倍体菌丝和二倍体菌丝）。利用原生质体再生的方法可以分离成一个单细胞，也许只含一套染色体。首先，我们把菌丝体消化成单个原生质体。然后，稀释成适当浓度的原生
为什么制备原生质体时全是细胞碎片
制备原生质体由于细胞壁的解除和壁压的消失将引起细胞破碎，因而在酶液、原生质体洗涤液及培养液中必须调整渗透压，维持细胞内外渗透压平衡，防止细胞涨破或过分收缩而破坏内部结构。渗透压稳定剂还可促进分离的原生质体再生细胞壁并继续分裂。
植物学技术：植物原生质体的制备
原生质体是指植物细胞去掉细胞壁的裸露部分。它在培养条件下，①具有再生细胞壁，进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有摄取外源大分子、细胞器，以及细菌，病毒的能力，因此是进行遗传操作，基因转移的好材料；③通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，培育出新品种。 实验原理去
原生质体制备的菌体的预处理介绍
在使用脱壁酶处理前，先用化合物对菌体进行预处理，有利于原生质体制备。例如用乙二胺四乙酸（elhylene diamine tetraacetic acid，EDTA）、甘氨酸、青霉素等处理细菌，可使菌体的细胞壁对脱壁酶的敏感性增加。EDTA能与金属离子形成络合物，避免金属离子对酶的抑制作用而提高
简述原生质体制备的时间和温度内容
反应温度 温度会影响酶的活性，温度升高，酶活性增加，温度过高，酶失活而影响原生质体的形成，一般温度在20~ 40℃。 [3] 酶解时间 原生质体的形成与酶解时间密切相关，酶解时间过短，原生质体形成不完全，会影响原生质体间的融合；酶解时间过长，原生质体的质膜也易受到损伤，从而影响原生质体的再
原生质体制备的脱壁酶的简介
细菌和放线菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，可以用溶菌酶来水解细胞壁。 真菌细胞壁组成较复杂，常用蜗牛酶、纤维素酶、口一葡聚糖酶等来水解细胞壁。酶浓度过低，不利于原生质体的形成，酶浓度增加，原生质体的形成率亦增大，酶浓度过高，则导致原生质体再生率降低。所以，有必要兼顾原生质体形成率和再生率选择最适的
细菌原生质体融合
一、目的要求: 了解原生质体融合技术的原理. 学习并掌握以细菌为材料的原生质体融合技术. 二、基本原理: 原核微生物基因重组主要可通过转化、转导、接合等途径,但有些微生物不适于采用这些途径,从而使育种工作受到一定的限制.1978 年第三届国际工业微生物遗传学讨论会上,有人提出
原生质体的概念
原生质体（Protoplast）：指采用机械或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞。
细菌原生质体融合
一、目的要求: 了解原生质体融合技术的原理. 学习并掌握以细菌为材料的原生质体融合技术. 二、基本原理: 原核微生物基因重组主要可通过转化、转导、接合等途径,但有些微生物不适于采用这些途径,从而使育种工作受到一定的限制.1978 年第三届国际工业微生物遗传学讨论会上,有人提出微
原生质体的培养
原生质体（Protoplast）：指采用机械或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞。一、原生质体的应用 由于没有细胞壁，原生质体为作物遗传改良和植物学研究提供了极为有利的试验材料。原生质体可以用于下面几种研究。1. 用作细胞杂交服务于作物改良2. 用作遗传转化的对象3. 研究细胞壁的发生过程4. 筛选
原生质体的纯化方法
原生质体的纯化方法：沉降法、漂浮法、界面法。
原生质体融合的原理
两个具有不同遗传性状的细胞，采用适宜的水解酶溶解细胞壁后，在自发情况或融合剂作用下，两个原生质体接触，融合成为异核体，经过繁殖复制进一步核融合，形成杂合二倍体，再经过染色体交换产生重组体，达到基因重组的目的，并在适宜的条件下再生出细胞壁，对重组体进行生产性能、生理生化和遗传特性分析获得所需重组子。其
原生质体融合的原理
定义:原生质体融合就是将两个亲株的细胞壁分别通过酶解作用加以剥除,使其在高渗环境中释放出只有原生质膜包被着自球状原生质体。然后将两个亲株的原生质体在高渗条件下混合,由聚乙二醇助融,使它们相互凝集,通过细胞质融合接着发生两次基因组之间的接触、交換、遗传重组,在再生细胞中获得重组体原生质体融合技术简介.
什么叫原生质体融合
原生质体是去掉细胞壁的植物细胞，原生质体融合就是植物细胞的融合。常用的方法有振动，电击，离心，聚乙二醇（PEG）处理等。先用纤维素酶和果胶酶处理原植物细胞，得到原生质体再在培养液中使用上述方法进行融合。这种方法的原理是细胞的流动性。当细胞核完成融合，并且重组细胞重生出细胞壁后，就表明杂种细胞已成功得
原生质体的应用介绍
由于没有细胞壁，原生质体为作物遗传改良和植物学研究提供了极为有利的试验材料。原生质体可以用于下面几种研究。1. 用作细胞杂交服务于作物改良2. 用作遗传转化的对象3. 研究细胞壁的发生过程4. 筛选突变体5. 膜的结构、运输、激素接受位点等的研究6. 用于分离细胞器和大分子7. 种质资源保存
原生质体培养的意义
①植物原生质体是细胞无性系变异和突变体筛选的重要来源；②植物原生质体是细胞融合工作的基础；③植物原生质体是植物遗传工程的理想受体和遗传饰变的理想材料；④在细胞生物学与遗传理论研究上的应用。
原生质体的活力测定
检验原生质体是活细胞还是死细胞染色法：①二乙酸荧光素（FDA）法：FDA本来没有荧光，当其进入细胞后被脂酶分解为具有荧光的极性物，不能透过质膜，而是留在细胞内发出荧光。因此能发出荧光的是具有活性的原生质体。②酚藏花红染料法:具有活性的原生质体均不着色，而死去的原生质体立即染成红色。③伊文思蓝染色法：
酵母菌细胞融合实验
实验概要学习酵母菌原生质体制备和再生技术，为了解酵母菌为材料的外源基因转移等技术奠定基础。实验原理酵母菌如酿酒酵母，在遗传学和分子生物学的研究中有很大作用，尤其是近些年来，随着科技的进步，酵母菌的遗传操作如转化、基因克隆和外源基因在酵母受体中的表达等技术都有了突破性的进展。作为受体系统的酵母菌原生质
植物原生质体制备及转化试剂盒使用说明
植物原生质体是指脱去全部细胞壁由质膜包被的具有生命活力的裸露细胞。它具有细胞生命特征和全能型，是细胞无性系变异和突变体筛选的重要来源，同时也是植物遗传工程的理想受体和遗传改良的理想材料。酶解法分离原生质体是一个常用的技术，其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成，因而使用纤维素酶、半纤维
原生质体制备的渗透压稳定剂的介绍
原生质体对溶液和培养基的渗透压很敏感，在低渗透压溶液中，原生质体将会破裂而死亡，必须在高渗透压或等渗环境中才能维持其生存。渗透压稳定剂的种类有无机盐和有机物，无机盐包括NaCl、KC1、MgSO4、CaCl2等。有机物包括蔗糖、甘露糖、山梨醇等。不同微生物采用的渗透压稳定剂也不同，对于细菌和放线
酵母蔗糖酶的制备实验
研磨法 实验方法原理 蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranosidefructohydrol