氨基酸代谢标记实验_备择方案2 示踪标记细胞
实验材料细胞悬液／贴壁细胞[35S]标记L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒PBS(冷冻)37℃ 示踪培养基仪器、耗材配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤1. 每个时间点和每个样品准备 0.5 × 107 ~2 × 107 细胞， 每 0 .5 × 107 ~2 × 107 细胞用 2 ml 0.1~0.2 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸脉冲标记 10~30 min （见基本方案步骤 1~4，或见备择方案 1 步骤 1~5）。2. 去除 [35S] 甲硫氨酸的工作溶液，用 10 ml 37℃ 的示踪培养基洗一次，并加入 10 ml 37℃ 的示踪培养基。3. 37℃ 培养到预期时间。拧紧试管盖子在旋转情况下培养细胞悬液。在 032 培养箱里孵育贴壁细胞。4. 刮取贴壁细胞并转移到 15 ml 离心管。收集刮取的细胞或细胞悬浮液于......阅读全文
靶细胞杀伤实验：AnnexiV标记法
正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserine，PS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD
单个神经细胞标记实验
实验方法原理本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的技术指导（也可参考Kitai and Bishop 1981)。实验材料猫的小脑 试剂
32－P－标记裂解培养细胞实验
实验方法原理 实验材料 待标记的培养细胞试剂、试剂盒 37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)温和裂解缓冲液／RIPA 裂解缓冲液仪器、耗材 树脂玻璃挡板(1 in 厚)取液器吸头树脂玻璃盒37℃微量离心管一次性
32－P－标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞） 基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞） SDS煮沸法裂解细胞 实验方法原理
单个神经细胞标记实验
用辣根过氧化物酶对单个Purkmje细胞进行细胞内标记实验实验方法原理本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的技术指导（也可参考Kitai and Bishop 1981)。实验材料猫的小脑试剂、试剂盒利多卡因Karnovsky 型固定液甲酚紫仪器、耗材微
单个神经细胞标记实验
用辣根过氧化物酶对单个Purkmje细胞进行细胞内标记实验 实验方法原理 本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的
重组蛋白质的代谢标记实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
离体神经突触的代谢性标记实验
试剂、试剂盒 固定剂温育液氯霉素放射自显影乳剂显影剂SDS样本缓冲液实验步骤 一、放射自显影神经元在条件培养基中培养 2d，如第十章所述。1.用一个锋利的微电极从胞体分离神经突起，并用牵引电极将胞体移出培养皿 (见第十章)。2.在培养液中加入终浓度 0.lmmol/L 氯霉素，阻断线粒体蛋白的合成。
重组蛋白质的代谢标记实验
由于重组蛋白质表达的时候，宿主蛋白质的合成基本终止，因此体内代谢标记是检测重组蛋白质的敏感方法。实验材料蛋白质试剂、试剂盒胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材培养瓶离心机转子实验步骤1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病
重组蛋白质的代谢标记实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材 培养瓶离心机转子实验步骤 1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病毒分别准备一个平皿供感染用，并准备一个对照平皿供野生型杆状病毒感染。于27℃温育
离体神经突触的代谢性标记实验
mRNA 和 rRNA 存在于树突和轴突内（VanMinnen1994;Steward1997)。令人疑惑不解的是，位于胞体外区域的 mRNA 是否真的被翻译。下面的方法可以证明神经突起确实可以不依赖胞体而合成蛋白。现代神经科学研究技术作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻
离体神经突触的代谢性标记实验
试剂、试剂盒 固定剂 温育液 氯霉素 放射自显影乳剂 显影剂 SDS样本缓冲液 实验步骤
以量子点对包膜病毒进行位点特异性标记用于单病毒示踪
对于单病毒的示踪，是研究病毒感染路径和表征病毒与靶细胞动态相互作用的有力工具，有助于阐明病毒侵入细胞并播散的关键步骤，揭示病毒流行和发病的机理，从而有利于形成具有针对性的新的治疗策略。为了实现对单病毒的持续示踪，荧光标记物必须具备良好的荧光稳定性，配备应用高放大倍数的物镜，从而实现对微小病毒颗粒
以量子点对包膜病毒进行位点特异性标记用于单病毒示踪
对于单病毒的示踪，是研究病毒感染路径和表征病毒与靶细胞动态相互作用的有力工具，有助于阐明病毒侵入细胞并播散的关键步骤，揭示病毒流行和发病的机理，从而有利于形成具有针对性的新的治疗策略。为了实现对单病毒的持续示踪，荧光标记物必须具备良好的荧光稳定性，配备应用高放大倍数的物镜，从而实现对微小病毒颗粒
以量子点对包膜病毒进行位点特异性标记用于单病毒示踪
对于单病毒的示踪，是研究病毒感染路径和表征病毒与靶细胞动态相互作用的有力工具，有助于阐明病毒侵入细胞并播散的关键步骤，揭示病毒流行和发病的机理，从而有利于形成具有针对性的新的治疗策略。为了实现对单病毒的持续示踪，荧光标记物必须具备良好的荧光稳定性，配备应用高放大倍数的物镜，从而实现对微小病毒颗粒（2
标记免疫分析技术2
四、发光免疫分析：发光免疫分析：直接用发光物质标记抗原或抗体生物的发光剂：荧火虫荧光素（酶催化发光）化学的发光剂：鲁米那、吖啶脂等在有过氧化氢的弱碱溶液中即可迅速发光。美国CHIRON公司生产的ACS-180使用类均相的包被抗体的磁性微粒，扩大了反应面，加速了免疫反应，又应用吖啶脂作标记的化学发光分
物质代谢检查方法同位素示踪法
同位素是指原子序数相同而原子量不同的同种元素。当化合物分子中的原子被相同元素的同位素所取代，而取代后的分子性质没有改变时，称为 “同位素标记”。同位素标记是研究体内代谢水平的常用方法，将同位素标记的化合物引进代谢体系来观察其代谢过程与结果的方法就是同位素示踪法。同位素有稳定同位素和放射性同位素两种，
同位素示踪法代谢方法的介绍
同位素是指原子序数相同而原子量不同的同种元素。当化合物分子中的原子被相同元素的同位素所取代，而取代后的分子性质没有改变时，称为 “同位素标记”。同位素标记是研究体内代谢水平的常用方法，将同位素标记的化合物引进代谢体系来观察其代谢过程与结果的方法就是同位素示踪法。同位素有稳定同位素和放射性同位素两
蛋白质磷酸化的测定实验—代谢标记
实验材料细胞仪器、耗材培养瓶实验步骤1. 用 60 mm 或 100 mm 培养瓶，在完全培养基中培养细胞至所希望的密度。2. 用预热的低磷酸培养基（无放射性磷酸盐）冲洗两次，然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培养基（50~100 μmol/L 无机磷酸）。3. 培养结束后，回收
实验动物标记实验
实验材料 兔子 小鼠试剂、试剂盒 3%～5%苦味酸 0.5%中性品红 2%硝酸银实验步骤 1. 染色法 适用于小动物，如兔子、大鼠、小鼠等。此方法是将化学药品涂在动物的被毛上，以不同颜色来区分动物。常用的化学药品有：3%～5%苦味酸溶液（黄色）、0.5%中性品红（红色）、2%硝酸银（咖啡色）
实验动物标记实验
实验材料兔子 小鼠试剂、试剂盒3%～5%苦味酸 0.5%中性品红 2%硝酸银实验步骤1. 染色法 适用于小动物，如兔子、大鼠、小鼠等。此方法是将化学药品涂在动物的被毛上，以不同颜色来区分动物。常用的化学药品有：3%～5%苦味酸溶液（黄色）、0.5%中性品红（红色）、2%硝酸银（咖啡色）。标记的原则是
示踪扩散实验的方法介绍
示踪剂的选择示踪剂分为气溶胶示踪剂和气体示踪剂两种。气溶胶示踪剂包括硫化锌、碘化银颗粒。这种示踪剂有着明显的缺点：颗粒容易沉淀、被淋洗而遭受损失，在大气中也容易变性，取样难度大，而且大多有毒。所以气溶胶示踪剂已经基本上被抛弃了。现在多选用气体示踪剂。选择气体示踪剂的最主要原则是：（1）无色无味，无毒
ULS标记实验
基本方案 实验方法原理 Universal Linkage System(ULS®;KREATECH Biotechnology BV
ULS标记实验
实验方法原理 Universal Linkage System(ULS®;KREATECH Biotechnology BV）是用铂染色络合物与鸟嘌呤核苷的N7残基反应进行标记的方法。反应使核酸与铂荧光基团之间形成稳定的化学键。依据反应条件，ULS化合物在较低的程度上也与腺嘌呤形成络合物。该
ULS标记实验
实验方法原理Universal Linkage System(ULS®;KREATECH Biotechnology BV）是用铂染色络合物与鸟嘌呤核苷的N7残基反应进行标记的方法。反应使核酸与铂荧光基团之间形成稳定的化学键。依据反应条件，ULS化合物在较低的程度上也与腺嘌呤形成络合物。该方法已用于
用[32P]磷酸标记细胞实验
标记单层培养细胞 标记悬浮培养的HeLa细胞 实验材料 HeLa 细胞
用[32P]磷酸标记细胞实验
标记单层培养细胞标记悬浮培养的HeLa细胞实验材料HeLa 细胞 试剂、试剂盒FCS
用[32P]磷酸标记细胞实验
实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 FCS磷酸盐仪器、耗材 无磷酸培养基实验步骤 1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸
断裂标记免疫电镜技术（2）
)超薄切片法步骤:①至⑤同临界点干燥法。⑥1%锇酸，室温固定2h，系列酒精或丙酮脱水，常规电镜包埋。⑦切半薄片，光镜定位合适的断裂部位，再切超薄切片，铀铅染色，透射电镜观察。断裂标记法目前文献报告应用较多的是植物凝集素-胶体金免疫标记技术，常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 胶体金免疫标记技术.C
独特无标记细胞分析技术无需荧光染料标记细胞也可对...
独特无标记细胞分析技术无需荧光染料标记细胞也可对其进行成像分析简介基于细胞成像的分析技术一般需要使用荧光染料进行标记，一些荧光标记可能对活细胞具有毒性或者只能用于固定过的细胞进行染色。无标记细胞分析技术使得研究者既无需耗时耗力的染色流程也无需担心染料对正常细胞活力的影响，就可以计算出细胞数目和细胞汇