分光光度计应用比色法蛋白质定量介绍
蛋白质通常是多种蛋白质的混合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。......阅读全文
分光光度计的常见用途
核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37
分光光度计常见用途
核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37
分光光度计的主要用途
核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37
蛋白质定量常用方法
1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法 由于各种蛋白质分子中上述两种氨基酸的组成比例不同,特别是白蛋白含色氨酸为0.2%,而γ-球蛋白中含量达2%-3%,导致较大的差异。Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu2+,集中原法和双缩脲反应两者的作用,使呈色灵敏度提高。其中75%的呈色依赖
蛋白质定量常用方法
1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法 由于各种蛋白质分子中上述两种氨基酸的组成比例不同,特别是白蛋白含色氨酸为0.2%,而γ-球蛋白中含量达2%-3%,导致较大的差异。Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu2+,集中原法和双缩脲反应两者的作用,使呈色灵敏度提高。其中75%的呈色依
蛋白质定量实验步骤
(1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品,可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度(microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比值太高, 可能会增加反应混合物的 PH 而导致反应背景较高
蛋白质定量技术――iTRAQ
摘要:同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术,具有较好的定量效果、较高的重复性,并可对多达四种不同样本同时进行定量分析。研究人员采用iTRAQ蛋白质定量技术加速蛋白质的定量研究,当然这门新兴的工具仍然需要进一步的完善。 仅仅知道蛋白质的身
视比色法介绍
目视比色法是标准系列法。这种方法就是使用一套由同种材料制成的,大小形状相同的平底玻璃管 ( 称为比色管 ) ,于管中分别加入一系列不同量的标准溶液和待测液,在实验条件相同的情况下,再加入等量的显色剂和其他试剂,至一定刻度 ( 比色管容量有 10 , 25 , 50 , 100 等几种 ) ,然后从管
目视比色法与光电比色法的介绍
目视比色法常用的目视比色法是标准系列法,该法采用一组由质料完全相同的玻璃制成的直径相等、体积相同的比色管,按顺序加入不同量的待测组分标准溶液,再分别加入等量的显色剂及其他辅助试剂,然后稀释至一定体积,使之成为颜色逐渐递变的标准色阶。再取一定量的待测组分溶液于一支比色管中,用同样方法显色,再稀释至相同
蛋白质芯片的应用介绍
基因表达的筛选AngelikaL.等人从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片,用特异性的抗体对其也进行检测,结果的准确率在87%以上,而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63%。与原位滤膜相比,用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆,灵敏度可达到pg级。抗原抗体检测在Ca
72型分光光度计原理
一、构造原理及结构 72型分光光度计是可见光分光光度计,波长范围为420nm~700nm,它由三大部分组 成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。 72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律,它是根据相对测量原理工作的,即先选定某一溶剂作为标准溶液,设定其透光率为100%
72型分光光度计原理
一、构造原理及结构72型分光光度计是可见光分光光度计,波长范围为420nm~700nm,它由三大部分组 成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律,它是根据相对测量原理工作的,即先选定某一溶剂作为标准溶液,设定其透光率为100%,被测试样的透光率是
超微量分光光度计的应用领域
超微量分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器,主要设计用于生命科学实验室蛋白质组学和基因组学下述应用领域: 核酸的定量 核酸的定量是超微量分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不
紫外可见分光光度计的应用——定量分析
一、定量分析方法( 一) 绝对法 目前, 绝对法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用最多的一种方法。这是一种以比耳定律A =εbC为基础的分析方法, 某一物质在一定波长下ε值是一个常数, 石英比色皿的光程是已知的, 也是一个常数。因此, 可用紫外可见分光光度计在λm ax 波长处,
CPSA-2013分会:目标蛋白质组学——蛋白质定量的创新和应用
2013年4月25日,上海CPSA 2013各个分会在浦东淳大万丽酒店不同宴会厅同期举行。本次在宴会厅Rhine厅的会议主要围绕目标蛋白质组学——蛋白质定量的创新和应用展开专题讨论。 美国匹兹堡大学的Nathan Yates先生 首先,来自美国匹兹堡大学的Nathan
分光光度计在核酸蛋白测量中的应用
摘要:分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。 分光光度计的简单原理 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与
分光光度计在核酸蛋白测量中的应用
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成
分光光度计在核酸蛋白测量中的应用
分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率zui高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,
分光光度计的应用介绍
分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液 仪器、耗材 微量滴定板分光光度计或酶联仪 实验步骤 材料与设备 牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液) Bradford 试剂(Coomassi
尿液蛋白质定量检测操作
先做尿蛋白定性试验,以适当稀释标本。在试管中加入100μl标本,再加入1 ml三氯乙酸一丽春红-S应用液,混匀后以3 000 r/min离心15分钟,吸去上清液,倒置于洁净滤纸上。在沉淀中加入0.2 mol/L氢氧化钠溶液l ml,用560 nm波长测定其吸光度,查标准曲线的蛋白含量。
尿液蛋白质定量检测方法
丽春红-S法 尿液标本中的蛋白质与丽春红-S染料混匀后一起被三氯醋酸沉淀,将沉淀物溶解于碱性溶液中,此时溶液呈紫色,显色深度与蛋白质浓度成正比。 试剂三氯乙酸-丽春红-S试剂原液:称取丽春红-S 1.0 g,加入到1 000 ml 300 g/L三氯乙酸中溶解。 三氯乙酸-丽春红-S试剂应
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂 牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 Tris-缓冲盐溶液 仪器、耗材
蛋白质的定量测定方法
一、微量凯氏(kjeldahl)定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例,其反应式如下:NH2 CH2 COOH+3H2 SO4 ――2CO2 +3S
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤 材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液)Bradford 试剂(CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)
蛋白质的定量测定方法
一、微量凯氏(kjeldahl)定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例,其反应式如下:NH2 CH2 COOH+3H2 SO4 ――2CO2 +3S
分光光度计的原理及使用注意事项
分光光度计是实验室常规分析设备,主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。它利用光谱分析方法对样品进行定性、定量分析,在现代分子生物实验室中常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量等。分光光度计又称光谱仪(spectrometer),是采用一个可以产生多个波长的光源,通过
基因分型定量检测技术的应用介绍
【1】传染病的快速诊断及监测:未来的传染病爆发后的检测主要依靠基因芯片的快速初筛及诊断,做到24 h内明确病因,为防疫工作者提供可靠的数据,是指导控制疫情的必要手段。【2】分子流行病学资料分析:对于一些病因机制不清、病原体相关资料缺乏的传染病可以用基因芯片进行研究,为历史上爆发的传染病之间的联系提供
关于超微量分光光度计
分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。由于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量样本量很小,于是超微量分光光度计应运而生。超微量分光光度计近年来已经替换普通的分光光度计成为分子生物学实验室的新宠,广泛应用于生命科学实验室蛋白质组学和基因组学等领域。 超微量分光光度计与传统分光光度计
测量蛋白质的方法水杨酸比色法
样品中的蛋白质经硫酸消化而转化成铵盐溶液后,在一定的温度和酸度条件下可与水杨酸钠和次氯酸钠作用生成蓝色化合物,可以在波长660nm处比色测定,求出样品含氮量,进而计算出蛋白质含量。