用于表达分析的mRNA的制备实验——基本方案
同时检测包含成百上千种基因的 RNA 水平，从而构建一个详细的基因表达谱是分子生物学新的一项激动人心的本领。这是通过将 mRNA 定量扩增并用生物素标记再与 DNA 芯片杂交实现的，芯片上预先固定有与目的 mRNA 互补的寡核苷酸序列。来源：《精编分子生物学实验指南 第五版 第二十一章》用于表达监测以及与寡核苷酸芯片杂交的 mRNA 扩增实验方法原理扩增步骤完全决定于干净、完整的起始 RNA。对培养的细胞，作者采用胍盐裂解再用树脂纯化（如 Qiagen RNeasy Kit）的方案。 扩增 mRNA 可从 Poly（A）＋或总 RNA 开始。尽管 poly（A）＋灵敏度更高，因为除 掉了 cDNA 反应期间大部分与 rRNA 的错配，而使用总 RNA 起始则可以分析那些细 胞或组织有限的生物系统。使用总 RNA 起始一个重要的修正是将 cDNA 第一链合成的温度从 37℃ 提高到 50℃。探针选择严格限制在编码区最后的 600 ......阅读全文
mRNA的纯化
实验概要本文介绍了mRNA的纯化方法。实验原理mRNA的分离方法较多，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效，已成为常规方法。此法利用mRNA 3‘末端含有Poly（A ）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱时，在高盐缓冲液的作用下，mRNA被特异地结合在柱上，当逐渐降低盐的浓度时或在低
血涂片的制备实验
实验材料血液试剂、试剂盒消毒酒精瑞特染色液蒸馏水仪器、耗材载玻片盖玻片脱脂棉刺血针油镜用油显微镜实验步骤一、血涂片的制备按以下各步骤进行操作。（一）采血采血之前先揉搓需要采血的部位，如耳垂或手指尖，使血流旺盛。用酒精消毒皮肤，待干。以左手拇指及食指夹持局部，再用消毒过的刺血针刺之，血液自然流出。如血
反义RNA的制备实验
RNA 也可以由线状 DNA 为模板，通过 RNA 聚合酶（如T3、T7 或 SP6 ) 在体外合成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验材料限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐
反义RNA的制备实验
实验材料 限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒 氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐酸亚精胺NaCl胎盘RNase抑制物牛血清白蛋白RNA聚合酶DEPC仪器、耗材 DNA合成仪琼脂糖凝胶电泳微量离心管实验步骤 一、化学合成的 RN
植物RNA的制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 TELiCl无水乙醇乙酸钠氯仿仪器、耗材 匀浆器离心管离心机水浴锅实验步骤 1. 研钵和研棒先用液氮冷却，称出15 g 冻结植物组织于研钵中（加液氮保持冻结）。2. 用研棒磨成粉末，立即转移到一个盛有150 ml，研磨缓冲液和50 ml TLE缓冲液平衡酚的500
poly（A）+－RNA的制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 NaOH寡聚脱氧胸苷纤维素poly（A）样品缓冲液LiClEDTATE乙酸钠仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱，然后用水冲洗。2. 取0.5 g oligo（dT）纤维素干粉加1 ml 0.1 m
植物RNA的制备实验
酚/SDS法 实验材料 RNA 试剂、试剂盒
反义RNA的制备实验
实验材料 限制性内切核酸酶酶水解 模板 DNA 大肠杆菌 DNA 多聚酶 胰 DNaseⅠ 试剂、试剂盒
腺苷的实验制备方法
1、对照品溶液的制备精密称取腺苷对照品适量，加甲醇配制成1mL含40μg的对照品溶液。2、供试品溶液的制备取供试品20mL置100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀超声处理5分钟，放置待沉淀完全，滤过，取许滤液50mL蒸干，残渣加水20mL溶解，以水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇提取液蒸干，残渣加50
poly（A）+－RNA的制备实验
实验方法原理 大多数的信使RNA（mRNA）都带有poly（A）尾，而结构RNA没有。使用本工作方案，可以将带poly（A）的RNA从rRNA和tRNA中分离出来。 实验材料
poly（A）+－RNA的制备实验
利用cND A微阵列技术可用于：（1）并行分析检测成千上万个基因的表达情况；（2）在新基因的发现、基因组功能的研究、疾病的预测和诊断、药物靶标的确定和药物毒性预测等多方面发挥着重要的作用。实验方法原理大多数的信使RNA（mRNA）都带有poly（A）尾，而结构RNA没有。使用本工作方案，可以将带po
血涂片的制备实验
实验材料 血液试剂、试剂盒 消毒酒精瑞特染色液蒸馏水仪器、耗材 载玻片盖玻片脱脂棉刺血针油镜用油显微镜实验步骤 一、血涂片的制备按以下各步骤进行操作。（一）采血采血之前先揉搓需要采血的部位，如耳垂或手指尖，使血流旺盛。用酒精消毒皮肤，待干。以左手拇指及食指夹持局部，再用消毒过的刺血针刺之，血液自然流
金相试样的制备实验
一、实验目的 1. 学会金相试样的制备方法。 2. 熟悉常用化学浸蚀试剂及其使用方法。 二、实验内容 按照金相试样的制备方法，每人制备出碳钢金相试样一块，用金相显微镜观察自己制备的试样，要求试样在显微镜下观察应没有磨痕、组织清晰。 三、实验原理 要对金属材料的显微组织进行观察，首先就
酪蛋白的制备实验
等电点沉淀法 实验方法原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35 g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛
酵母前体mRNA剪接提取物实验
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。
酵母前体mRNA剪接提取物实验
真核生物前体 mRNA ( pre-mRNA ) 的剪接分为两步，即先从前体切去内含子，然后将两个外显子连接在一起形成成熟的 mRNA。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使
mRNA的S1作图实验——M13模板
S1作图能用以确定RNA的5’端和内含子边界。实验材料mRNA试剂、试剂盒琼脂糖电泳缓冲液ATP寡聚核苷酸引物多核苷酸激酶缓冲液T4仪器、耗材离心机分光光度计摇床实验步骤一、图片简介 二、实验步骤 1. 用1×碱性制胶缓冲液制备1.2%的低融点琼脂糖，并将凝固好的胶在1×碱性电泳缓冲液中浸泡过夜。
利用－Ambion－的－MicroPoly(A)Pure－试剂盒分离－mRNA－实验
实验材料原始细胞试剂、试剂盒乙醇仪器、耗材组织均化器MicroPoly(A)Pure 试剂盒实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇,100%2. 特殊设备组织均化器（可选），见二、方法步骤 4水浴，预设到 70°C3. 其他MicroPoly(A)Pure 试剂盒（Ambion)4. 细胞和组
利用－Ambion－的－MicroPoly(A)Pure－试剂盒分离－mRNA－实验
实验材料 原始细胞试剂、试剂盒 乙醇仪器、耗材 组织均化器MicroPoly(A)Pure 试剂盒实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇,100%2. 特殊设备组织均化器（可选），见二、方法步骤 4水浴，预设到 70°C3. 其他MicroPoly(A)Pure 试剂盒（Ambion)4.
利用－Ambion－的－MicroPoly(A)Pure－试剂盒分离－mRNA－实验
实验材料 原始细胞 试剂、试剂盒 乙醇 仪器、耗材
mRNA的提取及纯化实验——亲和柱层析法
实验方法原理该方法利用mRNA上的寡聚A可与较联寡聚T的纤维素柱在高盐下以碱基配对形式发生亲和吸附，而在低盐下，碱基配对能力破坏，吸附解除，而其他成分的RNA则不具该特性，因此在高盐下当RNA抽提样品流经该柱时，mRNA被挂在柱上，而其他RNA则随高盐溶液流出；当用低盐洗脱液洗柱时，mRNA随洗脱液
Polyadenylation－of－mRNA
Gene expression requires the coordination and integration of multiple processes, including transcription, splicing, polyadenylation, nucleocytoplasmic
细菌RNA制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 STET氯仿乙酸钠氯化铯无水乙醇EDTA仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期，加入1/20体积终止缓冲液，置于冰上。2. 于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。3.
制备电泳实验——洗脱
蛋白质的分离纯化是研究其结构、特性和功能的基础，诸如一级结构、溶液构象、晶体结构、免疫功能和生物机理等研究都必须用一定量并具有活性的纯样品作为研究材料。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编：郭尧君。实验方法原理严格来说洗脱不能达到制备的目的，它只能得到微克到毫克级的样品。通常是用其他方法分离的粗样品
细菌RNA制备实验
革兰氏阴性细菌中提取 革兰氏阳性细菌中提取 实验材料 RNA 试
巧克力平板制备实验
实验方法原理 巧克力平板应用羊血或免血制备。因其中含有Ⅹ和Ⅴ因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好，凡疑有这些菌种存在的标本，均须接种巧克力平板。血液标本培养，增苗后有细苗生长，若移种巧克力平板上，有利于分离到更多的细菌。实验步骤 成分：牛肉浸出液： 1000 ml蛋白胨：
血平板制备实验
实验方法原理肉汤琼脂中加羊血或兔血均可。用血量为5-7%。在血平板上除了可以观察菌落的形态外，还可判断溶血情况，菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血。菌落周围成绿色为α-溶血。溶血情况可以显微镜下用低倍镜观察。实验步骤成分：牛肉浸出液： 1000 ml蛋白胨：
巧克力平板制备实验
实验方法原理主要是蛋白胨和牛肉粉用来提供细菌生长所需的碳源、氮源、氨基酸以及维生素。氯化钠维持培养基中的渗透压，琼脂用做凝固剂。脱纤维羊血提供氯化血红素和辅酶I，为嗜血杆菌属的生长提供特殊营养。巧克力平板培养基还能够培养其他细菌，主要的原因是血液中有V、X因子，这两种因子是位于红细胞中的，一般细菌不
血平板制备实验
实验方法原理 肉汤琼脂中加羊血或兔血均可。用血量为5-7%。在血平板上除了可以观察菌落的形态外，还可判断溶血情况，菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为β-溶血。菌落周围成绿色为α-溶血。溶血情况可以显微镜下用低倍镜观察。实验步骤 成分：牛肉浸出液： 1000 ml蛋白胨：
质粒DNA的小量制备实验——煮沸小量制备法
实验方法原理当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。推荐采用本方案从1-24个菌落培养液中制备少量的质粒DNA，尽管该方案十分快捷，但制备的DNA的