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你必须知道的质谱鉴定中10条FAQ

质谱技术在蛋白鉴定等实验中具有不可忽视的作用,应用前景十分广泛。那么,有问题了怎么解决呢? 问题1. 一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级,什么时候做二级? 答:一级质谱鉴定的方式主要指胎指纹图谱(peptide-mass mapping, PMF),即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量并搜库比较实现蛋白质的鉴定,二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的破碎并对碎片进行深入分析和比较,鉴定出该肽段的序列并结合PMF的结果从而实现蛋白质的鉴定。二级质谱能够得到部分肽短的序列,具有更高的可靠性。随着现在杂志对数据的要求越来越严格,二级质谱鉴定是蛋白鉴定的大趋势,而且即使目前做一级质谱鉴定的结果,也需要挑选部分PMF结果做二级质谱验证。 问题2. 研究的物种不是模式生物怎么办? 答:可以参考亲缘关系最近的模式生物做比对而实现蛋白质的成功鉴定,如果质谱图很好而没有鉴定结果说明这是一个全新的蛋白,可以采用d......阅读全文

蛋白鉴定方法之质谱相关技术

  质谱已成为连接蛋白质与基因的重要技术,开启了大规模自动化的蛋白质鉴定之门。 用来分析蛋白质或多肽的质谱有两个主要的部分,1)样品入机的离子源,2)测量被介入离子的分子量的装置。 首先是基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)为一脉冲式的离子化技术。 它从固相标本中产生离子,并在飞

质谱鉴定,常见疑问解答

问题1、一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级,什么时候做二级?答:一级质谱鉴定的方式主要为胎指纹图谱(PMF),即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量并搜库比较实现蛋白质的鉴定;二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的破碎并对碎片进行深入分析和比较,鉴定出该肽段的序列并结合PMF的

蛋白质质谱鉴定技术概述及常见问题

蛋白质(Protein)是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,存在于所有生物细胞,作为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用,因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。现代研究结果发现越来越多的多肽同蛋白质一样

蛋白质凝胶电泳后或者质谱后怎么鉴定

看你的目的.如果你只是检测目标蛋白大小的话,加上蛋白质marker,考染观察条带大小即可.你要是想知道蛋白质的氨基酸序列的话就去打质谱.话说蛋白质的质谱就是序列分析.

如何判定蛋白质的质谱鉴定结果的差异

1 单个蛋白鉴定1. 用于鉴定纯化的单个蛋白的溶液或粉末,或经过SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)的单个条带或二维电泳的单个点。2. 蛋白酶解成多肽。3. 液相分离多肽,离子化的多肽进入质谱,母离子检

暨大研发另类质谱鉴定算法,大幅提高蛋白质组鉴定能力

  暨南大学的研究人员利用翻译组测序(RNC-seq)数据作为稳态细胞内蛋白质的“标准答案”,并另辟蹊径,提出了蛋白水平上的一种简单有效的多算法结果整合策略,不用做额外的实验,零成本轻松提高蛋白质组鉴定数量,同时有效降低假阳性率。  鸟枪法质谱(shotgun mass spectrometry)是

质谱鉴定微生物的原理

  在应用MALDI-TOF MS时,通常将微生物样本与一种饱和的低分子量无机化合物溶液(称为基质)进行混合加在靶板上,待干后样本与基质共结晶后形成了以基质包裹构架的样本固体沉淀。样本基质结晶体经激光辐射,基质从激光中吸收能量使样品吸附,基质与样品之间发生电荷转移使得样品分子电离,离子在加速电场下获

暨大另类质谱鉴定算法策略大幅提高蛋白质组鉴定能力

  鸟枪法质谱(shotgun mass spectrometry)是蛋白质组研究的标准研究方法。从质谱谱图中鉴定蛋白质需要依赖搜库算法,现有许多算法被开发出来,常见的如Andromeda(Maxquant), Mascot, COMPASS, X!Tandem, pFind, InsPecT, P

利用纳升级液相色谱 - 串联质谱进行蛋白质鉴定实验

实验材料 修饰胰蛋白酶试剂、试剂盒 消化缓冲液萃取液清洗液脱色液仪器、耗材 多通道移液枪Eppendorf Repeater 分液器Combitips 分液管实验步骤 3.1 胶内蛋白的水解和多肽的提取(一天的实验方案)对于从 SDS-PAGE,2D-PAGE,BN-PAGE 电泳(经考马斯亮蓝

利用纳升级液相色谱- 串联质谱进行蛋白质鉴定实验

实验材料修饰胰蛋白酶试剂、试剂盒消化缓冲液萃取液清洗液脱色液仪器、耗材多通道移液枪Eppendorf Repeater 分液器Combitips 分液管实验步骤3.1 胶内蛋白的水解和多肽的提取(一天的实验方案)对于从 SDS-PAGE,2D-PAGE,BN-PAGE 电泳(经考马斯亮蓝 G-250