烟草转化实验
实验材料烟草细胞:BY-2实验步骤1. BY-2 细胞培养BY -2 细胞悬浮培养在摇床上,避光,温度260 C,转速130r pm,每7天将 1m l 细胞转入20m l新鲜的液体培养基中继续培养。BY -2 愈伤组织生长在固体培养基上,每3-4周继代一次。转基因的悬浮细胞和愈伤组织生长在含相应抗生素的培养基中。2. 用干转化的农杆菌GV3101的准备(1)接种农杆菌单菌落到2 ml新鲜的YEB液体培养基中,28“培养过;(2)取200ul培养物加到l0ml新的培养基中继续培养3-4小时:(3) '5000 rpm,离心5 min集菌,用BY-2液体培养基重悬菌体,OD为0.5左右,待用。3. 农杆蔺介导的BY-2悬浮细胞的外源基因转化(1)取生长到第3或4天的BY-2细胞4 ml,加入上述备用的农杆菌液100ul,共培养 3天;......阅读全文
烟草转化实验
实验材料烟草细胞:BY-2实验步骤1. BY-2 细胞培养BY -2 细胞悬浮培养在摇床上,避光,温度260 C,转速130r pm,每7天将 1m l 细胞转入20m l新鲜的液体培养基中继续培养。BY -2 愈伤组织生长在固体培养基上,每3-4周继代一次。转基因的悬浮细胞和愈伤组织生长在含相应抗
烟草转化实验流程
实验步骤1. BY-2 细胞培养BY -2 细胞悬浮培养在摇床上,避光,温度260 C,转速130r pm,每7天将 1m l 细胞转入20m l新鲜的液体培养基中继续培养。BY -2 愈伤组织生长在固体培养基上,每3-4周继代一次。转基因的悬浮细胞和愈伤组织生长在含相应抗生素的培养基中。2
烟草转化实验流程
实验概要烟草细胞农杆菌转化实验实验材料烟草细胞:BY-2实验步骤1. BY-2 细胞培养BY -2 细胞悬浮培养在摇床上,避光,温度260 C,转速130r pm,每7天将 1m l 细胞转入20m l新鲜的液体培养基中继续培养。BY -2 愈伤组织生长在固体培养基上,每3-4周继代一次。转基因的悬
酵母转化实验_乙酸锂转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 在开始实验前2天,接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中,于30℃恒温摇床,培养过夜。 2. 转化的前一天晚上,往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基,然后
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天,将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中,30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上,在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液,于30℃剧烈摇动培养过
酵母转化实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天,接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中,于30℃恒温摇床,培养过夜。 2. 转化的前一天晚上,往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD
酵母转化实验
实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天,将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中,于30℃培养过夜(如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养)。2. 转化前一天晚上,从5 ml 过夜培养
DNA的转化实验
体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒,选用转化和筛选技术, 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中,DNA可在生物体系中大量扩增,繁殖, 保存以及表达目的基因的产物,这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术,所获得的,不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研,医药生产和生物
烟草检验实验室仪器基本配置清单
阿贝折射仪测定透明、半透明液体或固体的折射率和平均色散白度计测试产品白度火焰光度计临床化验及病理研究紫外-可见光分光光度计测量物质对不同波长单色辐射的吸收程度,定量分析气相色谱仪定性、定量分析酸度计测PH值电阻式木材测湿仪测烟草的湿度烟草自动化学分析仪分析烟草中化学元素、成分纸张含水量测定仪测烟纸的
质粒的转化及转化子的鉴定实验——电转化法
实验方法原理电转化法:外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定,形成电穿孔,不仅有利于离子和水进入细菌细胞,也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。实验材料外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞试剂、试剂盒X-galAmpLA培养基水抗生素仪器、耗
质粒的转化及转化子的鉴定实验
实验方法原理 热激法:大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42 ℃短时间热冲击处理,促进细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中,重组子基因得到表
DNA转化实验指导4
2B. Transformation 1. Preparation of electrocompetent DH5a cells: autoclave 4 baffled 1 liter flasks containing 500 mL LB. Remove a 1 mL aliquo
DNA转化实验指导1
CONTENT Transformation-Competent E. coli preparation Inoue "ultra-competent" methodRubidium chloride methodCosmid packaging protocol DNA Ligation an
DNA转化实验指导5
2C. Notes on Transformation 1. Bacto tryptone and yeast extract can cause allergic reactions. 2. All containers used to handle the bacteria (
淋巴细胞转化实验
实验材料 肝素试剂、试剂盒 199培养液小牛血清链霉素青霉素PHA仪器、耗材 注射器针头试管吸管离心机实验步骤1. 采肝素抗凝血1~2毫升(1毫升血中加肝素20单位)充分混匀。37℃静置1~2小时。红细胞沉淀后,吸取血浆层并捎带些红细胞。移入另一无菌试管中。计算白细胞数然后2000 rpm 离心1
DNA转化实验指导2
1B. Cloning 1. A caveat on dephosphorylation: the most common reason for failure to obtain colonies is a result of adding too much BAP or CIP to
小麦花器官转化实验
实验材料小麦种子 试剂、试剂盒壮观霉素 利福平
大肠杆菌转化实验
实验方法原理 质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过42°C短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。实验材料 质粒DNA重组DNA试剂、试剂盒 LB培养基蒸馏水IPTGX-gal氨苄青霉素仪器、耗材 旋涡混
质粒-DNA-的转化实验
实验方法原理 转化活性是检测质粒生物活性的重要指标,在基因克隆技术中,转化(transformation)是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA(包括人工染色体)导入细胞的过程, 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态,用于转化的受
大肠杆菌转化实验
实验方法原理质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过42摄氏度短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。实验材料质粒DNA 重组DNA试剂、试剂盒LB培养基 蒸馏水 IPTG X-gal 氨苄青霉素仪器、耗材旋
DNA转化实验指导3
6. Simultaneous digestion of the pUC vector with both enzymes in the presence of 3 units of Shrimp Alkaline Phosphatase (Amersham BioSciences) in
耐药质粒-DNA转化实验
耐药质粒 DNA转化实验 本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆,即转化子。 【原理】 受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理,可改变细胞膜的通透性,利于受体菌对DNA的摄取,这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒
小麦花器官转化实验
实验材料小麦种子试剂、试剂盒壮观霉素利福平仪器、耗材温室或走入式生长箱奥绿肥塑料盆LB 培养基MS 培养基解剖镜巴龙霉素实验步骤一、材料1. 植物材料Crocus 或 Chinese Spring 小麦种子由美国农业部国家种质资源信息中心提供(http: // www . ars- grin .
小麦花器官转化实验
实验材料 小麦种子试剂、试剂盒 壮观霉素利福平仪器、耗材 温室或走入式生长箱奥绿肥塑料盆LB 培养基MS 培养基解剖镜巴龙霉素实验步骤 一、材料1. 植物材料Crocus 或 Chinese Spring 小麦种子由美国农业部国家种质资源信息中心提供(http: // www . ars-
大肠杆菌转化实验
热击法CaCl2转化法一步法高效率电转化法实验方法原理质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过42摄氏度短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。实验材料质粒DNA
淋巴细胞转化实验
淋巴细胞转化实验在临床上应用可用于(1)反映出受试者T细胞总体水平的应答功能,判断细胞免疫状态和探讨发病机制(2)选择适宜的移植供体(3)寻找迟发型变态反应的原因(4)估计疾病的疗效和预后。实验方法原理正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中受到特异性抗原或有丝分裂原刺激。可转化为淋巴母细胞。细胞免疫缺
质粒-DNA-的转化实验
实验方法原理转化活性是检测质粒生物活性的重要指标,在基因克隆技术中,转化(transformation)是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA(包括人工染色体)导入细胞的过程, 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态,用于转化的受体细胞一般
大肠杆菌转化实验
实验方法原理 质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过42摄氏度短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。
烟草花粉冻干机
随着真空冷冻干燥技术的出现,冻干机很好地解决了烟草杂交制种过程中的花期不遇问题,提前种植父本,并根据父本收集的量来安排母本的种植,减少了父母本种植的盲目性和土地资源的浪费,大大提高了授粉率,大幅降低成本。因此也被称为烟草花粉冻干机。 烟草花粉冻干步骤: (1)新鲜花粉的预冻处理:将新鲜花粉