丹磺酰化法分析蛋白质N末端氨基酸实验
实验方法原理蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。通过聚酰胺薄膜层析分析DNS-氨基酸, 可确定蛋白质的N-末端氨基酸。此法灵敏度高, 也可用于蛋白质的氨基酸组成的测定。聚酰胺对极性物质的吸附作用是: 它能和被吸附物质间形成氢键, 这种氢键的强弱决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离物在聚酰胺表面发生吸附、解吸附、再吸附和再解吸附的连续过程, 就能导致分离物达到分离的目的。实验材料蛋白质试剂、试剂盒氨基酸丙酮丹磺酰氯盐酸碳酸氢钠甲酸水苯冰醋酸乙酸乙酯甲醇冰乙酸磷酸三钠乙醇三乙胺仪器、耗材真空干燥器水解管烘箱紫外分析灯玻璃试管聚酰胺薄膜实验步骤1. 标准氨基酸的丹磺酰化 分别称取2 . 3μmol 层析纯的氨基酸, 溶于0 . 5 ml 0 . 2......阅读全文
丹磺酰化法分析蛋白质－N末端氨基酸实验
实验方法原理蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。通过聚酰胺薄膜层析分析DNS-氨基酸, 可确定蛋白质的N-末端氨基酸。此法灵敏度高, 也可用于蛋白质的氨基酸组成的测定。聚酰胺对极性物质的吸附作用是: 它能和被吸附物质间
丹磺酰化法分析蛋白质－N末端氨基酸实验
实验方法原理 蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。通过聚酰胺薄膜层析分析DNS-氨基酸, 可确定蛋白质的N-末端氨基酸。此法灵敏度高, 也可用于蛋白质的氨基酸组成的测定。聚酰胺对极性物质的吸附作用是: 它能和被
丹磺酰化法分析蛋白质－N末端氨基酸实验
丹磺酰化法 实验方法原理 蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。通过聚酰
蛋白质一级结构的测定方法（二）
2)末端分析 其方法较多，这里我们只介绍较常用的几种。 (1)N-末端测定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。 DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后，通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸。Sanger用此方法测定了胰岛素的N末端分别为甘
丹磺酰法的定义和作用
中文名称丹磺酰法英文名称dansyl method;DNS method定 义测定氨基酸的一种方法，主要用于蛋白质肽链N端氨基酸的测定。用1-二甲氨基-5萘磺酰氯与氨基酸的α氨基反应生成发荧光的丹磺酰氨基酸，可用电泳或层析法分离鉴定是何种氨基酸的衍生物。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方
氨基酸结构和分类（二）
二、氨基酸的性质 （一）物理性质 α-氨基酸都是白色晶体，每种氨基酸都有特殊的结晶形状，可以用来鉴别各种氨基酸。除胱氨酸和酪氨酸外，都能溶于水中。脯氨酸和羟脯氨酸还能溶于乙醇或乙MI中。 除甘氨酸外，α-氨基酸都有旋光性，α-碳原子具有手性。苏氨酸和异亮氨酸有两个手性碳原子。从蛋白质水解得到的氨基酸
氨基酸结构和分类（四）
三、一级结构的测定 （一）一级结构 蛋白质的一级结构是指肽链的氨基酸组成及其排列顺序。氨基酸序列是蛋白质分子结构的基础，它决定蛋白质的高级结构。一级结构可用氨基酸的三字母符号或单字母符号表示，从N-末端向C-末端书写。采用三字母符号时，氨基酸之间用连字符（－）隔开。 （二）测定步骤 测定蛋白质的一级
成都生物所发明N亚磺酰基氨基酸酰胺化合物
不对称有机小分子催化是近年来才发展起来的新型不对称催化方法，由于其所用的手性有机小分子催化剂具有结构简单、合成容易、造价低廉、所需生产工艺简单、环境友好等特点，对该领域的研究引起了人们的高度重视。手性硫原子是一类非常有用的手性源，其已被广泛用于手性助剂和手性配体，显示出了非常优良的立体控制能力，
常用多肽修饰方法及过程综述
多肽是一种由两个或多个氨基酸通过肽键（酰胺键）连接而形成的化合物。多肽在调节机体各系统、器官、组织和细胞的功能活动以及在生命活动中发挥重要作用，并且常被应用于功能分析、抗体研究、药物研发等领域。而通过对多肽进行修饰进而改变多肽的理化性质也是多肽研究中一种常用的手段。多肽修饰种类繁多，从修饰位点不同则
蛋白质测序——Edman降解法
蛋白质测序可用于： （1）鉴定蛋白质； （2）表征蛋白质翻译后修饰。 （3）分析蛋白质一级结构与功能的关系。实验方法原理主要有质谱法，利用蛋白质测序仪进行测序以及利用蛋白质对应DNA或mRNA进行间接测序。传统的蛋白质测序实验一般包括以下步骤：1.肽链的拆开和分离；2.测定蛋白质分子中多肽链的数目；
蛋白质测序
Edman降解法 实验方法原理 主要有质谱法，利用蛋白质测序仪进行测序以及利用蛋白质对应DNA或mRNA进行间接测序。传统的蛋白质测序实验一般包括以下步骤：1
血红素结合人细胞质精氨酰tRNA合成酶并抑制其催化活力
10月5日，J. Biol. Chem.在线发表了中科院上海生命科学研究院生化与细胞所王恩多研究组研究论文：血红素结合人细胞质精氨酰-tRNA合成酶并抑制其催化活力。 人细胞质精氨酰-tRNA合成酶(hcArgRS)催化tRNAArg氨基酰化生成Arg
蛋白质测序
一、概念当前，所谓蛋白质测序，主要指的是蛋白质的一级结构的测定。蛋白质的一级结构(Primary structure)包括组成蛋白质的多肽链数目。很多场合多肽和蛋白质可以等同使用。多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.San
蛋白质测序
一、概念当前，所谓蛋白质测序，主要指的是蛋白质的一级结构的测定。蛋白质的一级结构(Primary structure)包括组成蛋白质的多肽链数目。很多场合多肽和蛋白质可以等同使用。多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.San
蛋白质测序
一、概念当前，所谓蛋白质测序，主要指的是蛋白质的一级结构的测定。蛋白质的一级结构(Primary structure)包括组成蛋白质的多肽链数目。很多场合多肽和蛋白质可以等同使用。多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.San
蛋白质测序的测定步骤
1 多肽链的拆分。由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).2 测定蛋白质分子中多肽链的数目。通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子
多肽修饰合成常用策略（二）
4、豆蔻酰化和棕榈酰化用脂肪酸酰化N末端可以让多肽或蛋白质与细胞膜结合。N末端上豆蔻酰化的序列可以使Src家族的蛋白激酶和逆转录酶Gaq蛋白靶向结合细胞膜。利用标准的偶联反应即可将豆蔻酸连接到树脂-多肽的N末端，生成的脂肽可在标准条件下解离并通过RP-HPLC纯化。5、糖基化糖肽类如万古霉素和替考拉
羧肽酶的种类及其特点
根据羧肽酶活性中心含有丝氨酸残基、金属离子和半胱氨酸残基的不同，将羧肽酶分为丝氨酸羧肽酶(EC3.4.16.-).金属羧肽酶(EC3.4.17.-)和半胱氨酸羧肽酶(EC3.4.18.-)。丝氨酸羧肽酶丝氨酸羧肽酶(Seinecarboxypeptidases,SCP)又称酸性羧肽酶，是一类真核生物
羧肽酶的种类及其特点
根据羧肽酶活性中心含有丝氨酸残基、金属离子和半胱氨酸残基的不同，将羧肽酶分为丝氨酸羧肽酶(EC3.4.16.-).金属羧肽酶(EC3.4.17.-)和半胱氨酸羧肽酶(EC3.4.18.-)。丝氨酸羧肽酶丝氨酸羧肽酶(Seinecarboxypeptidases,SCP)又称酸性羧肽酶，是一类真核生物
血清载脂蛋白CII测定的检查过程
末端氨基的分析，是鉴定蛋白质纯度的方法之一。一条肽链的蛋白质，通过N-末端的定量分析，每克分子蛋白质应当有整数克分子的N-末端氨基酸，少量其他末端氨基酸的存在，常常表示存在有杂质。 分析蛋白质各种氨基酸百分比，也可作为蛋白质各类鉴定的参考值。 最终的纯度标准，应当是氨基酸顺序的测定。
干货分享——揭开糖基化修饰的神秘面纱
相对于磷酸化、乙酰化修饰等相对较为简单的PTM来讲，糖基化修饰稍显复杂和多样，各位看官对糖基化修饰的知识了解多少呢？是否又对O糖、N糖傻傻分不清楚呢？没关系，今天小编带您一起走进糖的世界，一起揭开糖基化修饰的神秘面纱。 糖基化修饰主要发生在内质网和高尔基体。主要过程是将糖基在糖基转移酶作用下将
【干货分享】四大类糖基化修饰
相对于磷酸化、乙酰化修饰等相对较为简单的PTM来讲，糖基化修饰稍显复杂和多样，各位看官对糖基化修饰的知识了解多少呢？是否又对O糖、N糖傻傻分不清楚呢？没关系，今天小编带您一起走进糖的世界，一起揭开糖基化修饰的神秘面纱。 糖基化修饰主要发生在内质网和高尔基体。主要过程是将糖基在糖基转移酶作用下将
血清载脂蛋白CII测定的注意事项及检查过程
注意事项 检查前禁忌：禁止服用某些药物（如避孕药、甲状腺激素、甾体激素等）可影响血脂水平。 检查时要求：近期应无急性疾病、损伤或外科手术史。 检查过程 末端氨基的分析，是鉴定蛋白质纯度的方法之一。一条肽链的蛋白质，通过N-末端的定量分析，每克分子蛋白质应当有整数克分子的N-末端氨基酸，少
多肽修饰合成常用策略（一）
多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物，普遍存在于生物体内，迄今在生物体内发现的多肽已达数万种。多肽在调节机体各系统、器官、组织和细胞的功能活动以及在生命活动中发挥重要作用，并且常被应用于功能分析、抗体研究、药物研发等领域。随着生物技术与多肽合成技术的日臻成熟，越来越多的多肽药物被开发并应
末端分析的概念和产业方法
中文名称末端分析英文名称terminal analysis定 义常指蛋白质肽链两端氨基酸的分析。对于N端分析有三种方法：桑格-库森法、丹璜酰法和埃德曼降解法，后者可连续测入，并可自动化操作；对于C端分析，主要用外肽酶，如一些羧肽酶，将肽链的羧基末端氨基酸切下分析。应用学科生物化学与分子生物学（一级
上海生科院揭示tRNA氨基酸在蛋白质生物合成中的作用
上海生科院揭示了tRNA氨基酸接受末端在蛋白质生物合成及其精确性调控中的作用 7月20日，《核酸研究》(Nucleic Acids Research)在线发表了中科院上海生命科学研究院生化与细胞所王恩多研究组的最新研究成果。该研究揭示了tRNA氨基酸接受末端在蛋白质生物合成及其精确性
常见5种蛋白质中氨基酸的分析实验
在生命科学的基础研究中，分离、提纯蛋白质是重要而繁锁的工作。生物体中各种蛋白质的氨基酸组成（或构筑）不尽相同。鉴定纯蛋白的最基本方法之一是测定其氨基酸的组分及含量。几年来，我们对一些蛋白质样品（达电泳纯）进行氨基酸分析，为鉴定蛋白质的结构与纯度提供了一项指标。有些蛋白质是国内首次提取或报道。现将
青霉素结合蛋白的结构介绍
以前是通过细菌提取的羧肽酶的青霉素-肽衍生物的氨基酸序列分析弄清了数种PBPs的活性中心，结果显示细菌PBP活性中心常是丝氨酸，β-内酰胺类抗生素正是通过其β-内酰胺环中的羧基和细菌相应的PBPs的丝氨酸的羟基共价结合成丝氨酸酯起作用。另外也有研究表明可能存在半胱氨酸-巯基为活性中心的羧肽酶。后
磷酸氨基酸分析实验
酸水解法 实验材料 磷酸化蛋白质 试剂、试剂盒
磷酸氨基酸分析实验
鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时，通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳，可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。实验方法酸水解法磷酸化蛋白质 印度墨汁 HCl 磷酸氨基酸混合物 电泳缓冲液 茚三酮 PVDF膜 烘箱 离心机 离心管 纤维素薄