三篇NatureMethods：定位基因组的调控序列
科学家们利用染色质对DNase消化和Tn5转座的敏感性，对基因组的调控序列进行定位和解读。 近来越来越多的证据显示，许多遗传学差异并非直接影响基因，而是改变控制基因开/关的调控序列。近期Nature Methods杂志上发表了三篇文章，介绍了在基因组中定位调控序列的新技术，阐述了进行数据分析时面临的主要问题。 活化的调控序列上结合有转录因子，转录因子是识别特定DNA序列的蛋白。一旦转录因子结合，就会招募其他蛋白，使附近的基因开始转录。在指定细胞中鉴定所有活跃的调控序列，对于理解基因组的作用机制非常重要。 常用的染色质免疫沉淀法，直接检测与转录因子结合的DNA序列。这种方法一次只能提供一个转录因子的信息，而细胞中可能有数百个转录因子处于活跃状态。 染色质由一系列盘绕着DNA的核小体组成。转录因子与基因组结合时，取代了核小体的位置，暴露出DNA，使其对酶的切割更为敏感。在此基础上，人们可以利用染色质对......阅读全文
逆转录PCR(RTPCR)扩增基因特异片段
逆转录PCR(RT-PCR)扩增基因特异片段 一、实验原理RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中R
关于基因转录的转录因子介绍
转录因子(transcription factor)是起调控作用的反式作用因子。转录因子是转录起始过程中RNA聚合酶所需的辅助因子。真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态，RNA聚合酶自身无法启动基因转录，只有当转录因子(蛋白质)结合在其识别的DNA序列上后，基因才开始表达。转录因子的结合位点
目的基因片段与载体连接
1．目的学会DNA片段的体外连接技术。2．原理在Mg2+和ATP存在下，T4 DNA连接酶能催化载体分子的粘性末端与外源DNA的相同粘性末端联接成重组DNA分子。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式离心机，干式恒温气浴。易生物仪器库：http
目的基因片段与载体连接
实验概要本实验介绍了目的基因片段与载体连接的操作步骤，有助于学会DNA片段的体外连接技术。实验原理在Mg2 和ATP存在下，T4 DNA连接酶能催化载体分子的粘性末端与外源DNA的相同粘性末端联接成重组DNA分子。主要试剂1. T4 DNA 连接酶2. 连接酶缓冲液3. 无菌ddH2O主要设备1.
全基因能合成多长的片段？
全基因合成理论上没有长度限制。但是由于克隆技术，载体容量等因素存在，一般全基因合成长度不超过10kb。
PNAS：片段筛选发现HIV逆转录酶抑制剂
近日，来自澳大利亚的科学家在国际学术期刊PNAS发表了一项最新研究进展，他们通过研究发现了三种针对HIV-1逆转录酶的片段化抑制剂，能够有效抑制HIV-1逆转录酶活性，为HIV-1预防和治疗药物开发提供了重要信息。 基于片段筛选的方法可用于发现新的活性位点或变构抑制剂以进行治疗干预。在该项研究
基因转录后调控方式
真核生物的RNA被翻译之前需要通过核孔输出，因此核输出对基因表达有着显著影响。所有进出细胞核的mRNA的运输都是通过核孔进行的，受到各种输入蛋白和输出蛋白的控制。携带遗传密码的mRNA需要存活足够长的时间才能被翻译，因为mRNA在翻译之前必须经过很长距离的运输。在典型的细胞中，RNA分子仅在特异性保
基因转录调控的途径
可分为三种主要途径：1）遗传调控（转录因子与靶标基因的直接相互作用）；2）调控转录因子与转录机制相互作用，3）表观遗传调控（影响转录的DNA结构的非序列变化）。
目的基因片段的PCR扩增与克隆
1.PCR技术 PolymeraseChainReaction聚合酶链反应它是一种模拟天然DNA复制过程，在有DNA模板、DNA聚合酶（Taq酶）、RNA引物和四种dNTP的情况下，通过高温变性（90℃－95℃，1－2min）,低温退火（25℃－37℃，1－2min）,中温延伸（60℃－75℃，90
PCR扩增样本DNA的HLA基因片段
一、PCR扩增体系1. 1.0uM 引物2. 300ng待测样本基因组DNA3. 2.0U Taq多聚酶4. 200uM 各种dNTP5. 用1 X PCR缓冲液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2，0.01%明胶）调至总体积100ul，并用50ul矿物
小片段法进行基因分型（二）
结果： 图1显示的是校正之前的完整的熔解峰显示。 从低温和高温内标及扩增子熔解的中部区分熔解信号。图1：派生熔解曲线显示校准和扩增子的熔解峰。左边和右边的峰是校准内标的峰。94的熔解剖面图，接近76℃，从独立的PCR反应中生成。校准分子没有对其，纯合子的扩增峰没有清楚的分开。中部最窄且
大片段基因AAV递送策略有哪些？
AAV凭借其低免疫原性、高安全性及感染宿主范围广等特点，被广泛应用于各种体内研究，也成为近年来基因治疗领域最重要的一种递送载体之一，但AAV有限的荷载能力（约4.7kb）使其无法递送一些较大的基因，这在一定程度上限制了其应用范围，大基因拆分AAV递送技术的发展解决了这一难题。具体来讲，我们可以将要递
小片段法进行基因分型（一）
摘要： 背景：用于基因分型的高分辨率熔解曲线技术既简单又有效。在以熔解为基础的方法中，探针法是基因分型的黄金标准，可以将等位基因与目标的匹配完全区分开。小片段基因分型法是代替探针的基因分型法。异源双链核酸分子的存在使得检测纯合子变得容易，其熔解峰的形状有明显的改变。纯合子G/C或A/T的基
关于基因转录的基本介绍
基因转录是在细胞核和细胞质内进行的。它是指以DNA的一条链为模板，按照碱基互补配对原则，在RNA聚合酶作用下合成RNA的过程。基因转录有正调控和负调控之分。 如细菌基因的负调控机制是当一种阻遏蛋白(repressor protein)结合在受调控的基因上时，基因不表达；而从靶基因上去除阻遏蛋白
基因转录因子的相关介绍
转录因子(transcription factor)是起调控作用的反式作用因子。转录因子是转录起始过程中RNA聚合酶所需的辅助因子。真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态，RNA聚合酶自身无法启动基因转录，只有当转录因子(蛋白质)结合在其识别的DNA序列上后，基因才开始表达。转录因子的结合位点
基因表达的转录机制介绍
转录过程由RNA聚合酶（RNAP）进行,以DNA为模板,产物为RNA。RNA聚合酶沿着一段DNA移动,留下新合成的RNA链。 基因组DNA由两条反向平行和反向互补链组成,每条链具有5'和3'末端。这两条链分别称为“模板链”（产生RNA转录物的模板）和“编码链”（含有转录本序列的
关于基因转录的过程介绍
(1)基因转录— 转录的启动 DNA上存在着转录的起始信号，它是特殊的核苷酸序列，称为启动子。 转录是由RNA聚合酶全酶结合于启动子而被启动的。 其机理是：s因子能识别启动子，并识别有义链，它与核心酶结合，引导核心酶定位到启动子部位。 (2)基因转录— 转录的起始 当聚合酶结合到启动子
“垃圾DNA”片段是如何开启或关闭基因？
普林斯顿大学的研究人员近日捕捉到一段视频，显示曾被认为是“垃圾DNA”的片段如何开启或关闭基因。这段视频和成果于周一发表在《Nature Genetics》上。 在人类基因组中，未编码基因的DNA片段占90%以上。过去，它们被认为是“垃圾DNA”，但是后续的研究证实，这些片段包含了开启或关闭基
PCR为什么能扩增特意的基因片段
pcr扩增～获得大量的目的片段～只有这样才便于目的片段的分离和纯化～要知道现在的分离纯化手段dna损失50%都算少的
冰冻“木乃伊”中发现天花病毒基因片段
法国、俄罗斯和丹麦研究人员在美国新一期《新英格兰医学杂志》上报告说，他们在俄罗斯西伯利亚地区的几具死于300多年前的冰冻“木乃伊”中检测出了天花病毒的基因片段。这一发现有助于研究者深入了解天花的演化史。 天花是世界上传染性最强的疾病之一，于1979年被彻底消灭。目前仅有美国和俄罗斯的两个实
RNA干扰（转录后基因沉默）实验
RNA干扰 实验方法原理 1. 病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsR
基因表达转录调控的主要途径
基因表达转录调控可分为三种主要途径:1)遗传调控(转录因子与靶标基因的直接相互作用);2)调控转录因子与转录机制相互作用,3)表观遗传调控(影响转录的DNA结构的非序列变化)。
关于基因表达的转录机制介绍
基因表达的转录过程由RNA聚合酶（RNAP）进行，以DNA为模板，产物为RNA。RNA聚合酶沿着一段DNA移动，留下新合成的RNA链。 基因组DNA由两条反向平行和反向互补链组成，每条链具有5'和3'末端。这两条链分别称为“模板链”（产生RNA转录物的模板）和“编码链”（含有转
使用转录定位法进行基因定位
许多 RNA病毒的整个基因组往往作为一个单位转录。随着转录的进行，由基因组上各个基因所编码的蛋白质也依序在寄主细胞中出现。当寄主细胞被紫外线照射使本身的蛋白质合成受到抑制时，病毒蛋白的出现更为明显。紫外线照射也起着抑制病毒基因组的转录的作用。紫外线在 RNA分子的某一部位造成损伤后，损伤的部位和它后
基因转录图的结构或功能
转录图基因转录图即是把细胞内染色体或DNA上所有基因定位在染色体或DNA基因组的不同位置上，反映在 正常或受控条件下能够表达的cDNA片段数目、种类、结构与功能的信息，是用来表示DNA上哪些核苷酸序列可以编码蛋白质。生物性状是由结构或功能蛋白决定的，功能蛋白是由信使RNA（mRNA）编码的，mRNA
基因表达的转录调控的介绍
可分为三种主要途径： 1）遗传调控（转录因子与靶标基因的直接相互作用）； 2）调控转录因子与转录机制相互作用； 3）表观遗传调控（影响转录的DNA结构的非序列变化）。 通过转录因子直接调控靶标DNA表达是最简单和最直接的转录调控改变转录水平的方法。基因的编码区周围通常都具有几个蛋白质结合
关于基因表达的转录调控介绍
基因表达的转录调控可分为三种主要途径：1）遗传调控（转录因子与靶标基因的直接相互作用）；2）调控转录因子与转录机制相互作用，3）表观遗传调控（影响转录的DNA结构的非序列变化）。 通过转录因子直接调控靶标DNA表达是最简单和最直接的转录调控改变转录水平的方法。基因的编码区周围通常都具有几个蛋白
用CRISPR实现基因转录活体成像
最近，日本的一个研究小组开发出一种实时成像方法，用于内源基因转录活性和核定位的同步测量。研究人员用该方法来检测亚基因组范围的流动性变化，这取决于小鼠胚胎干细胞中多能性相关基因的活性。 Hiroshi Ochiai博士和他的同事Takeshi Sugawara博士、Takashi Yamamoto
RNA干扰（转录后基因沉默）实验
RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。目前主要用于（1）特异性剔除或关闭特定基因的表达 （2）探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗 （3）使
基因诊断的扩增片段长度方法的介绍
多态性小卫星DNA和微卫星DNA的长度多态性可以通过PCR扩增后电泳来检出，并用于致病基因的连锁分析，这种诊断方法称为扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism，Amp-FLP）连锁分析法。PCR扩增后，产物即等位片段之间的差别有时只有几个核