ORFeome：基因组规模的人类ORF资源
一个国际合作组织，包括Dana-Farber癌症研究所，已经在创造人类细胞中不同蛋白质的成千上万的完整基因图谱库的工作上达到了一个里程碑。开放阅读框ORF（编码蛋白全长的基因）的集合，是科学家研究人类细胞基础机制和疾病中的过程的重要资源。 在2月25日发表在Nature Method上的文章，报导了由13个学术、商业和政府组织进行的ORFeome合作（OC）宣布现在现在他们收集的ORF克隆共计17,154个占人类细胞所有蛋白编码基因的80%。它是世界上最大的人类基因集合并公开提供给全世界的研究团队。 “OC ORF集合可以在广泛研究领域中被充分利用。”文章的资深作者David E. Hill博士，Dana-Farber癌症系统生物学中心的副主任说，“为了全面探索的细胞生理学，科学家需要一种资源，使他们能够变得几乎任何目标蛋白。OC就是能为这种工作提供独特和有价值的工具。 从这个合作开始的2005年成千上万的科学家在自己......阅读全文
ORF克隆和cDNA克隆在操作技术上的区别（一）
最近天气炎热，在实验室的童孩估计有点冒火，本来在这夏困秋乏的季节，每天都昏昏欲睡，还没个假期（这也没办法，疫情嘛），还要一天天围着实验转，做的出来还好，做不出来头大心塞啊。尤其是新进实验室的小白，对于实验的方方面面更是一头雾水，面对导师的“期待与厚望”，怀着一腔热血，踌躇满志，踏上了科研的不归路。话
ORF克隆和cDNA克隆在操作技术上的区别（二）
二、 相关产品 看到这里，相信大家对cDNA克隆和ORF克隆有了一定的了解，那接下来就来聊聊相关的产品吧！ 1.全长cDNA克隆产品 cDNA克隆（长度是指编码区） FL / MFL开头的cDNA克隆现在基本不销售，主卖表达克隆 0-100
－ORFeome：基因组规模的人类ORF资源
一个国际合作组织，包括Dana-Farber癌症研究所，已经在创造人类细胞中不同蛋白质的成千上万的完整基因图谱库的工作上达到了一个里程碑。开放阅读框ORF（编码蛋白全长的基因）的集合，是科学家研究人类细胞基础机制和疾病中的过程的重要资源。 在2月25日发表在Nature Method上的文章，
C.elegans基因文库的分类和选择
自 1995 年成立以来，Dharmacon 在生物信息学，RNA 生物学和合成化学方面的专长 , 使我们能够开发出一整套研究基因功能的产品。作为 RNA 定制合成的领导者，Dharmacon 公司是 RNA 干扰新发现领域的早期参与者，并且在若干重要的科学发现中，以及确保沉默效率的 siRNA
分子克隆蛋白表达实验指南（十五）
LB固体培养基 Tryptone 1g Yeast Extract 0.5g NaCl 1g Agar 1.5g 加蒸馏水至总体
分子克隆蛋白表达实验指南（七）
目的基因表达 14．快速诱导表达 快速诱导目的是为检测该重组质粒在BL21中是否能被诱导表达重组蛋白，并确定在不同IPTG浓度蛋白诱导效率的差异。 5． 挑单克隆菌落于7ml含有相应抗生素LB培养液的50ml培养管中，37C振荡培养过夜（8-16h）。 6． 37C，1mM
分子克隆蛋白表达实验指南（一）
目的基因克隆包括保存用全长基因(gene for saving, GS)和表达用全长基因(gene for expression, GE)两部分。 这两部分所克隆的基因都是全长片段，但克隆的策略及目的不同。直接用精确克隆(及引物从基因CDS两端开始)很难找到高效价的引物，且cDNA中目的基
分子克隆蛋白表达实验指南（二）
取DEPC水时切记带上手套 Genequant使用方法： 开机－set-up－enter(只更改DNA/RNA，看光波是否为320nm)－set-ref(此时插入空白对照)－样品 1．使用前将比色皿中水吸出，用1ml蒸馏水重新洗涤再将比色皿中的水吸尽（先用1ml枪吸，后用100ul枪吸）
有关融合蛋白表达载体的克隆
在构建融含蛋白表达载体时除了要注意插入片段的方向、读码框架与载体保持一致外，注意以下问题可能会减少一些不必要的麻烦，当外源片的插入载体起始密码的后面，另一个基因的前面时，注意检查插入后基因的两端是否引入了新的终止密码，特别是用到Klenow mung bean 核酸酶，T4 Polymerase
分子克隆蛋白表达实验指南（三）
若有非特异性条带，可进行Touchdown PCR，提高引物的特异性。 PCR反应条件： 1 94C 5min 2 94C 45s 3 65C 45s 退火温度视
分子克隆蛋白表达实验指南（四）
7. PCR产物与TA载体连接 pGEM-T vector is T-tailed at the insert site. To improve the ligation efficiency, it is recommended PCR product be A-tailed. +A s
分子克隆蛋白表达实验指南（五）
8. TA质粒转化菌落的验证 与表达载体的验证不同，转化TA质粒时不用双酶切验证。只需用目的基因引物和TA载体引物PCR验证即可。TA载体引物PCR片段比插入片段大约长150bp。 目的基因退火温度与之前胶回收时温度相同，TA退火温度60C即可，但可在55～70之间变动，不会影响结果。 挑取至
分子克隆蛋白表达实验指南（六）
10. 测序 突变后氨基酸序列没有变化仍可用于表达。测序报告中blast时若有‘－’符号，则人工对照测序图谱。 测序验证后没有突变或者同义突变的重组质粒必须小抽，50ul，conc300ug/ml备份。测序文件应妥善保存，蛋白表达完成后一并提交存档。 获得GS后，即可构建含GE的重组T载体，用
分子克隆蛋白表达实验指南（十）
13．连接产物转化DH5α（预开42C水浴） 与T载体转化相同，先转化DH5α，筛选及扩增目的重组质粒 转化DH5α后挑6～8个菌落验证，验证项目： 1． 目的基因引物PCR验证 2． 表达载体引物PCR验证 3． Step2中PCR产物胶回收后，以胶回收为模板、
分子克隆蛋白表达实验指南（十一）
SDS-PAGE胶样品排列： MarkerUII 37CUI’I’ Marker：低分子量蛋白marker，上样10ul UI：未诱导菌液，上样10ul。任取37C和20C中一个 I：诱导后对照，上样10ul UI’, I’代表G
分子克隆蛋白表达实验指南（十二）
– Note: The yield of fusion protein can be estimated by measuring the absorbance at 280 nm. The GST affinity tag can be approximated by 1 A280 &Arin
分子克隆蛋白表达实验指南（十七）
Buffers for His purification in denatured conditions: 配制时加终体积50％的水，之后定容至所需体积。先配pH 8.0的buffer(调pH需要较多NaOH)，再统一配bufferC，D，E，分别调pH Buffer B (200ml
分子克隆蛋白表达实验指南（十八）
15％胶 水1.11.872.33.43.854.65.76.99.211.5 30％聚丙烯酰胺混合液2.54.2557.58.751012.5152025 1.5M Tris(pH=8.8)1.32.212.53.84.5556.37.
分子克隆蛋白表达实验指南（十九）
Desired pH Volume of 1M K2HPO4 (mL)Volume of 1M KH2PO4 (mL) 5.8 8.591.5 6.0 13.286.8 6.2 19.280.8
分子克隆蛋白表达实验指南（十六）
Amp(50mg/ml) 溶解1g Amp于足量的水中，最后定容至20ml。分装成小份于-20℃贮存。常以20～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基，1:1000比例稀释 Kan(50mg/ml) 溶解1g Kan于足量的水中，最后定容至20ml
分子克隆蛋白表达实验指南（九）
SDS-PAGE胶样品排列： MUIBS1S1P1BS2S2P2UIT1T2T3T4 M：marker；上样10ul UI：未诱导对照；10ul BS：超声前样品；10ul S：超声后上清； 10ul P：超声后沉淀； 10ul T：诱导后每隔1h样品，1
分子克隆蛋白表达实验指南（十三）
7． 电泳结束后，按比例从胶上割下相应约1cm条带（当按比例的条带割下后可相应的向两边再割一点，但是电透析时中间和两边的胶必须分开透析），用镊子或尺子将胶碾碎成2mm见方的小块。 8． 将碎块小心加入电透析tube中，200V，120～150min。 9． 移出放电透析tube的架子，
分子克隆蛋白表达实验指南（十四）
RbCl制备感受态细胞 需准备的灭菌器具和培养液： SOB，Buffer 1，Buffer 2，3×200ml广口瓶，1.5ml EP管，1×500ml离心瓶（按200ml摇菌量计算），2×50ml离心管，2×移液管（用于加Buffer 1），液氮，冰 离心管，EP管，移液管使用前均需要放
分子克隆蛋白表达实验指南（八）
15. 小量蛋白诱导表达 该步骤的目的是检测蛋白是否在上清存在表达。低温时蛋白易于表达于上清，因此小量蛋白诱导表达以20或30C为培养温度。 1. 挑一单克隆的菌落于5ml含有相应的抗生素的LB培养液中，37℃振荡培养过夜（8-16h）。 2. 过夜培养液加入三瓶50ml含
戊型肝炎病毒感染分子生物学检测方法研究进展
随着戊型肝炎病毒(HEV)分子克隆技术的成功建立，HEV分子生物学的研究取得了极大进展，与之相关的HEV检测方法也正在不断完善。该方法包括两方面，即采用基因工程重组抗原建立的抗体诊断方法，以及采用逆转录——聚合酶链反应(RT-PCR)建立的基因诊断方法，分别检测抗HEV及HEV RNA。1 抗HE
ORF在基因中有什么作用
ORF是开放阅读框，里边所包含的DNA序列是否能编码蛋白质是不清楚的，如果一旦发现ORF里的DNA可以编码蛋白质，那它就变成了一个基因。所以每一个开放阅读框都是潜在的基因（也许是真基因只是人们还没研究出来，也有可能这个OFR压根儿也就不编码蛋白质）
GFP抗体—绿色荧光蛋白的单克隆和多克隆标签抗体
GFP（Green Fluorescent Protein，绿色萤光蛋白）是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。GFP标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛 应用于各种细胞
金属硫蛋白的克隆及检测
随着分子生物学技术的快速发展，使MT克隆技术、RNA印迹技术和PCR技术应用于MT的定量检测成为现实。MT克隆检测是通过MT多克隆和单克隆抗体，运用免疫扩散、免疫电泳等方法来检测组织中的MT-mRNA含量进行定量分析，这在MT分子的生物学研究中有很重要的意义。 MT多采用联机检测，虽然以免疫法
C.elegans基因文库的分类和选择
自 1995 年成立以来，Dharmacon 在生物信息学，RNA 生物学和合成化学方面的专长 , 使我们能够开发出一整套研究基因功能的产品。作为 RNA 定制合成的领导者，Dharmacon 公司是 RNA 干扰新发现领域的早期参与者，并且在若干重要的科学发现中，以及确保沉默效率的 siRNA
罕见肝炎病毒感染与传播机制研究取得进展
上海交通大学农业与生物学院人兽共患病与比较医学华修国团队在戊型肝炎的感染与传播机制上的研究取得新进展，相关成果Hepatitis E Virus Infection in Central China Reveals No Evidence of Cross-Species Transmissio