采用PACE分析RNA肽相互作用实验
聚丙烯酰胺共电泳(poiyacrylamide coelectrophuresis,PACE ) 检测是相对较晚发展起来的定量分析蛋白质、肽与 DNA 或 RNA 相互作用的方法。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理聚丙烯酰胺共电泳(poiyacrylamide coelectrophuresis,PACE ) 检测是相对较晚发展起来的定量分析蛋白质、肽与 DNA 或 RNA 相互作用的方法。实验材料低放射性标记物RNA 底物试剂、试剂盒TBE 凝胶储存缓冲液电泳缓冲液丙烯酰胺储存液过硫酸铵考马斯亮蓝仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶电泳设备PACE 凝胶层析纸塑料膜凝胶干燥器暗盒实验步骤一、材料与设备1. 标准聚丙烯酰胺凝胶电泳设备,包括电源、电泳槽、夹子、热槽(1/8 英寸厚的铝板)。2. 宽而短的凝胶,因为宽的凝胶可以包含更多的浓度梯度,短的凝胶可以减少每个聚丙烯酰胺条需要的肽量,一般尺寸为 24 cm X ......阅读全文
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理 即使纳喷 MS/MS 技术已经成功用于直接分析蛋白酶解产生的磷酸肽但是出于以下一些原因,通常建议在质谱分析前作一些分离:(1) 磷酸肽在蛋白酶切产物中通常只占少数因此容易淹没在低率度离子产生的总背景中,肽分离技术可浓缩分析物,因此会提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性标记并具有相同比
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理 磷酸化分析的原理研究的最常见的磷酸化类型是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知发生的磷酸化还有精氨酸、组氨酸和赖氨酸的亚酰胺化,以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。这些修饰中的其中一些是化学不稳定的,通常观察不到,除非采取特殊的保护措
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理磷酸化分析的原理研究的最常见的磷酸化类型是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知发生的磷酸化还有精氨酸、组氨酸和赖氨酸的亚酰胺化,以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。这些修饰中的其中一些是化学不稳定的,通常观察不到,除非采取特殊的保护措施防止他们在蛋内质分离过程中消失。举例来说,组氨酸磷酸化是一
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——RPHPLC-分离磷酸肽
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤反相 HPLC 分段收集磷酸肽重现性好,简单,且不需要特殊装备。在 RP-HPLC 中,磷酸肽根据其疏水性被分离。分离后收集的组分经 Cerenkov计数检测。对 Cerenkov计数和时间作图,显示具放射性活性的组分的计数。纯化的磷酸肽用 MS 分析;可用不
Far-Western分析蛋白质相互作用实验
实验方法原理 实验材料 待分析的样品编码目的蛋白的 cDNA(已经克隆到体外表达载体中)试剂、试剂盒 1 × SDS 上样缓冲液丽春红 S 染液封闭缓冲液 I封闭缓冲液 II体外转录 翻译试剂盒PBS35S-甲硫氨酸探针纯化缓冲液探针稀释缓冲液仪器、耗材 微量过滤离心柱聚偏氟乙烯(PVDF)/硝化纤
Far-Western分析蛋白质相互作用实验
分析蛋白质混合物 实验方法原理 实验材料 待分析的样品 编码目的蛋白的
Far-Western分析蛋白质相互作用实验
使用 Far Western blot 分析蛋白质相互作用时,目的蛋白固定在一个固体支持膜上,然后用非抗体蛋白探测。 Far Western blot 能够用于识别复杂的蛋白复合物中蛋白质的特异性相互作用。实验材料待分析的样品编码目的蛋白的 cDNA(已经克隆到体外表达载体中)试剂、试剂盒1 × S
烟气分析仪采用烟气分析箱
烟气分析仪—专注于燃烧节能控制烟气排放检测,通过德国TUV认证,通过中国计量器具型式批准PA认证,烟气分析箱和手操器结合使用,移动手操器带无线数据传输,远程操作,大功率采样气泵带可视流量显示,帕尔帖冷却器及蠕动泵排放冷凝水,免维护的高速热敏打印机,传感器更换简单,大容量MMC数据存储卡,即插即用
RNA足迹和修饰干扰分析实验
实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础,它们都是建立在变性、半变性或
RNA足迹和修饰干扰分析实验
实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA
武汉病毒所在活体分子影像研究领域取得进展
中国科学院武汉病毒研究所崔宗强研究员和中科院生物物理研究所张先恩研究员联合研究团队在蛋白-蛋白及RNA-蛋白质相互作用的活体内分子成像方面取得重要进展,创建了远红光波段的荧光片段互补系统(Far-red fluorescence complementation systems),首次实现了动物活
抗肽抗体的制备实验
提高免疫原性肽的抗血清,是最简单的方法,获得非隔离的蛋白质的抗体,例如,对来自DNA序列信息的推定蛋白质序列。 这种方法也是有用的,当隔离的抗原是困难或费时,或当抗原是一个大的蛋白家族的成员。实验步骤: 将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠
苷肽叶绿素铜钠胶囊的药物相互作用
如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用,详情请咨询医师或药师。
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——2DPP-分离磷酸肽
实验方法原理即使纳喷 MS/MS 技术已经成功用于直接分析蛋白酶解产生的磷酸肽但是出于以下一些原因,通常建议在质谱分析前作一些分离:(1) 磷酸肽在蛋白酶切产物中通常只占少数因此容易淹没在低率度离子产生的总背景中,肽分离技术可浓缩分析物,因此会提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性标记并具有相同比活
磷酸化位点分析实验_磷酸肽的化学测序
实验方法原理磷酸化位点的确定也使用一些通用方法;磷酸化蛋白质被纯化,如果可能蛋白质要均一;磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物,其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列,定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法, 2D-PP 作图、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位点分析实验_磷酸肽的化学测序
实验方法原理磷酸化位点的确定也使用一些通用方法;磷酸化蛋白质被纯化,如果可能蛋白质要均一;磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物,其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列,定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法, 2D-PP 作图、 HPLC 或 lMAC
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
实验材料 冻干的纯化蛋白样品试剂、试剂盒 甲酸氢溴酸过氧化氢NaOH 固体仪器、耗材 旋转蒸发器小试管实验步骤 1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中,在室温下放置让,将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。3.在预冷的小试管中,将蛋白质溶解于 50ul 过
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验 方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化:大规模方法 方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化:微量方法 方案4 用Ellman 试剂测定自由巯基和二硫键实验 方案5 蛋白质的胰酶消化实验 方案6 用溴化氰切割 M
RNA干涉实验——采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验
实验方法原理首先在体外以长为 200~1000 bp 的 cDNA 为模板转录合成正义与反义的单链 RNA 分子,然后通过退火形成长的 dsRNA 分子,再用Diccr 核酸酶进行切割得到 siRNA 分子的混合物,通过纯化去除没有被切割的双链 RNA 分子和 DNA 模板以后,siRNA 分子就可
长链非编码-RNA(lncRNA)研究策略
长链非编码 RNA(long noncoding RNA,lncRNA)指的是转录本长度在 200-100000 nt 之间的 RNA 分子,它们不编码蛋白,位于细胞核或胞质内,具有保守的二级结构。研究显示,lncRNA 并非以前所认识的那样没有功能,它可与蛋白质、DNA 和 RNA 相互作
在线氢气分析仪采用什么分析方法
不一定,也可以叫水分仪呢氢气湿度主要是测量的对象,露点仪是测量原理。
RIP技术简介
由于miRNA被发现在癌症机理中起重要的作用,尤其是与肿瘤转移相关联,因此对于miRNA的研究来说,最让人兴奋的是有希望应有于癌症治疗中的RNA 抑制疗法或模拟miRNA表达疗法,尤其是对于出现肿瘤转移的癌症病人的治疗。但是miRNA具有成百上千个靶标,所以要完全理解一个miRNA和靶标的特异性反应
采用ACQUITY-UPLC-HClass系统的多元溶剂混合能力开发肽谱...
采用ACQUITY UPLC H-Class系统的多元溶剂混合能力开发肽谱图分析方法目标 ACQUITY UPLC ® H- Class 系统采用四元溶剂混合的自动化优化方案,对肽谱分析条件进行系统性优化。背景 肽谱分析用于确认某种蛋白质的一级结构,识别翻译后修饰(PTM),并分析杂质。任何蛋白质结
凝胶迁移或电泳迁移率实验
凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。凝胶迁移或电泳迁移率实验凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobili
简述注射用胸腺五肽的药物相互作用
1、注射用胸腺五肽的药物相互作用: (1)注射用胸腺五肽与许多常用药物合并使用,其中包括干扰素、消炎药、抗菌素、激素、镇痛药、降压药、利尿药、治疗心血管疾病的药物、中枢神经系统药物、避孕药,没有任何干扰现象出现。 (2)注射用胸腺五肽与干扰素合用,对于改善免疫机能有协同作用。 2、药物过量
肽质量检索实验_其他方案
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤用肽质量数据鉴定蛋白质所控制的实验参数中,最具决定性的参数是肽质量测量的精确度 。质量精确度越高,结果判定越可信。另一决定性参数是所用酶(或化学试剂)的专一性。酶越纯,专一性胞高,检索结果可信。常用的酶是胰蛋内酶。但是要注意的是,即便是高纯度的胰蛋白酶也会在非
肽质量检索实验_基本方案
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤鉴定数据库中已有序列的蛋白质的算法基于以下一些理念:(1) 肽段是由切点专一的试剂水解蛋白质产生的,通常用已知切点专一的蛋白酶。(2) 这些肽段的质量由 MALDI-MS 或 ESI-MS 精确测定。(3) 计符蛋白序列数据库中的每一序列被实验中所用水解试剂水
抗肽抗体的制备实验1
实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中,置于一个2 ml 的玻璃试管,加50 μl MBS/DMF溶液,于室温下温和搅拌30 min。 2. 加
抗肽抗体的制备实验2
实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 将10 mg 的血蓝蛋白溶于2 ml pH10的硼酸缓冲液中,置于15 ml 的玻璃试管中,温和振摇。2. 加10 μmol 的合成肽。3. 缓慢加入1 ml 的0.3%戊二醛溶液,于室温
PK120-的纯化及肽段氨基酸序列分析实验
实验材料PK-120试剂、试剂盒Q-Sepharose 树脂S-Sepharose 树脂Hudroxyapatite 羟基磷灰石Sephacryl S-200 凝胶赖氨酸内切酶乙腈三氯醋酸仪器、耗材Applied Biosystems model 477A 气相蛋白质测定仪Applied Biosy