DNA结合蛋白测定实验
实验材料 质粒DNA试剂、试剂盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙锭TEMED过硫酸铵BSA仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 用一种或多种限制性内切酶在100 μl 体积中消化10 μg 质粒人，产生25~100 bp 的含有结合位点的DNA片段，并至少有一端是5’突出的。2. 加100 μCi［α-32P］dNTP，4μl 5 mmol/l 3种NTP的混合液，2.5U Klenow酶。室温温育20 min。 3. 加4 μl 含有5 mmol/l 与被标记的相同的dNTP溶液，室温温育5 min。4. 沉淀DNA，溶解于TE中。 5. 加10×加样缓冲液，用2%小型琼脂凝胶（含溴化乙锭5 μg/ml）在TAE或TBE缓冲液中进行电泳。 6. 在长波透射紫外灯下观察电泳带。在带的下游切一平行......阅读全文
DNA结合蛋白测定实验
本实验主要用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白。实验方法原理本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。实验材料质粒DNA试剂、
DNA结合蛋白测定实验
实验材料 质粒DNA试剂、试剂盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙锭TEMED过硫酸铵BSA仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 用一种或多种限制性内切酶在100 μl 体积中消化10 μg 质粒人，产生25~100 bp 的含有结合位点的DNA片段，并至少有一端是5’突出的
DNA结合蛋白测定实验
实验方法原理 本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。
DNA－结合蛋白的凝胶阻滞分析实验
实验材料 作为对照的核提取物或蛋白组分核提取物或蛋白组分试剂、试剂盒 Ficoll 400聚乙烯醇蔗糖染色液10X Tris-氨基乙酸或Tris-硼酸-EDTA(TBE)缓冲液4%~7% 中性聚丙烯酰胺凝胶poly(dI-dC)32P标记的对照DNA32P标记的靶DNA仪器、耗材 杂交膜实验步骤 材
DNA－结合蛋白的凝胶阻滞分析实验
凝胶阻滞试验分析 DNA 结合蛋白的方法是 Fried 和 Crothers(1981) 发明的，它是第一次为大肠杆菌乳糖阻抑物与其 DNA 结合位点的相互作用提供了动态的分析方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料作为对照的核提取物
DNA－结合蛋白的凝胶阻滞分析实验
实验材料 作为对照的核提取物或蛋白组分 核提取物或蛋白组分 试剂、试剂盒 Ficoll 400 聚
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
可利用合成双链寡核苷酸筛选构建于λ噬菌体的 cDNA 表达文库，以鉴定与特异 DNA 结合蛋白质相对应的克隆（Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒ATP结合缓冲液变性溶
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
试剂、试剂盒 ATP 结合缓冲液 变性溶液 二硫苏糖醇 EDTA 乙醇激酶 连接酶缓冲液 酚 氯
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
试剂、试剂盒 ATP结合缓冲液变性溶液二硫苏糖醇EDTA乙醇激酶 连接酶缓冲液酚氯仿筛选缓冲液SDS醋酸钠TET4 噬菌体 DNA 连接酶T4 噬菌体多核苷酸激酶合成的寡核苷酸[a-32P]ATP非变性聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 烤盘结晶皿平头镊子装有防水黑墨水注射器硝酸纤维素滤膜Sephadex G
DNA结合蛋白的形成
它是解链酶(unwinding enzyme)类中的一种类型，发现于原核生物的大肠杆菌细胞内，由相同亚基组成的四聚体，分子量8×104，与单链DNA亲和力极大，与双链DNA结合力较差。因此，当DNA发生暂时性熔化时，它与DNA单链区结合而促使反应偏向单链的形成，使DNA在大大低于Tm(解链温度)的温
什么是DNA结合蛋白？
中文名DNA结合蛋白外文名DNA binding protein别 名螺旋失稳蛋白形 成解链酶类中的一种类型结合效应DBP与单链DNA的结合作 用该单链DNA结合和识别作用
结合DNA的蛋白质
结构蛋白可与DNA结合，是非专一性DNA-蛋白质交互作用的常见例子。染色体中的结构蛋白与DNA组合成复合物，使DNA组织成紧密结实的染色质构造。对真核生物来说，染色质是由脱DNA与一种称为组织蛋白的小型碱性蛋白质所组合而成；而原核生物体内的此种结构，则掺杂了多种类型的蛋白质。DNA可在组织蛋白的表面
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验DNA亲和介质制备
实验材料两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多核苷酸激酶（New Eng
DNA结合蛋白的磷酸化研究
磷酸化化学计量的确定及磷蛋白形成动力学的测定l 磷酸化作用化学计量的确定1．在冰上建立下列反应混合液：Tris-HCl（50mmol/L；pH8.0）/MgCl2（10mmol/L） 250μlATP（10mmol/L）
单链DNA结合蛋白的功能简介
单链DNA结合蛋白（Single-stranded DNA-binding protein，缩写SSB或SSBP）又称单链结合蛋白，是专门负责与DNA单链区域结合的一种蛋白质，为DNA复制、重组和修复所必需的成分。 防止两条互补单链再次结合为双螺旋，维持单链状态。防止单链区域形成链内二级结构。
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
用位点识别DNA筛选λgtll表达文库 用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环 从重组溶源菌中制备粗提物鉴定DNA结合蛋白的活性 实验方法原理
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环试剂、试剂盒HEPES结合缓冲液实验步骤1) 按基本方案步骤1〜15进行。2) 将平皿在4℃冷却10 min。用针扎孔标记各膜的位置。小心地揭起膜，室温下在空气中瞭干15 min。3) 将膜浸于HEPES结合缓冲液/6 mol/L盐酸狐中，4℃轻轻摇动温育10 mi
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
实验方法原理 实验材料 含有多个串联拷贝识别位点的、缺乏识别位点的（或含识别位点突变的）pUC重组质粒DNA试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶EcoRI及HhdIII1 mol L Tris • Cl pH 7. 55 mmol L dCTPdGTPdTTPdATP5000 Ci mmol [α32P]
序列特异性DNA结合蛋白的亲和层析纯化实验
DNA亲和介质的制备 DNA偶联于溴化氰活化的琼脂糖上 用制备性凝胶电泳纯化寡核苷酸 DNA亲和层析法 实验方法原理
序列特异性DNA结合蛋白的亲和层析纯化实验
实验方法原理 实验材料 两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒 TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
从重组溶源菌中制备粗提物鉴定DNA结合蛋白的活性实验材料大肠杆菌 Y1089试剂、试剂盒含有或不含10 mmol L MgCl2的LB培养液1010pfu mLλgtU重组噬菌体液1 mol L IPTG抽提缓冲液5 mg mL溶于抽提缓冲液中的溶菌酶（保存于-20℃)仪器、耗材4 mol L Na
DNA－酶－I－足迹法对－DNA－上的蛋白质结合位点作图实验
DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验 实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分
DNA－酶－I－足迹法对－DNA－上的蛋白质结合位点作图实验
实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分试剂、试剂盒 细胞匀浆缓冲液细胞重悬缓冲液细胞淋洗缓冲液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚：氯仿磷酸盐缓冲液聚乙烯醇终止液组织匀浆液组织重悬缓冲液台盼蓝染料DNA 酶 I
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验_DNA亲和层析法
实验材料制备性的DNA亲和层析树脂试剂、试剂盒缓冲液Z或其他柱缓冲液（如缓冲液Ze或TM)配制时含不同的KCl浓度（从缓冲液 Z 0.1 mol L KCl 至缓冲液 Z 1 mol L KCl对缓冲液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分纯化的蛋白质组分非特异性的竞争DNA柱再生缓冲液柱储存缓
DNA－酶－I－足迹法对－DNA－上的蛋白质结合位点作图实验
本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议，请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）
斑点滤膜结合法测定蛋白质浓度实验
斑点滤膜结合法 实验方法原理 实验材料
斑点滤膜结合法测定蛋白质浓度实验
实验材料 待测蛋白质样品 试剂、试剂盒 10％三氯醋酸（TCA）考马斯亮蓝凝胶染色液考马斯亮蓝凝胶脱色液 仪器、耗材 Whatman 3 MM 滤纸 实验步骤 1. 用铅笔在 3 mm 滤纸上画出 1 cm x 1 cm 大小的方格； 2
斑点滤膜结合法测定蛋白质浓度实验
实验方法原理 实验材料 待测蛋白质样品试剂、试剂盒 10％三氯醋酸（TCA）考马斯亮蓝凝胶染色液考马斯亮蓝凝胶脱色液仪器、耗材 Whatman 3 MM 滤纸实验步骤 1. 用铅笔在 3 mm 滤纸上画出 1 cm x 1 cm 大小的方格；2. 在每一方格中心加入 3 ul 样品；3. 将滤纸凉干
吲哚与牛血清白蛋白的结合测定实验
基本方案 实验方法原理 平衡渗透的原理可以通过经典的实验来验证。牛血清白蛋白（BSA）是一种比较廉价的大分子物质，可以大量获得。因此可以用不太灵敏的方法来测定
吲哚与牛血清白蛋白的结合测定实验
实验方法原理平衡渗透的原理可以通过经典的实验来验证。牛血清白蛋白（BSA）是一种比较廉价的大分子物质，可以大量获得。因此可以用不太灵敏的方法来测定，而无需化学转化或放射性同位素标记。结合常数 Kd 和每个白蛋白分子上的结合位点数 n 都能有效精确地获得。然而由于这种实验方法的原因可能引起误差，实验时