制备体外剪接反应用HeLa细胞核和胞质S100提取物实验
胞核提取物可以用于前体 mRNA 的剪接，S100 提取物中虽然包括许多剪接因子，但它不具有剪接活性，因为它只含有剪接所必需的部分 SR 蛋白，不过该提取物中补充一种或多种 SR 蛋白后就可以进行有效的剪接。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理胞核提取物可以用于前体 mRNA 的剪接，S100 提取物中虽然包括许多剪接因子，但它不具有剪接活性，因为它只含有剪接所必需的部分 SR 蛋白，不过该提取物中补充一种或多种 SR 蛋白后就可以进行有效的剪接。实验材料HeLa 细胞试剂、试剂盒DTT苯甲基磺酰氟PBS缓冲液仪器、耗材Eagle 悬浮培养基本培养基玻璃勾架器透析袋实验步骤―、材料与设备所有的试剂均需用高质量高压灭菌水配制，例如 Mill Q ( Millipore，Bedford，MA，USA ) 或者双燕馏水。所有用于培养细胞的成分均需高压灭菌，不耐热的材料用 0.22 μm 过滤器过滤除菌。1. H......阅读全文
核提取物的制备实验
实验材料 哺乳动物试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液低盐缓冲液透析缓冲液仪器、耗材 转子离心机电导计透析膜匀浆机离心管实验步骤 1a. 收集转瓶培养的细胞：将浓度为5~10×108细胞/l 的培养液用1 L 的塑料瓶1 850 g 离心20 min，将细胞收入50 ml 锥形离心管中（每管收2~3 L
酵母提取物的制备实验
实验方法原理酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。实验材料新鲜培养的酵母细胞
酵母提取物的制备实验
实验方法原理 酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。实验材料 新鲜培养的酵母
酵母提取物的制备实验
基本方案 实验方法原理 酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论
核提取物的制备实验
实验方法原理 通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素：无机盐的种类、浓度、温度和PH值。
核提取物的制备实验（一）
从培养细胞中分离的细胞核制备成的提取物在体外转录和mRNA加工中具有精确的功能，（1）纯化蛋白质（2）核提取物。实验方法原理通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素
核提取物的制备实验（二）
从培养细胞中分离的细胞核制备成的提取物在体外转录和mRNA加工中具有精确的功能，（1）纯化蛋白质（2）核提取物。实验材料细胞核试剂、试剂盒KCl高盐缓冲液仪器、耗材透析膜离心机实验步骤1. 按基本方案中歩骤1~7操作。 2. 将细胞核悬液分成5等份。在冷室内不断搅拌，按如下方法在每份悬液中加入1
酵母前体mRNA剪接提取物实验
真核生物前体 mRNA ( pre-mRNA ) 的剪接分为两步，即先从前体切去内含子，然后将两个外显子连接在一起形成成熟的 mRNA。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使
酵母前体mRNA剪接提取物实验
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。
细胞和亚细胞提取物的制备实验
实验方法原理 对于细胞内蛋白的纯化和特性分析，重要的是选择一种有效的方法来破碎细胞或组织，使蛋白迅速地从胞内相对隔离的空间中释放到缓冲液中，而该缓冲液应对所研究的蛋白的生物活性没有影响。广泛使用的破碎软组织的方法之一是勻浆。在本方案中，讨论了使用机械力匀浆组织：在 Potter-Elvehjem
细胞和亚细胞提取物的制备实验
从组织和细胞中提取蛋白可能是蛋白质组研究中最关键的一步，因为这一步影响了蛋白的产率、生物活性和特定目的蛋白结构的完整性。因此，我们要注意蛋白提取条件的选择。主要目标是在破坏力最小、保持蛋白结构完整性的前提下，可重复地使细胞最大程度地裂解。方案1 哺乳动物组织的匀浆实验实验方法原理对于细胞内蛋白的纯化
酵母前体mRNA剪接提取物实验（二）
(12) RNA 洗脱缓冲液：20 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.6)，0.5 mol/L NaCl，10 mmol/L EDTA，2% ( V/V ) 苯酚（Tris EDTA 或 NaAc-EDTA 平衡），4°C 保存。(13) 7.5 moI/L 乙酸铵（NH4Ac）：用 0
酵母前体mRNA剪接提取物实验（一）
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。实验材料 tRNAUTPRNA 聚合酶试剂、试剂盒 YPTris-HCl ETDASD
HeLa－细胞核提取物的制备实验
试剂、试剂盒 甘油液氮MgCl2•6 H2O硫酸铵HeLa 细胞磷酸缓冲盐溶液（PBS) 缓冲液 G缓冲液 H 缓冲液 DTM 缓冲液+0.1 ml L KCl实验步骤 材料HeLa 细胞（培养和保存条件见下文。我们也成功地使用过 CellexBiosciences 公司制备并冷冻的 HeLa 细胞
细胞和亚细胞提取物的制备实验
方案1 哺乳动物组织的匀浆实验 方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验 方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验 方案4 氮舱减压法裂解培养细胞实验 方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验 方案6 细菌中重组蛋白的
酵母前体mRNA剪接提取物实验（一）
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。 实验材料 tRNAUTPRNA 聚合酶 试剂、试剂盒 YPT
HeLa－细胞核提取物的制备实验
在本实验中，基本上是按Dignam等（1983)所述的方法从HeLa细胞制备核提取物的。这一基本方法大概是制备体外转录和DNA结合实验用因子的最常用的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒甘油液氮MgCl2•6 H2O硫酸铵HeLa 细胞磷酸缓冲盐溶液（PBS)缓冲液
细胞和亚细胞提取物的制备实验8
方案8 酵母提取物的制备实验实验方法原理由于酵母的经典遗传分析和分子遗传分析都已经研究得非常透彻，因而对于纯化重组动物蛋白来说，酵母是一个很有吸引力的表达体系。关于培养和收集酵母细胞的讨论，尤其是芽殖酵母，参见 Jazwinski(1990)。酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如 Fr
细胞和亚细胞提取物的制备实验7
方案7 从包含体中溶解大肠杆菌重组蛋白实验实验方法原理由于分子克隆技术能够使细菌高水平表达蛋白，因此原核表达是一个非常便利的获得重组蛋白的系统。遗憾的是这些蛋白在细菌中易于聚合和沉淀，形成难溶解的包含体，因而很难纯化。非细菌蛋白的包含体尤其普遍。虽然没有一种可用于所有蛋白的普适方法，还是有许多策略适
细胞和亚细胞提取物的制备实验5
方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验实验方法原理利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。为了检测诱导和重组蛋白的表达水平，评估方法的快速简单是很重要的。本方案使用 0.5% TritonX-1OO 裂解细胞，小量制备细菌提取物。实验材料表达目标重组蛋白的细菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇（DTT)样
细胞和亚细胞提取物的制备实验4
方案4 氮舱减压法裂解培养细胞实验实验方法原理通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法，能释放完整的细胞器和制备细胞膜（Hunter and Commerford，1961)。该方法的原理很简单：细胞放在一个压力舱中，在高压下（约5500kPa，相当于800ps
细胞和亚细胞提取物的制备实验6
方案6 细菌中重组蛋白的大量提取实验实验方法原理利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。适用于细菌细胞蛋白提取的方法包括超声波处理、玻璃珠研磨、钒土或石英砂研磨、French 加压罐高压剪切细胞和溶’菌酶处理。这些方法适用于从各种革兰阴性菌和革兰阳性菌中制备蛋白提取物。通常是使用酶的方法破坏细胞
细胞和亚细胞提取物的制备实验2
方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验实验方法原理培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解（如 l%NP-40 或 l%Triton X-100)，那么这对目标蛋白的影响可能比方案 1 中所讨论的匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表
细胞和亚细胞提取物的制备实验3
方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验实验方法原理去垢剂裂解细胞法通常用于培养的动物细胞。典型的离子型去垢剂SDS(如2%SDS)能充分地裂解细胞。培养的动物细胞和细菌，如可以使用这种方式裂解。假如实验所用的抗体识别的抗原决定簇取决于自然空间构象，并对还原环境敏感，那么在裂解缓冲液
青海藏雪莲提取物实验研究取得实效
1月27日，青海省科技厅组织有关专家对青海大学附属医院承担完成的应用基础研究计划项目“藏雪莲水提取物对 UVB 引起的 HaCaT 细胞光老化作用影响的实验研究”进行了验收。 项目采用细胞培养、酶联免疫及免疫荧光染色检测等方法，对紫外线（UVB）诱导的人永生化角质细胞（HaCat）的氧化损伤
细胞和亚细胞提取物的制备实验9
实验方法原理差异去垢剂分离法（differential detergent fractionation, DDF) 包括使用一系列含不同去垢剂的 PIPES 缓冲液对细胞进行连续抽提，首先是毛地黄皂苷，其次是 Triton, 最后是 Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生 4 种在生化和电泳上相异的组
瑞香狼毒提取物抗实验性癫痫筛选研究
【摘 要】 目的 对瑞香狼毒六种提取物(依次为瑞香狼毒水、生离物、丙酮、石油醚、乙迷、乙醇提取物)进行药效学及毒性比较研究, 筛选出一种高效低毒的抗癫痫化合物, 便于临床前机制探讨。方法 采用动物三种惊厥模型, 测定瑞香狼毒六种提取物抗实验性癫痫半数有效量(ED50)。计算其半数致死量(LD
姜黄提取物一般药理作用实验研究
姜黄的醇提取物主要成分是酚性色素,其主要有姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素等。有实验表明姜黄提取物有抗血脂、抗氧化、促纤溶作用、抑制环氧酶和脂氧酶、抗肿瘤等。作者对姜黄提取物对实验动物的一般药理作用进行了研究,现将结果报道如下。1 材料和方法1 . 1 受试药物 姜黄提取物由成都市高新区药
细胞提取物中β半乳糖苷酶的测定实验
实验材料 转染了感兴趣 DNA 的哺乳动物培养细胞 试剂、试剂盒 大肠杆菌β-半乳糖苷酶 Tris-Cl
细胞提取物中β半乳糖苷酶的测定实验
本方案介绍报道分子载体（请见图 17-5) 转染哺乳动物细胞后，测定表达的β-半乳糖苷酶活性。本方法既简单快速，又可以用可见光分光光度计进行测定。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料转染了感兴趣 DNA 的哺乳动物培养细胞试剂、试剂盒大