BioTechniques：无细胞表达究竟哪家强？
无细胞表达系统让研究人员能够快速生成蛋白质，从而受到人们的青睐。来自真核细胞的裂解物能够对蛋白质进行翻译后修饰，但不同翻译系统的细微差别也会导致蛋白生产的变化。无细胞表达究竟哪家强？亚利桑那州立大学的研究人员近日在《BioTechniques》上发表了他们的比较结果。 在目前的无细胞蛋白合成而言，大肠杆菌仍然是首选。不过，由于对人类和哺乳动物蛋白及其翻译后修饰的兴趣日益增加，真核系统也逐渐受到人们的欢迎。此外，对于某些技术，如mRNA展示和核酸可编程的蛋白芯片（NAPPA），研究人员倾向于使用真核表达系统来研究蛋白质互作。 在这项研究中，研究人员比较了市场上三种常用的真核无细胞表达系统：麦胚提取物（WGE，Promega）、兔网织红细胞裂解物（RRL，Promega）和HeLa细胞裂解物（HCL、赛默飞世尔）。 对于每个系统，研究人员定量了环状质粒和线性DNA所产生的萤光素酶蛋白的量。这些DNA模板的5’非翻译区（UT......阅读全文
网织红细胞裂解物的概念
中文名称网织红细胞裂解物英文名称reticulocyte lysate定 义用于测定信使核糖核酸(mRNA)活性的一种体外翻译分析系统。通常由药物致贫血而发育不完全的兔网织红细胞制备，但须用RNA酶去除其中内源的mRNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
培养细胞标记和裂解物的制备实验
温和去污裂解法 SDS煮沸法 实验材料 培养细胞 试剂、试剂盒
培养细胞标记和裂解物的制备实验
温和去污裂解法 SDS煮沸法 实验材料 培养细胞 试剂、试剂盒
培养细胞标记和裂解物的制备实验
实验材料 培养细胞试剂、试剂盒 DMEMHClTBSTris仪器、耗材 微量离心管Plexiglas盒吸头细胞刮子冷冻离心机实验步骤 1. 培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞： 2a. 吸去培养液，用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐培养液，吸尽该培养液。 3a.
如何研究细胞关键蛋白
来自上海生科院生化与所的研究人员利用多种细胞手段发现了两种关键细胞蛋白的作用机理，这两种蛋白分别是C末端Src激酶(C-terminal Src kinase，Csk)和细胞极性封闭蛋白Occludin。研究论文分别发表在《Proteomic》和《Developmental Cell》上。
TNT偶联网织红细胞裂解物系统问题与解答
1)什么是TNT偶联网织红细胞裂解物系统？TNT偶联网织红细胞裂解物系统为研究人员提供了一种可供选择的真核体外翻译系统，一种单管、偶联转录/翻译系统。将转录产物掺入到翻译混合物中，TNT偶联网织红细胞裂解物系统简化了体外翻译的过程，缩短了翻译所需的时间。标准兔网织红细胞裂解物翻译系统所用的RNA来源
培养细胞标记和裂解物的制备实验——温和去污裂解法
实验材料培养细胞试剂、试剂盒DMEMHClTBSTris仪器、耗材微量离心管Plexiglas盒吸头细胞刮子冷冻离心机实验步骤1. 培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞： 2a. 吸去培养液，用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐培养液，吸尽该培养液。 3a. 加入
培养细胞标记和裂解物的制备实验——SDS煮沸法
实验材料培养细胞试剂、试剂盒SDS裂解液RIPA校正液免疫沉淀洗液仪器、耗材离心机培养箱玻璃培养管实验步骤1. 标记和洗涤细胞（温和去污裂解法，步骤1~7）。 2a. 对于贴壁细胞：加入适量SDS裂解液至培养皿中。（35 mm 培养皿加0.1 ml，50 mm 培养皿0.25 ml，100 ml
BioTechniques：无细胞表达究竟哪家强？
无细胞表达系统让研究人员能够快速生成蛋白质，从而受到人们的青睐。来自真核细胞的裂解物能够对蛋白质进行翻译后修饰，但不同翻译系统的细微差别也会导致蛋白生产的变化。无细胞表达究竟哪家强？亚利桑那州立大学的研究人员近日在《BioTechniques》上发表了他们的比较结果。 在目前的无细胞蛋白合成而
BioTechniques：无细胞表达究竟哪家强？
无细胞表达系统让研究人员能够快速生成蛋白质，从而受到人们的青睐。来自真核细胞的裂解物能够对蛋白质进行翻译后修饰，但不同翻译系统的细微差别也会导致蛋白生产的变化。无细胞表达究竟哪家强？亚利桑那州立大学的研究人员近日在《BioTechniques》上发表了他们的比较结果。 在目前的无细胞蛋白合成而
研究T细胞刺激蛋白和白细胞介素
梅纳德说：“总体而言，我们的数据确定了两种与炎症性肠病相关的途径之间的协同作用-T细胞衍生的IL-10和ICOSL依赖性抗共生抗体-可以促进与肠道菌群的共生。”“此外，我们将ICOSL缺陷确定为探索抗共生抗体在宿主菌群共生中发挥作用的有效平台。”阿拉巴马州伯明翰-研究人员发现，T细胞刺激蛋白(ICO
简述无细胞蛋白质合成系统的发展历史
微生物学创始人巴斯德最早采用无细胞体系研究酵母酒精发酵中起作用的酶系问题。20世纪50年代生物学家首次采用兔网织红细胞裂解物（rabbitreticulocytelysate）制备的无细胞系统实现了蛋白质的体外合成 [1]。到了20世纪80年代中期，前苏联学者Spirin等人通过在无细胞体系中连
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒
材料：缓冲液和溶液：氯仿NaCl（固体）聚乙二醇（PEG 8000）SM酶和缓冲液：胰Dnase I (1mg/ml)胰Dnase I (1mg/ml)于TE中（ph7.6）离心机和转子：Sorvall GSA 转子或相当型号专用设备：量筒（2L）载体和菌株：大肠杆菌培养物，经λ噬菌体感染和裂解方
无细胞蛋白表达技术介绍
无细胞蛋白表达技术是指用含有蛋白合成必需的组分（核糖体，转运RNA，氨酰合成酶，启动/延伸/终止因子，三磷酸鸟苷，ATP，Mg2+和K+）的细胞裂解物在体外进行蛋白合成。与传统的基于细菌或真核细胞的蛋白表达系统相比较，无细胞蛋白表达系统具有独特的优势，包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的
重组人蛋白细胞因子的研究选择—细胞因子
1．重组蛋白表达体系MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物细胞。2．重组蛋白纯度和浓度测定重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测定法。重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b. BCA 蛋白定
重组人蛋白细胞因子的研究选择细胞因子
．重组蛋白表达体系 MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物细胞。 2．重组蛋白纯度和浓度测定 重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测定法。重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b
研究揭示蛋白RhsP靶向猎物细胞的分子机制
中国科学院广州生物医药与健康研究院与澳门大学合作，研究揭示细菌Ⅵ型分泌系统（Type VI secretion system, T6SS）分泌效应蛋白RhsP靶向猎物细胞的分子机制。相关研究在线发表于Cell Reports。 该研究发现，肠炎弧菌效应蛋白RhsP形成一个桶状结构，通过自水解引发
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体，可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前，建议测定噬菌体制备物的得率。实验材料 大肠杆菌培养物试剂、试剂盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ仪器、耗材 S
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体，可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前，建议测定噬菌体制备物的得率。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体，可在高盐存
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体，可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前，建议测定噬菌体制备物的得率。
单细胞蛋白质组学：让细胞个体研究更加精细
细胞是生命活动的基本单元。对细胞的精确认知是理解细胞在生理和病理过程中功能的先决条件。 在组织、器官或个体中，细胞具有非常大的异质性，而传统的研究手段针对大量细胞进行分析，得到的是大量细胞的平均结果，无法区分不同细胞个体对于大量样品结果的具体贡献值，从而忽视或掩盖了单细胞的个体差异，不
无细胞蛋白表达系统的选择
图1. 与细胞内蛋白表达相比，无细胞蛋白表达系统能够显著地节约时间。 与基于细胞的蛋白表达系统相比较，无细胞蛋白表达系统具有独特的优势，包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的总体产量。本文介绍了根据模板类型、期望产率以及下游实验等因素来选择无细胞蛋白表达系统的标准。
免疫沉淀（IP）常见问题分析与解决办法
免疫沉淀（IP）常见问题分析 问题 可能原因 解决办法 高背景 吸取了不溶于去污剂中的蛋白（沉淀） 离心后立刻吸取上清，如果发生了重悬，则需要再次离心
活细胞蛋白质标记与成像研究获进展
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/7/504935.shtm近日，华东理工大学光遗传学与合成生物学交叉学科研究中心杨弋、朱麟勇、陈显军团队在活细胞蛋白质标记与成像研究中取得重要进展，相关研究在《细胞发现》发表。 ?人造荧光蛋白及荧光
《自然》：研究发现会“唤醒”癌细胞的蛋白质
这一发现有助于医生了解并预防癌细胞在体内的扩散 美国科学家最近发现，有些癌细胞可以释放一种叫“骨桥蛋白”的蛋白质，这种蛋白质会“唤醒”体内休眠的癌细胞。这一发现有助于医生了解并预防癌细胞在体内的扩散。 据新一期英国《自然》杂志网络版报道，美国怀特黑德生物医学研究所的科学家给实验鼠同时移植了两种癌
蛋白质泛素化调控细胞凋亡研究取得进展
细胞凋亡是维持机体组织平衡的重要生物学过程，肿瘤细胞的抗凋亡现象是目前癌症治疗领域中的主要障碍。在细胞凋亡过程中，caspase家族扮演着关键角色，其中caspase-8作为凋亡起始因子显得尤为重要。HECTD3是近年来发现的一个新的E3泛素连接酶。中科院昆明动物研究所陈策实研究员课题组前期研究
免疫沉淀的实验方法介绍
免疫沉淀的实验过程比较简单，一般分为3个阶段；①抗原溶液的制备；②裂解物非特异性本底的预处理；③免疫复合物的形成与纯化。 免疫沉淀的第一步是制备抗原溶液。任何抗原溶液均可作为免疫沉淀的材料来源，但免疫沉淀一般采用细胞或组织制备的裂解物。裂解物的制备可采用多种方法，其中首选用温和的去污剂如非离子去污剂
2025蛋白质组学大会之单细胞蛋白质组学研究
2025年10月13日上午10:10，第12届AOHUPO大会暨第8届AOAPO大会、π-HuB国际大科学计划第三届全球峰会暨第13届CNHUPO大会“Single Cell Proteomics”分论坛在广州白云国际会议中心汕头厅（Shantou Hall）成功举行。 本场论坛由浙江大学方群
重组病毒的蛋白质分析实验
实验材料 Sf细胞试剂、试剂盒 胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材 培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤 1. 接种2.5×108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥ 2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml
重组病毒的蛋白质分析实验
实验材料Sf细胞试剂、试剂盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤1. 接种2.5x108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml 病毒贮液中取0.5