青年华人科学家Science建立CRISPR人细胞敲除体系

来自麻省理工学院,哈佛医学院,Broad研究院等处的研究人员完成了人类细胞全基因组范围内CRISPR-Cas9敲除筛选,这对于CRISPR-Cas9技术的发展具有重要意义。这一研究成果公布在12月13日Science杂志在线版上。 文章的通讯作者是麻省理工学院脑与认知科学助理教授、McGovern 脑研究所和Broad研究所核心成员张锋(Feng Zhang,音译),今年七月,Feng Zhang荣获了美国生物医学大奖:瓦利基金青年研究家奖(Vallee Foundation Young Investigator Award),奖金25万美元。其研究组研究方向为设计新的分子工具来操控活体大脑。 CRISPRs-Cas9技术成为了最近的新宠儿,这种基因组编辑技术更易于操作,也具有更强的扩展性。此前Zhang研究组曾利用细菌RNA,引导Cas9核酸酶在小鼠和人类基因组的特定基因位点上进行切割,完成了精确的目标......阅读全文

研究揭示人逆转座子LINE1靶向整合基因组机制

中国科学院生物物理研究所许瑞明、朱冰和薛愿超课题组合作,系统揭示了人逆转座子LINE-1靶向整合基因组的重要机制。该研究刷新了对LINE-1逆转座机制的认知,也为基于逆转座调控的药物研发提供了新的理论依据。相关研究成果10月9日发表于《科学》杂志。类基因组中存在大量具有“跳跃”能力的逆转座子序列。这

重组质粒的筛选(抗生素平板筛选和α互补筛选)

重组DNA转化受体细胞后,须在不同水平上进行筛选,以区别转化子与非转化子、重组子与非重组子以及鉴定所需的特异性重组子。在转化过程中,并非每个受体细胞都被转化;即使获得转化细胞,也并非都含有目的基因,所以需采用有效方法进行筛选。筛选的方法包括根据遗传表型筛选、限制性内切酶分析筛选、核酸探针筛选、PCR

用电脑筛选器筛选粮食杂质

在农业育种工作中,对粮食、油料等进行筛理分级是其中十分重要的内容,主要作用是通过筛选来检验粮食油料的杂质、不完善粒等。而随着科技的发展和育种技术的进步,现代粮食杂质筛选已经告别了繁琐复杂的手筛法,广泛采用的是电脑筛选器法。使用仪器来进行粮食杂质的筛选,不仅更加轻松,而且效率更高,检验效果更好,能够更

DSX电脑筛选器筛选粮食杂质

在粮食品质检测中,粮食筛选,容重测定等是其中重要的检测项目,容重测定一般使用容重器就可以完成,而粮食筛选也可以使用仪器完成,我们推荐是使用DSX电脑筛选器。该仪器是专为粮食杂质筛选而研制开发的专用仪器,其标准符合GB5494-85《粮食油料检验杂质、不完善粒检验法》国家标准,属于新标准仪器产品,使用

青年华人科学家Science建立CRISPR人细胞敲除体系

  来自麻省理工学院,哈佛医学院,Broad研究院等处的研究人员完成了人类细胞全基因组范围内CRISPR-Cas9敲除筛选,这对于CRISPR-Cas9技术的发展具有重要意义。这一研究成果公布在12月13日Science杂志在线版上。   文章的通讯作者是麻省理工学院脑与认知科学助理教授、McGo

科学家提出急性红白血病的基因组分型及其靶向治疗

  近日,圣犹大儿童研究医院等科研人员在Nature Genetics上发表了题为“Genomic subtyping and therapeutic targeting of acute erythroleukemia”的文章,提出了急性红白血病的基因组分型,为进一步开展该疾病的靶向治疗提供理论依

改进的CRISPRCas9,可靶向整个基因组中的任何位点

  许多基础研究人员和临床研究人员正在测试利用一种简单有效的基因编辑方法来研究和校正导致从失明到癌症等各种疾病的致病突变的潜力,但是这种技术受到一定限制,即必须在基因编辑位点附近存在某个较短的DNA序列。  如今,来自美国麻省总医院(MGH)的研究人员对这个基因编辑系统进行了改进,使得它几乎不再受到

震动筛选机的筛选范围广

  震动筛选机筛选:任何颗粒、粉末、粘液一定范围内均可筛选。筛分最细至500目或O028rrlm,过滤最小可至5微米。分级筛选,可筛一至五层筛网,能同时进行二至六个等级的分选或过滤。

谷物筛选器的筛选原理是什么?

    说到筛选其实我们都不会太陌生,其实它就是根据物料粒度的不同,利用一层或数层静止的或运动的筛面对物料进行分选的方法。在种子检验领域,筛选仪器的代表就是谷物筛选器,它的作用就是用于检验颗粒粮食、油料试样的含杂率及大米中、糠粉含量,由于这些检测指标与谷物的品质息息相关,因此如果要确定谷物的品质等级

能源所建立拉曼介导靶向元基因组技术研究海洋固碳机制

  作为海洋中数量最丰富的细菌类群,Pelagibacter spp.是否在海洋中原位固定二氧化碳,业界一直众说纷纭。这一工作为该重大问题的回答贡献了崭新的证据,并提出了相应的分子机制。同时,RGM技术的建立为在各种时空尺度探讨海洋微生物组“Genome-Phenome”关联机制,奠定了方法学基础。

单细胞拉曼结合靶向宏基因组揭示土壤活性抗生素耐药组

  抗生素耐药性(AMR)在人类、环境和动植物间的传播,加剧全球“One Health”的负担。土壤是“One Health”的关键环节之一,所携带的抗生素耐药性可通过食物链等方式转移至人类而带来健康威胁。土壤中栖息着地球上最丰富多样的微生物,其中活性耐药菌在驱动土壤耐药性传播中具有关键作用。然而,

电动筛选器与谷物筛选器的区别

谷物筛选器和电动筛选器都是筛选器,用于粮食作物的筛选,包括种子的筛选。在育种、品质鉴定中都有非常大的作用。但是,电动筛选器和电动筛选器又是不同的,他们的运行机制也不同,但是功能却相似,都是为谷物筛选而准备的。下面我们就具体来介绍下电动筛选器和谷物筛选器。电动筛选器有DSX型电动筛选器,是根据GB54

CRISPR新成果:-针对长链非编码RNA的完全敲除高通量筛选

  之前的方法在效率、质量(假阳性、假阴性)上各有欠缺:比如CRISPRi的方法只能实现基因表达抑制而不是完全敲除,CRISPRa的方法只能上调基因表达,无法对基因不可或缺的作用实施筛选评估。大片段删除的策略由于步骤的繁琐,也限制了其在更大规模上得到应用。  作为强大的基因编辑工具,CRISPR/C

利用CRISPR研究基因组“暗物质”

  超过98%的人类基因组由非编码基因组成。这些非编码基因被称为基因组的“暗物质”,它们能调控编码基因的表达,从而影响人类健康和疾病进程。自从人类基因组序列被公开发表以来,科学家们努力解析基因中的功能元件,包括非编码调节区——参与转录调节的顺式调节区和非编码RNA(ncRNA)。转录因子在整个基因组

CDNA文库筛选

CDNA文库筛选(一)λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1.用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基(Y1088用于噬菌斑杂交,Y1090用于免疫筛选),于37℃振荡培养过夜。2.将过夜培养物以3000×g离心5min。3.分别用2ml λ-dil(10 mmol/L

CDNA文库筛选

(一)λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1.用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基(Y1088用于噬菌斑杂交,Y1090用于免疫筛选),于37℃振荡培养过夜。2.将过夜培养物以3000×g离心5min。3.分别用2ml λ-dil(10 mmol/L tris-Cl,

蓝白斑筛选

实验中,通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素,这样,一次筛选可以判断出:未转化的菌不具有抗性,不生长;转化了空载体,即未重组质粒的菌,长成蓝色菌落;转化了重组质粒的菌,即目的重组菌,长成白色菌落。目前很多实验室省去蓝白斑筛选的步

转化克隆的筛选和鉴定——快速PCR筛选法

实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒引物Taq酶PCR缓冲液甘油硫酸镁dNTP蒸馏水琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器微量移液取样器移液器吸头离心管双面微量离心管架制冰机恒温摇床超净工作台摇菌管PCR仪培养皿凝胶电泳仪

靶向克隆法

靶向克隆法是一种新的基因克隆方法,该克隆方法的特点是:在基因克隆过程中不使用已有的DNA Ligase,而是使用新开发的靶向克隆酶。靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链DNA(14bp-18bp)同源重组,从而达到克隆基因的目的。LP Recco酶,中文名:靶向克隆酶,无需传统基因克隆所需要的限制性内

中科院李劲松团队等筛选小鼠骨发育中的关键基因

  大规模隐性遗传筛查是一种用于鉴定生物过程基因的有效方法。这种策略在低等生物中已经成功,如酵母(酿酒酵母)和线虫(秀丽隐杆线虫)。在哺乳动物生物中,由于它们的二倍体基因组,这种功能筛选具有挑战性。RNA干扰(RNAi)目前用于通过靶向mRNA在哺乳动物细胞中进行基因组规模的功能丧失筛选;然而,这种

为什么电动筛选器不适于小样试样的筛选?

    说到电动筛选器的筛选过程,我们大多都会有这样的印象,那就是小时候父母为了筛选大豆、芝麻等粮食中的杂质,会使用竹编的筛子来进行筛选,经过筛选之后的粮食确实是干净了很多,而电动筛选器的工作原理基本上也是如此,只不过电动筛选器是采用电动的方式进行筛选,而且更加紧密,而人工筛选是采用人工,较为粗糙。

筛选稳定表达细胞株转染后多久药物筛选

稳定细胞株筛选是一个长期的过程,稳定细胞株筛选优化,有许多条件需要摸索,而且是从源头开始①在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证②高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白

谷物筛选器进行米类杂质的筛选和测定

米类中的杂质对米类的安全贮藏和食用价值及人体健康均有影响,因此,标准中对杂质有严格限制。一般所有的米类都有杂质总量的 限制规定,但总量(%)并不单是各个子项的检验结果之和。即使是一份粮食杂质总量(%)百分率合格,但若其子项杂质超过际准规定限度时,也属不合格。反之亦然。在米类中,子项杂质限制种类最多的

电动筛选器—便携式种子秕子筛选仪器介绍

目前,在测定种子发芽率、千粒重及田间考种等工作之前,均应将种子中的秕子等杂质去 除。一般去除秕子的方法是风选、水洗或人工目测剔除等。风选法适用于大批量种子的精选,小批量种子在做发芽试验或是千粒重的称重及计算时若用大型精选机则 毫无优势可言;水选及人工目测剔除法经验成份高,其比例或方法无统一标准,秕子

什么是分子靶标

分子靶标是以研究疾病发生、发展过程中细胞分子生物学上的差异(包括基因、酶、信号转导等不同特性)为基础,筛选和鉴定与疾病密切相关的蛋白质、核酸、酶、受体等生物分子作为药物作用的靶点,通过研究药物设计和构效关系得到靶向特异性生物分子的先导化合物,通过靶向给药控释系统实现有效靶向给药及个体化治疗。分子靶标

利用BARBEKO高通量筛选,实现非依赖DNA双链断裂基因敲除

  基于CRISPR-Cas的功能性筛选技术为基因功能研究和药物靶点发现提供了有力手段。经典的CRISPR敲除筛选方法依赖于Cas9介导的双链DNA断裂。然而,DNA双链断裂的产生如果修复不及时会造成严重的细胞损伤。因此,Cas9靶向基因组多拷贝位点时极易引起细胞死亡,从而影响基因功能筛选的准确性。

华人先锋《Nature-Methods》利用CRISPRi绘制遗传互作图谱

  斯坦福大学亓磊(Lei Stanley Qi)教授早年毕业于清华大学,现任斯坦福大学生物工程学、化学和系统生物学系的助理教授,近年来他在CRISPR研究领域取得了一系列突破性进展,比如第一次采用CRISPR-Cas9系统的变种技术,改变了读取诱导多能干细胞(iPSCs)基因组的方式(由此入选了生

免疫筛选实验

根据抗原-抗体相互作用的原理从群体中选出目的物的技术。如用抗体检测表达型的基因文库所合成的蛋白质,从而筛选出目的基因的克隆。实验方法基本方案 实验材料 cDNA  试剂、试剂盒 BHI 氯霉素 NaOH SSC 氯仿 异戊醇 TES SDS mRNA 甲硫氨酸 乙醇 乙酸钠 免疫沉淀缓冲液  仪器、

cDNA的筛选2

(三)免疫筛选制备Sepharose偶联细菌裂解液1.各用一个E.coli温度敏感溶源菌株(BTA 282(λgt11amp3)或BNN 97)单菌落接种于2×7.5ml培养基并于32℃生长过夜。2.过夜培养物用LB培养基稀释100倍,于32℃生长至OD600值为0.5。3.于45℃温育15min诱

cDNA的筛选3

免疫学染色1.为了洗去顶层琼脂上的残余物和细胞碎片,将硝酸纤维素滤膜一次最多5张转移放在摇床上的盘子(10×10cm)内,用25ml TBS室温洗涤10 min 2次。2.然后滤膜用25ml封闭缓冲液(每张90mm直径的滤膜至少15ml)于室温温育 30min,以封闭滤膜上的非特异性结合位点。不断晃