从组织分离粗制质膜组分的另一实验方法

Neville(1968) 所述的方法对分离鼠肝质膜的效果较好,但对分离其他组织的质膜不一定适用。这里,介绍一种从其他组织制备粗制质膜组分的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。试剂、试剂盒匀浆缓冲液仪器、耗材Dounce 氏玻璃匀浆器(15-ml)带 A 杵实验步骤设备Dounce 氏玻璃匀浆器(15-ml),带 A 杵试剂匀浆缓冲液(配方,见 试剂的配制 PP.234-240)操作程序全部操作在 0~4℃ 下进行。1) 在冰冷的匀浆缓冲液屮切碎组织块,倾出血水。用匀浆缓冲液漂洗组织碎块, 并将它们置于冰上。重复上述操作,直至组织碎成 1mm3 大小的碎块,且无可见的血。2)加入 5 倍(v/v) 于组织块体积的缓冲液,在置于冰浴的 Dounce 氏玻璃匀浆器中用 A 杵抽研 10~20 次,匀浆组织。3) 匀浆 4℃ 下 600 g 离心 10 min。上清含细胞膜、线粒体和细胞溶胶,沉淀中有未......阅读全文

从拟南芥菜中分离叶绿体实验

实验材料叶组织试剂、试剂盒研磨悬浮缓冲液仪器、耗材烧杯Polytron 匀浆器实验步骤1. 组织匀浆(1) 收集 10 g 叶组织,放进一 400 ml 的烧杯中。(2) 加入 200 ml 冰冷的研磨悬浮缓冲液。在 4℃ 的房间中,用 Polytron 匀浆器进行 6~7 个 3 秒钟脉冲匀浆叶组

从拟南芥菜中分离叶绿体实验

            实验材料 叶组织 试剂、试剂盒 研磨悬浮缓冲液 仪器、耗材

从拟南芥菜中分离叶绿体实验

实验材料 叶组织试剂、试剂盒 研磨悬浮缓冲液仪器、耗材 烧杯Polytron 匀浆器实验步骤 1. 组织匀浆(1) 收集 10 g 叶组织,放进一 400 ml 的烧杯中。(2) 加入 200 ml 冰冷的研磨悬浮缓冲液。在 4℃ 的房间中,用 Polytron 匀浆器进行 6~7 个 3 秒钟脉冲

真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验

实验方法原理 差异去垢剂分离法(differentialdetergentfract10nat10n,DDF)包括使用一系列含不同去垢剂的PIPES缓冲液对细胞进行连续抽提,首先是毛地黄皂苷,其次是Triton,最后是Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生4种在生化和电泳上相异的组分(见图3.3和表3

真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验

基本方案 附加方案:去垢剂提取物中RNA的分离 附加方案:用镁沉淀微管蛋白和微管结合蛋白             实验方法原理 差异去垢剂分离法(differen

用差速离心法从大鼠肝脏中分离原代细胞重线粒体组分

试剂和器材1. 甘露醇缓冲液:0.2mol/L甘露醇、50mmol/L蔗糖溶液、10mmol/L KCl、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;2. 玻璃棒;3. Dounce匀浆器(20—30ml宽松配制,Wheaton B型);4. 高转矩桥式电动机(半

从棉花组织中提取微量RNA的标准实验方法protocol

Prior to Extractions ・ Bake all necessary glassware, metal spatulas, mortars, and pestles overnight in a 200℃ oven after   wrapping them in aluminum f

质膜的液态二相离心分离

用葡聚糖(Dextran)和聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)二相不连续梯度分离纯化动植物样品的细胞膜片断(特别是质膜)的方法始于1989年(文献1)。这种方法的特点是快速,操作简单,重复性好。只需要低速离心机(4,000rpm),分离成本低。用PEG和Dextran 混合

质膜的液态二相离心分离

用葡聚糖(Dextran)和聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)二相不连续梯度分离纯化动植物样品的细胞膜片断(特别是质膜)的方法始于1989年(文献1)。这种方法的特点是快速,操作简单,重复性好。只需要低速离心机(4,000rpm),分离成本低。用PEG和Dextran 混合后再

从脂肪组织提取蛋白的方法

从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤,从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易,但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪组织有白色和棕色脂肪两种类型,被称为白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT)。脂肪组织中含有许多脂滴,蛋白质含量小于细胞总数的 2%

组织的分离实验_胶原酶消化分离法

实验方法原理胶原酶是一种由细菌中提取出的酶,对胶原有很强的消化作用,适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。上皮细胞本身对胶原酶有一定耐性,但胶原酶对细胞间质有好的消化作用,可使上皮细胞与胶原成分脱离而不受伤害,效果甚好。此酶在钙和镁离子存在情况下仍有活性,故可用BSS和含有血清的培养液配制。实验

从原代组织细胞和原培养容器分离细胞的技术

一、从原代组织中分离细胞 将组织块分离(散)成细胞悬液的方法有多种,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。 从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短,以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织,获得较高产量的有活性细胞。

浸取法分离可溶组分的步骤

浸取法分离可溶组分的步骤一般为:①溶剂与固体物料密切接触,使可溶组分转入液相,成为浸出液。②浸出液与不溶固体(残渣)的分离。③用溶剂洗涤残渣,回收附着在残渣上的可溶组分。④浸出液的提纯与浓缩,取得可溶组分的产品。⑤从残渣中回收有价值的溶剂。

细胞[组分]分级分离的定义

中文名称细胞[组分]分级分离英文名称cell fractionation定  义应用不同的离心技术,将细胞匀浆中的各种细胞器或不同组成成分分离纯化的过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

植物组织膜性囊泡(RSOV和IOV)制备试剂盒使用说明

主要用途植物组织膜性囊泡(RSOV和IOV)制备试剂是一种旨在通过差速离心技术从植物组织中分离出各种正常外向膜性囊泡(Right-side out;RSOV)和内侧外翻膜性囊泡(In-side out;IOV)组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种植物组

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

该方案是由 Godfrey 等改进 Fisher 的方案发表的。此前已有从固定组织中纯化 RNA 的方案发表。Ambion 和 Roche 发明了从石蜡包埋的组织中纯化 RNA 的商品化试剂盒。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验材料石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒甲酰胺

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

            实验材料 石蜡包埋的组织样品 试剂、试剂盒 甲酰胺 消化缓冲液 乙醇 肝糖

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

实验材料 石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒 甲酰胺消化缓冲液乙醇肝糖异丙醇苯酚 氯仿蛋白酶 KTrizol二甲苯仪器、耗材 微量离心管恒温箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去离子化的甲酰胺焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水消化缓冲液(lmol/L 异硫氰酸胍,25 mmol/Lβ-巯基乙醇

从成体昆虫中分离活细菌的方法

Isolation of live bacteria from adult insectsHoracio M Frydman , hfrydman@princeton.edu, Associate ResearcherRelated Journal & Article InformationManu

从成体昆虫中分离活细菌的方法

Isolation of live bacteria from adult insectsHoracio M Frydman , hfrydman@princeton.edu, Associate ResearcherRelated Journal & Article InformationManu

从植物器官分离单细胞的方法介绍

分离单细胞的最佳材料是叶组织,因为叶片中的细胞近似于一个同质细胞群体,较适合于特定和调控的大规模细胞培养。用机械法或酶解法可以从这种完整植物体器官(如叶细胞)分离出单细胞。1 机械法指通过机械磨碎、切割植物体从而获得游离的单细胞。用机械法可大规模地对薄壁组织细胞进行分离。2 酶解法指用专一的水解酶(

细胞死亡时的质膜变化实验

磷酯酰丝氨酸外化的检测 PI吸收分析             实验材料 细胞样品 试剂、

细胞死亡时的质膜变化实验

磷酯酰丝氨酸外化的检测 PI吸收分析             实验材料 细胞样品 试剂、

真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验——​-附加方案

实验方法原理应用异硫氰酸胍/苯酚/氯仿的方法可从去垢剂提取物中分离总RNA。实验步骤①每1倍体积的去垢剂提取物中加入3倍体积的RNA提取缓冲液,反复倾晃4次以使蛋白变性。②每一个样品中加入:0.1倍体积的2mol/L醋酸钠(PH4.0)1倍体积的水饱和苯酚0.2倍体积的氯仿每加入一种组分就剧烈混匀。

纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA

实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织,直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织(0.05~0.3 g)在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿,混合均匀,冰浴 15 分钟

利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验

实验材料 植物组织试剂、试剂盒 Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态N2NaCl柠檬酸钠仪器、耗材 转子-定子均化器研钵和杵圆锥形管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂Trizol(Invitrogen)氯仿异丙醇乙醇,70%,用焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水配制DEPC 处

利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验

下述方案是经修改过的 Trizol 方案,用于从植物组织中分离 RNA,其中增加了一个高盐异丙酵沉淀步骤,以选择性地沉淀 RNA,而将多聚糖和蛋白多糖留在溶液里。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验材料植物组织试剂、试剂盒Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态

利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验

            实验材料 植物组织 试剂、试剂盒 Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇

牙髓组织的分离

试剂和材料:1. 无镁和钙的PBS平衡盐溶液(PBSA);2. MSC培养基:含2mmol/L 谷氨酰胺的α-MEM,添加15%胎牛血清,0.1mmol/L左旋抗坏血酸磷酸盐,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素;3. 培养皿;4. 精细镊(小号和大号);5. 牙科碳化钻头;6. 牙挖器;7

从组织中分离制备细胞核基质/中间纤维支架结构

实验材料新鲜组织试剂、试剂盒NaCl 缓冲液细胞骨架缓冲液仪器、耗材Teflon 研杵Doume 匀浆器实验步骤1. 在 4℃ 将新鲜组织切成 1 mm3 左右的小块。在 4℃,用 Teflon 研杵和 Doume 匀浆器在含 0.5% Tritron X-100 的细胞骨架缓冲液中对切碎的组织进行