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实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基，然后接种适量的过夜培养液，再于30℃培养过夜，到细胞密度为1×107 细胞/ml （OD600≈0.3~0.5，依据菌株而定）， 为了获得2~3倍高的转化效率，用YPAD稀释培养液至细胞密度为2×106细胞/ml。然后培养生长2~3代（2~4 h）。 3. 培养液在室温条件下，4 000 g 离心5 min，收集细胞。细胞用10 ml 无菌超纯水重悬，然后转移到一个更小一些的离心管中，再于室温下，5 000~6 000 g 离心5 min......阅读全文
实验材料 载体和酵母菌 试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 SD
实验概要本实验介绍了酵母表达载体的构建、酵母转化方法及酵母抗逆实验。主要试剂试剂配制：1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml)：12.1g Tris碱，加80 ml ddH2O，浓HCl调pH 7.5，定容至100 ml；2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml
作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一, 蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。 蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。 蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相层析, 经典的蛋白质鉴定方法如氨
作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一, 蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。 蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。 蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相
实验概要本实验将酿酒酵母作为胞内晶体蛋白的携带和表达宿主，同时，作为可能的营养体喂养海洋线虫P. redivivus将所表达的目的蛋白导入线虫机体，观察线虫的生长、发育、繁殖或是死亡情况，探讨胞内晶体蛋白对昆虫病原线虫以外的线虫是否具有营养作用。为此，首先构建一种重组大肠杆菌，其所携带的重组质粒能够
酵母双杂交系统的实验步骤 1. 将报告基因p8op-LacZ转化酵母EGY48菌株，用培养基SD/-Ura筛选。2. 同时构建DNA文库，并纯化足够的质粒以转化酵母细胞。3. 构建DNA-BD/靶蛋白质粒pLexA-X，作为钓饵（bait）。4. 将
实验概要本实验制备了酵母转化质粒，快速从转化酵母菌中分离了用于Southern分析的基因组DNA。主要试剂2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
方法转化文库1. 挑选一个在第一阶段的原始对照试验中状态最好的表达诱饵蛋白和 lexAop-lacZ 报道子的酵母菌落，接种于 20 ml CM(Glu)-Ura-His 液体培养基中，30°C 摇动过夜培养。重要：应该在用文库重新转化之前 7~10d 内，将诱饵蛋白和 lexAop-lacZ 报道
1、确定目标对象：也就是你所有转的目的物是什么东西？ 细胞系和细胞类型 细胞类型包括人类、哺乳动物、细菌、植物、藻类、霉菌、寄生虫等 细胞系包括CHO, COS, Jurkat, Saccharomyce
实验概要本实验将在构建了大蒜重金属抗性基因表达载体并转入大肠杆菌DH5α的基础上，选择鉴定准确的质粒转化酵母细胞，对转化子进行了PCR鉴定和RT-PCR分析，及重金属抗性实验。主要试剂YPD培养基，醋酸锂，PEG(50%)，乙醇，少量酵母菌总RNA快速抽提试剂盒主要设备摇床，离心机，水浴锅，PCR仪
酵母感受态细胞制备可以：（1）用于建立酵母转化体系；（2）用于酵母表达系统构建；（3）用于酵母其他分子生物学研究。实验方法实验材料酿酒酵母 试剂、试剂盒YPDA液体培养基 蒸馏水 甘油 二甲基亚砜 仪器、耗材培养皿 离心机 离心管 冰箱 实验步骤一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌
实验方法原理 实验材料 待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DN
酵母感受态细胞制备可应用于：（1）建立酵母转化体系；（2）酵母表达系统构建；（3）酵母其他分子生物学研究。实验方法原理感受态是受体最容易接受外源DNA片段并实现转化的一种生理状态，用对应化学物质处理细胞后，细胞逐渐形成感受态细胞并进行转化。化学法简单，快速，稳定，重复性好，广泛用于外源基因的转化。实
实验方法原理将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中实验材料单菌落试剂、试剂盒PLATE溶液载体DNA转化质粒DNA仪器、耗材离心管离心机实验步骤1、 用牙签从平板中挑取单菌
实验概要本实验制备了酵母感受态细胞，转化细胞在以葡萄糖为碳源的SD培养基中诱导后，对突变体进行了透射电镜观察。主要试剂SD培养基配方:12 g/L NaOH；20 g/L琥珀酸(Succinnic acid )；事先将这两种药品溶解，再加下述药品；1.7 g/L，无硫酸铵的酵母氮源(Yeast Ni
利用双杂交系统相互作用阱／筛选特定蛋白的肽适配体实验实验方法原理 实验材料 DNA酵母株试剂、试剂盒 PCR 引物聚乙二醇甘油存储液Tris·ClX-gal 平板完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板仪器、耗材 30℃ 和 42℃ 培养箱或水浴实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其
试剂1M LiCl <用去离子蒸馏水配制，0.22um滤膜过滤除菌；必要时用消毒去离子水稀释>50% PEG3350 <Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，0.45um滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装>(氯化锂转化法只能PEG3350,不能用PEG80
化学法 试剂盒制备法 实验方法原理 感受态是受体最容易接受外源DNA片段并实现转化的一种
第二阶段 筛选一个相互作用子材料缓冲液和溶液将贮存液稀释至适当的浓度二甲基亚砜（DMSO)乙醇可选择，请参见步骤 9。冻存转化体用的无菌甘油溶液65% 无菌甘油0.1mol/LMgS0425 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)TE(pH7.5)（无菌）TE(pH7.5)，含 0.
乙酸锂转化 电穿孔转化 单链高分子质量载体DNA的制备 实验方法原理
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 CM培养基乙酸锂PEGTEDMSO甘油氨苄青霉素仪器、耗材 离心机分光光度计摇床培养箱实验步骤 1. 为了转化文库，将约20 ml 含pSH18-34和pBait 的酵母菌EGY48培养液接种到Glc/CM-Ura-H
实验方法原理捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达 LexA 与目的蛋白的融合体的质粒。这种质粒转化到包含 LEU2 和lacZ 报道基因的报道酵母株中，并要行一系列的对照实验来鉴定所构建的诱饵蛋白是否适用，是否需要修饰，或是否应改变酵母菌报道条件。这些对照实验实现了诱饵蛋白在酵母菌中作为一种稳定蛋
气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）早已进入生物技术领域。而将这两种分离技术与顶空固相微萃技术 (SPME-HS) 相结合，则可用小型实验的方式在经典的顶空小瓶中对酶反应和物质转化过程方便地监测和精确地复制。 在酶和微生物反应过程中起始物质借助于生物催化剂例如酶、微生物、植物和动物细胞的作
离心机和转子Sorvall RT6000 离心机，H1000B MPC 和 H6000A MPC 转子（离心微量滴定板用）专用设备玻璃珠（直径 0.45 mm, 无菌；Sigma)微量滴定板（24 孔或 96 孔 [可选])重复用移液管可选，请参见步骤 1。附加试剂此方案的步骤 2 需要第 1 章方
实验方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达 LexA 与目的蛋白的融合体的质粒。这种质粒转化到包含 LEU2 和lacZ 报道基因的报道酵母株中，并要行一系列的对照实验来鉴定所构建的诱饵蛋白是否适用，是否需要修饰，或是否应改变酵母菌报道条件。这些对照实验实现了诱饵蛋白在酵母菌中作为
SW480 [SW-480] 人结肠腺癌细胞 酵母双杂交实验常见问题 1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？ 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于
NCI-N87 [N87]人胃癌细胞 酵母双杂交实验常见问题 1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？ 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Tr
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 1 mol L 二硫苏糖醇（DTT过滤除菌并储存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇选择平板仪器、耗材电穿孔仪：如Bio-Rad公司的带脉冲控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm间隙的一次性电穿孔槽（
实验方法原理 根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化 E. coli。实验材料 酵母细胞试剂、试剂盒 乙醇酚氯仿醋酸钠STES 缓冲液TE仪器、耗材
鉴定诱饵蛋白（半乳糖苷酶） 鉴定诱饵蛋白（LacZ 的活性分析） 相互作用蛋白捕获 实验方法原理