张学礼等丁二酸细胞工厂构建及高效合成机制解析获进展
丁二酸是一种优秀的平台化合物,在化工、材料、医药、食品领域有着广泛的用途,被美国能源部列为未来12种最有价值的平台化合物之一。作为C4平台化合物,其可用于合成1,4-丁二醇、四氢呋喃、γ-丁内酯以及生物可降解材料聚丁二酸丁二醇酯(PBS)。构建高效生产丁二酸的微生物细胞工厂,将可再生的生物质资源高效转化为丁二酸,是近年来国际上的研究热点。 中国科学院天津工业生物技术研究所的张学礼研究员课题组结合理性遗传改造和进化代谢技术,构建出高效生产丁二酸的大肠杆菌细胞工厂HX024,糖酸转化率达1.36 mol/mol,为理论最大转化率的80%。在此基础上,通过全基因组测序、转录组分析及酶活分析,解析了细胞工厂HX024高产丁二酸的分子机制。研究发现丙酮酸脱氢酶PDH的E3编码基因lpdA发生突变,突变的lpdA基因导致酶活比野生型提高了26倍,解除了NADH对PDH酶活的抑制,从而为厌氧合成丁二酸途径提供更多的还原力。另一方面,丁二......阅读全文
代表委员热议成果转化:转化热情难激发-转化链条难运转
19年后,《中华人民共和国促进科技成果转化法》迎来大修。 国务院法制办相关负责人曾表示,本次修法着重解决两方面问题:科研组织实施与市场需求的结合还不够紧密;科研机构和科技人员考核评价体系存在着重理论成果、轻成果运用的现象。 该法修正案草案在十二届全国人大常委会第十三次会议上经过初次审议,向社
科技成果转化核心是“人的转化”
当前,科技成果转化已成为创新链向产业链延伸的关键环节。近年来,北京、深圳、苏州等地相继启动“概念验证中心”建设,以概念验证(PoC)机制推动早期科研成果对接市场。然而,从全国范围来看,高校科研成果仍存在“转化率低、落地难”的问题。据国家知识产权局《2022年中国专利调查报告》数据,我国高校发明专
质粒的转化及转化子的鉴定实验
实验方法原理 热激法:大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42 ℃短时间热冲击处理,促进细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中,重组子基因得到表
过程工程所在丁二酸分离过程膜污染机理研究方面取得进展
利用发酵途径生产化学品能够减少对于石化资源的依赖,减轻环境污染。丁二酸是一种重要的平台化合物,广泛用于食品、药品、化妆品,以及合成生物可降解聚合物聚丁二酸丁二醇酯(PBS)等。分离纯化步骤多,成本高严重限制了生物基丁二酸的工业化。因此,开发高效的分离纯化方法是实现生物基丁二酸工业
关于2,3二羟基丁二酸的同源异构体介绍
酒石酸有两个相同的手性碳原子,有三种立体异物体(左旋体(L-酒石酸)、右旋体(D-酒石酸)、内消旋体)。左旋酒石酸与右旋酒石酸为对映异构体。天然存在的酒石酸都是右旋体。右旋型酒石酸以游离的钾盐、钙盐、镁盐的形态广泛分布于高等植物中,特别是多存在于果实和叶中。在制造葡萄酒时,会沉积大量酒石(氢钾盐
烟草转化实验
实验材料烟草细胞:BY-2实验步骤1. BY-2 细胞培养BY -2 细胞悬浮培养在摇床上,避光,温度260 C,转速130r pm,每7天将 1m l 细胞转入20m l新鲜的液体培养基中继续培养。BY -2 愈伤组织生长在固体培养基上,每3-4周继代一次。转基因的悬浮细胞和愈伤组织生长在含相应抗
电转化流程
电转化流程适用于(1)转基因(2)基因介导(3)基因修复。实验方法原理胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔 (electroporation),是把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的重要方法。 在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的通透性,带
病毒转化细胞
实验概要病毒转化细胞实验步骤1.血液制备:柠檬酸(Citric Acide)或肝素抗凝取血1~2ml,分装入管中,每管0.5ml全血,置于4℃冰箱中30分钟。2.EBV病毒转化:从液氮中取出冻存的0.5ml全血,在37℃水中迅速解冻。3.将解冻细胞与10ml不含血清的RPMI 1640混合,2500
酵母转化实验
实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开
重组DNA转化
目的:在体外连接组装而成的重组DNA分子只能转入合适的受体细胞,才能大量地进行复制、增殖和表达。通过实验学会重组DNA转化的最基本的操作以及如何提高转化效率的基本思路。 原理:带有外源DNA片段的重组体分子在体外构建成后,需要导入适当的宿主细胞内进行繁殖或表达出具有一定生物活性的蛋白。能够作为重组体
电转化流程
一、电转化感受态细胞的制备1.用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照)2.37℃,220rpm,培养14-16个小时。3.第二天,以1:100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中,37度,220rpm,振摇2-3小
酵母转化实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天,接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中,于30℃恒温摇床,培养过夜。 2. 转化的前一天晚上,往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD
电转化流程
一、电转化感受态细胞的制备1.用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照)2.37℃,220rpm,培养14-16个小时。3.第二天,以1:100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中,37度,220rpm,振摇2-3小
电转化流程
一、电转化感受态细胞的制备1.用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照)2.37℃,220rpm,培养14-16个小时。3.第二天,以1:100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中,37度,220rpm,振摇2-3小
拟南芥的转化
实验概要本实验采用花浸泡法利用农杆菌介导将目的基因转入拟南芥。主要试剂YEB液体培养基,LB培养基,0.1 M CaCl2,0.05 M MgSO4,花浸泡缓冲液(0.5XMS,5%蔗糖,0. 03%Silwet L-77 ),Rif,Kan主要设备摇床,离心机,培养钵,温室,托盘,塑料薄膜实验材料
质粒转化步骤
质粒的转化,满满干货原理:在受体细胞经过化学试剂或者电击处理等方法处理后,受体细胞的膜通透性发生改变,质粒DNA或者以其为载体的重组DNA分子,进入到细菌体内而实现扩增。感受态细胞:是指细胞自然或者经过诱导处于容易吸收外源DNA的一种生理状态。在基因工程中,用于转化的受体菌(Restriction-
质粒转化步骤
质粒的转化,满满干货原理:在受体细胞经过化学试剂或者电击处理等方法处理后,受体细胞的膜通透性发生改变,质粒DNA或者以其为载体的重组DNA分子,进入到细菌体内而实现扩增。感受态细胞:是指细胞自然或者经过诱导处于容易吸收外源DNA的一种生理状态。在基因工程中,用于转化的受体菌(Restriction-
电转化流程
实验方法原理 胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔 (electroporation),是把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的重要方法。 在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的通透性,
中科院“先进生物制造工程菌株的构建与应用”通过验收
11月24日至25日,中国科学院重点部署项目“先进生物制造工程菌株的构建与应用”验收会在山东寿光召开。来自国内高校、企业、院内研究所的9位专家组成验收专家组。 24日下午,专家组及与会人员现场考察了山东兰典生物科技股份有限公司、山东寿光巨能金玉米有限公司的丁二酸、D-乳酸工业规模生产线及两家企
科技成果转化难?华东师大特设“转化门诊”
近日,华东师范大学在上海市科委的指导下联合技术转移专业机构,设立了“科技成果转化门诊”。华东师范大学副校长施国跃介绍,设立“转化门诊”是进一步推进科技成果转化的创新举措与积极实践。旨在打造一个集专业性、针对性与前瞻性于一体的服务平台,为科研人员提供从策略规划到实践操作的全方位、多维度支持与定制化解决
致癌化学物转化细胞:转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验
实验概要致癌化学物转化细胞实验步骤1.取材:妊娠后第13天取材,取数个同窝胚胎,去头和内脏,在无菌条件下剪碎至米粒大小,再用0.25%胰蛋白酶(含0.01%EDTA)37℃消化30分钟,滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入1875px/培养瓶中,接种密度10~20×106/
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_LiAc转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒腺嘌呤亮氨酸LiAc仪器、耗材YEA 平板实验步骤1. 在 YEA 平板上培养细胞直到长成可见单菌落。2. 接种单菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等营养缺陷互补物的 YEA 或 PM 培养基中,于允许温度以 200 r/min 振荡培养防止酵母菌沉积
大肠杆菌转化实验——高效率电转化法
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LBSOC仪器、耗材电转化仪离心机分光光度计实验步骤1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养液,37℃温和振摇培养5 h 或过夜。2. 将2.5 ml 培养物加人到盛有500 ml LB培养液的2 L 烧瓶中,37℃摇匀振荡培养至OD600为0.5~0.6。 3.
转化序列的概念
中文名称转化序列英文名称transforming sequence定 义起变化作用的基因或序列。应用学科遗传学(一级学科),发育遗传学(二级学科)
什么是能量转化
功是能量转化的量度。物体做功的过程是能量转化的过程,如起重机把重物吊起,对重物做功的过程就是电能转化为机械能的过程。你把一个物体从一楼提到三楼,对物体做功,你身体中的化学能消耗一部分转化为物体的机械能。1.功的概念:(1)定义:物体受到力的作用,并在力的方向上发生一段位移,就说力对物体做了功。(2)
氮气转化的方法
有三种将游离态的N2(大气中的氮气)转化为化合态氮的方法:生物固氮:是指固氮微生物将大气中的氮气转换成氨的过程 ,一些共生细菌(主要与豆科植物共生)和一些非共生细菌能进行固氮作用并以有机氮的形式吸收。工业固氮:在哈伯-博施法中,N2与氢气被化合生成氨(NH3)肥。化石燃料燃烧:主要由交通工具的引擎和
细菌转化的发展
例如,把肺炎双球菌RⅡ型无毒株和加热至60℃被杀死的SⅢ型有毒株,混合注射至小鼠体内,结果在小鼠体内出现了生活的SⅢ型有毒株,使小鼠患病死亡。并且这种具荚膜的有毒株能世代相传保持其特性。细菌转化现象最初由英国细菌学家格里菲斯(F.Griffith)于1928年发现,直至1944年美国科学家埃弗里
细菌转化的简介
细菌转化是指某一受体细菌通过直接吸收来自另一供体细菌的含有特定基因的脱氧核糖核酸(DNA)片段,从而获得了供体细菌的相应遗传性状,这种现象称为细菌转化。细菌转化是细菌的融合的一种形态,亦即某一菌株(供体菌)的一部分遗传性状移到另一菌株(变体菌)的一种遗传杂交形态。转化是指外源DNA,即从供体菌抽
胆固醇的转化
胆固醇在体内不被彻底氧化分解为CO2和H2O,而经氧化和还原转变为其它含环戊烷多氢菲母核的化合物。其中大部分进一步参与体内代谢,或排出体外。胆固醇在体内可作为细胞膜的重要成分。此外,它还可以转变为多种具有重要生理作用的物质,在肾上腺皮质可以转变成肾上腺皮质激素;在性腺可以转变为性激素,如雄激素、雌激
转化序列的概念
中文名称转化序列英文名称transforming sequence定 义起变化作用的基因或序列。应用学科遗传学(一级学科),发育遗传学(二级学科)