单克隆抗体的提纯实验过程
1．材料(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液20mMol/LNaCl(2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液40mMol/LNaCl(3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液80mMol/LNaCl(4)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液(5)饱和硫酸铵液(6)DEAE—纤维素柱2．操作方法（1）小鼠腹水用冷PBS液稀释4倍后，于1.00×105转离心30min，去沉淀。（2）在4℃于上清中缓缓滴加饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使溶液最终为50%硫酸铵浓度。（3）此溶液置冰中30min~60min，然后5000r/min离心10min，去上清。（4）将沉淀溶于Tris－HCl缓冲液（40mMol/LNaCl）中（溶液可能混浊）。（5）装入透析袋于Tris－HCl缓冲液（20mMol/LNaCl）中透析除盐。单克隆抗体制备流程（6）离心去沉淀。（......阅读全文
单克隆抗体的提纯实验过程
1．材料(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液20mMol/LNaCl(2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液40mMol/LNaCl(3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液80mMol/LNaCl(4)20mMol/LpH7.8~
单克隆抗体的提纯实验
1．材料(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 20mMol/LNaCl (2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 40mMol/LNaCl (3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 80mMol/LNaCl (4)
概述单克隆抗体的提纯实验
1、材料(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 20mMol/LNaCl (2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 40mMol/LNaCl (3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 80mMol/LNaCl (4)
单克隆抗体的蛋白质的提纯的应用
单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集
重结晶提纯实验
实验方法原理 意义：从有机合成反应分离出来的固体粗产物往往含有未反应的原料、副产物及杂质，必须加以分离纯化，重结晶是分离提纯纯固体化合物的一种重要的、常用的分离方法之一。适用范围：它适用于产品与杂质性质差别较大、产品中杂质含量小于5 %的体系。原理：利用混合物中各组分在某种溶剂中溶解度不同或在同一溶
重结晶提纯实验
实验方法原理意义：从有机合成反应分离出来的固体粗产物往往含有未反应的原料、副产物及杂质，必须加以分离纯化，重结晶是分离提纯纯固体化合物的一种重要的、常用的分离方法之一。适用范围：它适用于产品与杂质性质差别较大、产品中杂质含量小于5%的体系。原理：利用混合物中各组分在某种溶剂中溶解度不同或在同一溶剂中
简述单克隆抗体在蛋白质提纯方面应用
单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，
IgG的分离与提纯实验
实验方法原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液
单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处死小
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大，它不仅被广泛应用于生化和免疫检测，而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。 动物免疫 取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原（20 μg/只），第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化，0.2 mL/只
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体
单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物选择免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处
单克隆抗体的纯化实验——单克隆抗体的纯化实验
1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。 3. 依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所
单克隆抗体技术的制备过程
1.免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处死小
简述单克隆抗体的制备过程
1.对小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠产生免疫反应；2.得到相应的B淋巴细胞；3.将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，再用特定的选择培养基进行筛选；4.在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长（这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖又能产生专一的抗体）5.
单克隆抗体的融合过程介绍
1．试剂与材料(1)供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。(2)1640培养液100ml。(3)完全1640液100ml。(4)2.5%FCS－1640液50ml。(5)HAT培养液100ml。(6)50%PEG：取分子量4000，高纯度的（日本进口或Serva）PEG10g放入25ml瓶中高压灭菌，使用前
概述单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用二
详解单克隆抗体的制备过程
单克隆技术又名杂交瘤技术。由G.KÖhler和Milstein1975年创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。 单克隆抗体的制备过程主要有以下六个环节，具体为抗原指标、免疫动物选择、免疫程序的确定、免疫、细胞杂交与选择培养。下面详细介绍单克隆抗体制备过程每一
实验室分离与提纯的原则
1、引入的试剂一般只跟杂质反应； 2、后续的试剂应除去过量的前加的试剂； 3、不能引进新物质； 4、杂质与试剂反应生成的物质易与被提纯物质分离； 5、过程简单，现象明显，纯度要高； 6、尽可能将杂质转化为所需物质； 7、除去多种杂质时要考虑加入试剂的合理顺序； 8、如遇到极易溶于水
关于单克隆抗体的制备过程介绍
1.免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用二
单克隆抗体的纯化实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris腹水液宁酸盐缓冲液甘氨酸乙酸盐缓冲液仪器、耗材超滤器滤膜实验步骤1. 将10 ml 经CNBr活化Sepharose 4B溶胀于1 mmol/l HCl中，然后转移至玻璃沙漏斗中，并用：①200~500 的1 mmol/l HCl和②200~500 ml 偶联缓冲
单克隆抗体的纯化实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 Tris腹水液宁酸盐缓冲液甘氨酸乙酸盐缓冲液仪器、耗材 超滤器滤膜实验步骤 1. 将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。2. 腹水浓稀释于3倍体
单克隆抗体的鉴定实验
1．杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。2．单克隆抗体的类型、亚型的测定：购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清，采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书
单克隆抗体的制备实验
单克隆抗体的制备实验可以用于：（1）将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交， 获得既能产生抗体， 又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体；（2）该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo
高温提纯法提纯石墨的方法介绍
石墨的熔点为3850℃±50℃，是自然界熔沸点最高的物质之一，远远高于杂质硅酸盐的沸点。利用它们的熔沸点差异，将石墨置于石墨化的石墨坩埚中，在一定的气氛下，利用特定的仪器设备加热到2700℃，即可使杂质气化从石墨中逸出，达到提纯的效果。该技术可以将石墨提纯到99.99%以上。高温法提纯石墨影响因素较
实验室常用的提纯与分离方法
提纯是指将混合物净化除去其杂质，得到混合物中的主体物质，提纯后的杂质不必考虑其化学成分和物理状态。混合物的分离方法有许多种，但根据其分离本质可分为两大类： 1、化学分离法 2、物理分离法 下面就混合物化学分离及提纯方法归纳如下：分离与提纯的原则 1.引入的试剂一般只跟杂质反应;
单克隆抗体技术的操作过程
动物免疫(1) 抗原制备。制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应 根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说，抗原的来源有限，或性质不稳定，提纯时易变性，或其免疫原性很强，或所需单抗是用于抗