如何避免支原体污染的应对策略
培养细胞时，发现细胞增殖变慢、形态渐渐改变，是血清或培养基的问题吗？很有可能是你的细胞污染了~~~~~支 原 体 污 染细胞污染可分为细菌、霉菌、酵母菌、支原体污染，其中支原体污染发生的概率>50%。支原体(Mycoplasma) 是最小的原核生物，约0.1-0.3μm，可穿透0.22-0.45 μm 过滤膜 （BI血清经过3次0.1μm滤膜并且检测支原体)。支原体污染棘手的原因之一是没有如其他污染源“立即可辨”的现象，支原体污染侵袭细胞但是并不一定致死。如果您的细胞出现如下状态：增殖变慢、形态变差、培养液变黄但是没有浑浊，说明您的细胞可能正遭受支原体的摧残！！受支原体污染的293T 正常无污染的293T支 原 体 检 测怎么知道您的细胞正遭受支原体摧残呢，常见的检测方法几种：分离培养法将可疑样本接种到支原体......阅读全文
支原体培养
支原体常用培养基为PPLO,很多公司都有出售.但血清（常用马血清或猪血清）和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.还有改良的Frey's培养基，常用的微生物实验技术书上都可以查到的。可以自己配制的。在液体培养基中通常要加入酚红做指示剂的，当培养基由红色变为黄色时，即可判定支原体的生长程度。
荧光检测支原体
实验方法原理在无抗生素情况下，至少将细胞培养一周，将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中，孵育 3~5d ，将细胞固定和染色，寻找细胞核之外的荧光。实验材料来自于7天单层培养的无抗生素的细胞培养上清液或经离心后的上清液指示细胞试剂、试剂盒Hoechst 33258 染料BSS-PRD-PBSA
支原体的检测
实验材料 细胞仪器、耗材 培养瓶载物片盖片显微镜实验步骤 1. 标本制备用尖镊子从培养瓶中直接取出预先置入的支持物（长形盖片；24 小时前置入），令细胞面向上，置放在载物片上，再覆以24 mmX 36 mm的较大盖片；如不用支持物培养法，也可取少许培养液滴在载物片上，再覆以盖片法观察亦可。2.
支原体鉴别技术
支原体是一群目前所知能独立生活的最小原核细胞型微生物。无细胞壁，具高度多形性，最小个体直径200nm左右，可以通过滤菌器。在无生命的人工培养液中能生长繁殖，但营养要求高于一般细菌，在固体培养液中形成直径为10—15u的小菌落，分中央与边缘两部分，中央部分长入培养液内，表面呈球形，在低倍镜下观察呈“荷
PCR－测定支原体
实验材料Taq DNA多聚酶引物阳性对照DNA脱氧核苷三磷酸混合物三磷酸琼脂糖1.3%TAE胶试剂、试剂盒磷酸缓冲盐溶液液Tris醋酸EDTA6×加样缓冲液引物储备液仪器、耗材DNA抽提和纯化系统基质的DNA抽提试剂盒热循环仪实验步骤一、DNA 标本的收集和制备1. 需要检测支原体污染的细胞系，在收
支原体培养实验
实验材料 肺炎支原体试剂、试剂盒 糖酵解培养基基础培养基牛血清酵母浸液酚红醋酸铊 青霉素仪器、耗材 培养皿烧杯玻璃棒天平移液管离心机棉花拭子实验步骤 一、标本采集 支原体常侵及人和动物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取样后放入2~3 ml支原体液体培养基的小管中，或取其分泌液，若标本是组织块，可在灭
支原体标本采集
1．标本采集 男性：用无菌棉拭子插入尿道约2cm处旋转，静止数秒钟后取材。 女性：支原体标本抹去宫颈口粘液，用无菌拭子插入宫颈管l－2cm旋转取材。 尚可用前列腺液、精液、尿液离心沉淀物作标本。 2．接种 将标本洗入Uu或Mh液体培养基，或用滤菌器过滤接种。
荧光检测支原体
实验方法原理在无抗生素情况下，至少将细胞培养一周，将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中，孵育 3~5d ，将细胞固定和染色，寻找细胞核之外的荧光。实验材料来自于7天单层培养的无抗生素的细胞培养上清液或经离心后的上清液
PCR－测定支原体
实验材料 Taq DNA多聚酶引物阳性对照DNA脱氧核苷三磷酸混合物三磷酸琼脂糖1.3%TAE胶试剂、试剂盒 磷酸缓冲盐溶液液Tris醋酸EDTA6×加样缓冲液引物储备液仪器、耗材 DNA抽提和纯化系统基质的DNA抽提试剂盒热循环仪实验步骤 一、DNA 标本的收集和制备1. 需要检测支原体污染的细胞
支原体CCU测定
丁香园网友“园中木”要做支原体CCU，而不知道这个初始菌液的浓度如何选，因缺少标准的0.5麦氏浓度，所以比较困惑，看了相关文献有说将其定量到10的6次方左右，但又是如何定量的呢？网友“ljksbs”问答：这个我以前做过，只能用倍比稀释法:取12只无菌试管，每管预先加入1.8ml支原体选择性液体培养基
支原体的计数
支原体的计数不像一般的细菌采用一般的比浊法，因为支原体在液体培养基中的生长是澄清透明的，所以一般的比浊法无法用于支原体的计数！要采用CCU（即颜色改变单位法）！其原理在于通过支原体在液体培养基中的代谢活力为指标，来检测支原体的相对浓度！具体做法：取12只无菌小试管，每管中加入1。8毫升的支原体液体培
支原体培养实验——支原体固体培养基接种法
支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。实验材料肺炎支原体试剂、试剂盒糖酵解培养基基础培养基牛血清酵母浸液酚红醋酸铊青霉素仪器、耗材培养皿烧杯玻璃棒天平移液管离心机棉花拭子实
支原体培养实验——支原体半固体培养基接种法
实验方法原理一、标本采集 支原体常侵及人和动物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取样后放入2~3 ml支原体液体培养基的小管中，或取其分泌液，若标本是组织块，可在灭菌乳钵或玻璃匀浆后接种，取样后应尽快接种培养。 二、分离培养 混种法：在制备半固体培养基时，培养基加热溶化，温度降至50℃时，添加动物血清
什么是支原体感染？
支原体是已知的可以自由生活的最小生物,也是最小的原核细胞。它是一种比病毒大、比细菌小的原核微生物,它们的突出特点是没有细胞壁。因而细胞柔软,形态多变,具有高度多形性。在电镜下观察支原体细胞,可见具有细胞膜,细胞内有核糖体、RNA和环状DNA。支原体广泛存在于土壤、污水、昆虫、脊椎动物及人体内,是动植
什么是支原体培养
就是做支原体病毒的培养，看对哪些药物过敏，一般情况下，做支原体检查的时候，都需要做这项的检查，万一是阳性，就需要进行培养，看你身上带的病毒对哪种药反应较大，就用哪种药来进行治疗。
支原体的检测实验
相差显微镜检测法 低涨处理地衣红染色观察法 荧光染色法 电镜检测法 培养检测法 实验材料 细胞
支原体抗体的作用
支原体抗体在一般情况下是潜伏于人体的免疫系统中，它的存在时间一般是几个月到几年不等，有的甚至是十年至几十年。当我们的身体再次受到支原体的侵害时，支原体抗体就会出现来消灭支原体，以此来保护我们的身体不受到侵害。但是支原体抗体不是万能的，如果支原体侵害超过了支原体抗体的治疗范围，人们就会再次发生支原
支原体肺炎临床路径
一、支原体肺炎临床路径标准住院流程 （一）适用对象。 第一诊断为支原体肺炎（ICD-10：J15.7） （二）诊断依据。 根据《临床诊疗指南－小儿内科分册》（中华医学会编着，人民卫生出版社），《诸福棠实用儿科学（第七版）》（人民卫生出版社） 1.多发年龄为5-18
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪
支原体污染及检测
（1）支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，最小直径0.2um，可通过滤器。 目前通过对国内100余株/系细胞的检测，形势不容乐观。污染率达30% ~ 60% 。
支原体分型试验
1、材料Dienes染色液，1.5%毛地黄皂苷液。2、方法（1）Dienes菌落染色：Dienes染色液是将2.5g亚甲蓝、1.5g天青II、10g麦芽糖、0.5g碳酸钠溶于100ml蒸馏水中。染色时直接吸入染色液覆盖菌落上1min左右，用生理盐水洗去染色液后，在低倍显微镜下可见支原体菌落成蓝色，其
支原体常用检测方法
支原体这种微小的微生物(直径0.2-0.8 µm)，是细胞培养中令人头疼的大问题。支原体污染可能来自培养基、血清或实验操作者，会影响细胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。支原体感染不易察觉，因此对培养细胞定期进行支原体检测就非常重要。 污染实验室培养细胞的支原体
支原体阳性严重吗
支原体阳性说明感染了支原体，是否严重应该看具体造成的症状，支原体感染之后，造成的症状有轻有重。肺炎支原体可以造成呼吸道的感染，但大多数是简单的上呼吸道感染，仅仅有打喷嚏、流鼻涕，并不严重；有一些可以造成支气管炎，出现咳嗽、咳痰，也不是那么严重；如果造成了明显的肺炎，这时候可能比较严重。除此之外，像解
培养法检测支原体
培养法最为可靠且成本低廉，但培养周期较长。常用于细胞以及I临床治疗细胞的支原体检查。1、所需仪器设备及培养基（1）仪器设备：培养箱，显微镜。（2）培养基①支原体肉汤培养基。②精氨酸肉汤培养基。③支原体琼脂培养基。2、检查方法（1）样品的贮存：样品如在24h以内进行支原体检测，则可贮存在2—8℃；如果
PCR法检测支原体
实验方法原理PCR法的基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA链扩增延伸。实验材料细胞样品试剂、试剂盒dNTPTapDNA聚合酶琼脂糖矿物油支原体检测试剂盒仪器、耗材超净工作台PCR仪电泳仪凝胶成像分析系统台式离心机旋涡混悬器实验步骤1.
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪器设
支原体培养的问与答
一、简介：支原体的大小为 0.1～0.3μm，可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径 0.1~1.0 mm），在固体培养基表面呈特有的「油煎蛋」状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。革兰氏染色不易着色，故常用 Giemsa 染
支原体的培养技巧
支原体（霉形体）的培养技巧支原体是介于病毒与细菌之间的一类微生物，在自然界广泛存在，使人和多种动物、植物害病。 它缺乏细胞壁而不同于细菌，能在无细胞培养基生长繁殖，并含有RNA和DNA而有别于病毒。支原体以二分裂方式繁殖，基本形态为圆形、丝状形，后者易形成分枝状菌丝，因而得名支原体。其大小介于
同样是细胞被支原体污染，怎么挑选支原体祛除剂
养细胞时，除了支原体的检测需要定期进行外，支原体的预防和祛除也是一个重要方面。 它包括工作区域中的支原体的预防和祛除和培养箱水槽、水浴锅中预防支原体的污染。但一旦发生细胞培养时有支原体污染，应如何挑选支原体祛除剂呢？这里指的支原体祛除剂，是加入到细胞培养基中来发挥作用。 德国MB有三种支原体祛除剂，
应对破坏细胞的支原体~qPCR支原体检测试剂来帮你
织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。德国MB公司qPCR支原体检测试，该