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第三篇如何设计嵌套PCR引物以及注意事项

嵌套 PCR 又称巢式 PCR(nested PCR,nPCR),是指以第一次 PCR 产物为模板直接进行第二次 PCR 扩增,以增加 PCR 的灵敏度,第二次 PCR 设计的引物在第一次所用引物对的内部,这种引物被称为「内部」或 「嵌套」引物。以第一次 PCR 产物为模板进行第二次 PCR 扩增,可明显提高敏感度而对特异性无损(Albert and Fenyo 1990)。由于嵌套 PCR 使用两套引物对,在补充反应组分如 Tag DNA 聚合酶后就可能提髙总循环数。如果不能进行完整的嵌套 PCR (使用两个内部引物),为提髙灵敏度和特异性,可设计半嵌套 PCR,即只用一个内部引物,与来自第一次反应的外部引物结合使用。嵌套 PCR 的最大问题是它易受污染。必须将第一次 PCR 的反应管打开,将初级产物转移 到新管,以进行第二次反应。其缺点也包括进行两轮 PCR 需要额外成本和额外进行引物合成。为了降低污染风险,可使用一种被称为......阅读全文

第三篇 如何设计嵌套 PCR 引物以及注意事项

嵌套 PCR 又称巢式 PCR(nested PCR,nPCR),是指以第一次 PCR 产物为模板直接进行第二次 PCR 扩增,以增加 PCR 的灵敏度,第二次 PCR 设计的引物在第一次所用引物对的内部,这种引物被称为「内部」或 「嵌套」引物。以第一次 PCR 产物为模板进行第二次 PCR 扩增,

污水处理厂运营现场技术总结(第三篇)

上接第二篇41、混凝剂的配制混凝剂配制程序为:溶解槽中进水至一定量→同时将定量化学药剂加入到溶解槽中→开始搅拌至完全溶解→溶药槽→持续进水至要求的药液浓度。(详细混凝剂配置操作步骤由供应商或项目城市依据实际情况进行补充。) 混凝剂的投加量应根据污泥的性质、硝化程度、污泥含水量等因素进行调整。应根据混

2个月内发第三篇顶刊,到底是哪个实验室?

  北京时间2021年1月29日,西湖大学施一公教授研究组在《科学》(Science)发表题为《激活状态的人源次要剪接体的结构》(Structure of the Activated Human Minor Spliceosome)的科研论文,是剪接体结构与机理研究的又一个重大突破。  这已经是两个

第三篇Cell!曹雪涛团队揭示抗细菌天然免疫应答新机制

  《细胞》杂志10月12日在线发表了中国工程院院士、南开大学校长曹雪涛团队在天然免疫与炎症领域的新研究结果。研究发现天然免疫细胞迁移对干扰素受体在细胞膜表面组装与表达至关重要,进而使免疫细胞有效感知干扰素作用、激活天然免疫功能以清除胞内细菌感染。该发现从细胞因子受体的角度揭示了天然免疫应答调控新型

多重PCR(Multiplex PCR)

一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同.    多

多重PCR(Multiplex PCR)

一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同.    多

Troubleshooting for PCR and multiplex PCR

Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE

PCR简介/PCR仪

PCR的要素基本的PCR须具备PCR仪图册1.要被复制的DNA模板 Template2.界定复制范围两端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料(四种脱氧核苷酸)及水。 PCR仪工作原理利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制

重叠PCR—overlap PCR

1、简介 重叠PCR也是基本的PCR原理:变性-退火-延伸。不同的是在重叠PCR过程是两个或者几个片段重叠延伸之后,再进行指数扩增的PCR过程。  2、基本原理*步:PCR产生两个或者几个片段,这几个片段之间必须有重叠区。 第二步:以两个片段为例,见上图,*步产生的两个片段,A D链之间有互补,B

普通PCR梯度PCR 原位PCR 荧光定量PCR仪的区别

  普通PCR仪:   一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪,也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。如;(ABI 2720)   梯度PCR仪:   一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称