重组蛋白质的代谢标记实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材 培养瓶离心机转子实验步骤 1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病毒分别准备一个平皿供感染用，并准备一个对照平皿供野生型杆状病毒感染。于27℃温育2 h。使细胞贴壁。吸出培养液，然后加入1 ml 含重组病毒或1 ml 含野生型病毒的无血清完全培养液，感染复数（MOI）为5~10。2. 将每个平皿中的培养液移去后，再往其中加入3 ml 含10%胎牛血清的完全培养液， 27℃温育约40 h。 3. 小心去除培养液，用不含甲硫氨酸或不含甲琉氨酸和半胱氨酸的培养液洗细胞一次， 加入1 ml 已添加EXPRE35S35S至0.25~0.5 mCi/ml 的同样培养液。于27℃温育3~4 h。 4. 将细胞和培养物上清移......阅读全文
重组蛋白质的代谢标记实验
由于重组蛋白质表达的时候，宿主蛋白质的合成基本终止，因此体内代谢标记是检测重组蛋白质的敏感方法。实验材料蛋白质试剂、试剂盒胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材培养瓶离心机转子实验步骤1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病
重组蛋白质的代谢标记实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
重组蛋白质的代谢标记实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材 培养瓶离心机转子实验步骤 1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病毒分别准备一个平皿供感染用，并准备一个对照平皿供野生型杆状病毒感染。于27℃温育
杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白的代谢标记
实验方法原理由于重组蛋白表达的时候，宿主蛋白质的合成基本终止，因此体内代谢标记是检测重组蛋白的敏感方法。所有的标记氨基酸都掺入到晚期病毒特异的蛋白质（包括目的蛋白）的合成。35S 标记的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射标记的氨基酸。为了获得更好的结果，在标记之前细胞内的这两种氨基酸应当被清除：将细胞在
蛋白质磷酸化的测定实验—代谢标记
实验材料细胞仪器、耗材培养瓶实验步骤1. 用 60 mm 或 100 mm 培养瓶，在完全培养基中培养细胞至所希望的密度。2. 用预热的低磷酸培养基（无放射性磷酸盐）冲洗两次，然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培养基（50~100 μmol/L 无机磷酸）。3. 培养结束后，回收
靶蛋白的放射标记实验—酵母和细菌蛋白质代谢放射标记
实验材料细胞仪器、耗材基本培养基实验步骤1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基，于合适温度中度振荡培养过夜。2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物，继续温育至 107 细胞/ml （酵母）或对数期中期（细菌）。3. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞，用无硫酸盐基本培养基
氨基酸代谢标记实验
暂未评分点评实验，有机会获丁当奖励 +收藏氨基酸代谢标记实验标签：氨基酸 代谢 标记精编分子生物学实验指南第五版 第十章代谢标记技术用于研究蛋白质的生物合成、加工、细胞内运输、分泌、降解和物理化学特性。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》
氨基酸代谢标记实验
实验方法原理 在含有放射性标记氨基酸的培养基中，短期培养细胞（800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒 PBS(冷冻)37℃ 脉冲标记培养基仪器、耗材 配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤 1. 室温融化 [35S] 标记甲硫氨酸，并用预热的（37℃）脉冲标记培养基制
重组病毒的蛋白质分析实验
实验材料 Sf细胞试剂、试剂盒 胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材 培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤 1. 接种2.5×108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥ 2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml
重组病毒的蛋白质分析实验
实验材料Sf细胞试剂、试剂盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤1. 接种2.5x108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml 病毒贮液中取0.5
蛋白质的生物合成标记实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 甲硫氨酸PBS仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 培养悬浮细胞至对数增长期，室温300 g 离心5 min。回收107~108细胞。 2. 每2×107细胞用约10 ml 37℃的短时间标记培养基在圆锥型试管中洗涤，于室温300 g 离心5 min 回收细胞，小
蛋白质的生物合成标记实验
甲硫氨酸短时间标记悬液中的细胞 甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞 甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记 实验材料 蛋白质
蛋白质的生物合成标记实验
甲硫氨酸短时间标记悬液中的细胞 甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞 甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记 实验材料 蛋白质
离体神经突触的代谢性标记实验
mRNA 和 rRNA 存在于树突和轴突内（VanMinnen1994;Steward1997)。令人疑惑不解的是，位于胞体外区域的 mRNA 是否真的被翻译。下面的方法可以证明神经突起确实可以不依赖胞体而合成蛋白。现代神经科学研究技术作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻
离体神经突触的代谢性标记实验
试剂、试剂盒 固定剂温育液氯霉素放射自显影乳剂显影剂SDS样本缓冲液实验步骤 一、放射自显影神经元在条件培养基中培养 2d，如第十章所述。1.用一个锋利的微电极从胞体分离神经突起，并用牵引电极将胞体移出培养皿 (见第十章)。2.在培养液中加入终浓度 0.lmmol/L 氯霉素，阻断线粒体蛋白的合成。
离体神经突触的代谢性标记实验
试剂、试剂盒 固定剂 温育液 氯霉素 放射自显影乳剂 显影剂 SDS样本缓冲液 实验步骤
重组蛋白质的大规模生产实验
基本方案 碱处理法 实验材料 重组蛋白质 仪器、耗材
氨基酸代谢标记实验_备择方案－3－长期细胞标记
实验方法原理长期标记意味着对细胞进行 6～32 h 持续的代谢标记。该方法特别适用于研究合成速度相对较慢的蛋白质或研究成熟的标记蛋白而不是生物合成的前体。稳定状态的标记是长期标记的一种形式，在此过程细胞和放射性标记的氨基酸一起孵育直至放射性标记蛋白的合成和降解速率相当。如果蛋白质复合体中的亚基的初级
蛋白质的生物合成标记实验（二）
实验材料细胞试剂、试剂盒PBS甲硫氨酸仪器、耗材培养箱离心机实验步骤1. 在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞（0.5~2×107）至70%~90%汇片，吸去培养液，用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。2. 加入5 ml 于37℃短时间标记培养基，在5%CO2的加湿培
蛋白质的生物合成标记实验（一）
甲硫氨酸短时间标记悬液中的细胞生物按照从脱氧核糖核酸 (DNA)转录得到的信使核糖核酸（mRNA）上的遗传信息合成蛋白质的过程。由于mRNA上的遗传信息是以密码（见遗传密码）形式存在的，只有合成为蛋白质才能表达出生物性状，因此将蛋白质生物合成比拟为转译或翻译。实验材料蛋白质试剂、试剂盒甲硫氨酸PBS
蛋白质的生物合成标记实验（三）
实验材料细胞试剂、试剂盒甲硫氨酸PBS仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1. 准备和用［35S］甲硫氨酸标记细胞，用0.2~1 mCi/ml 的［35S］甲疏氨酸脉冲标记细胞5~30 min。 2. 脉冲标记后，除去［35S］甲硫氨酸培养基，用10 ml 于37℃追加培养基冼细胞1次，加入10 ml
氨基酸代谢标记实验_备择方案－2示踪标记细胞
实验材料细胞悬液／贴壁细胞[35S]标记L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒PBS(冷冻)37℃ 示踪培养基仪器、耗材配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤1. 每个时间点和每个样品准备 0.5 × 107 ~2 × 107 细胞， 每 0 .5 ×
蛋白质标记
Biosynthetic labeling (Sefton Lab)Biotinylation of Antibody (Contributed by Nanci Donacki)125I Labeling of Protein using ICl (ScienceXchange)Protein (
肝脏的代谢：蛋白质代谢
蛋白质代谢：（1）合成自身结构蛋白并合成多种血浆蛋白质，其中合成量最多的是白蛋白。（2）肝脏合成的许多凝血因子和纤维蛋白原等，在血液凝固功能上起重要作用。（3）有丰富的氨基酸代谢酶，转化和分解氨基酸。（4）经鸟氨酸循环合成尿素（尿素是血中非蛋白含氮物质主要成分）。
氨基酸代谢标记实验_辅助方案－TCA沉淀测定标记掺入量
实验材料被标记的细胞悬液（见基本方案或备择方案 1～4）试剂、试剂盒0.1％（m V）BSA／0.02%（m V）NaN310%TCA 溶液冷冻乙醇仪器、耗材连接真空管道的滤过装置2.5 cm 玻璃微纤维滤膜（Whatman GF／C）实验步骤1. 加 10～20 μl 被标记的细胞悬液到 0.1
重组蛋白质的定义
根据其定义，重组蛋白质的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。
重组蛋白质的大规模生产实验——基本方案
蛋白质（protein）是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。实验材料重组蛋白质仪器、耗材培养瓶过滤器实验步骤1. 在悬浮培养液中培养Sf9细胞，并使之适应无血清培养液。 2. 准备旋转培养瓶，用于按比例扩增Sf9细胞，将合适大小的两
检验肝脏的代谢考点：蛋白质代谢
（1）合成自身结构蛋白并合成多种血浆蛋白质，其中合成量最多的是白蛋白。（2）肝脏合成的许多凝血因子和纤维蛋白原等，在血液凝固功能上起重要作用。（3）有丰富的氨基酸代谢酶，转化和分解氨基酸。（4）经鸟氨酸循环合成尿素（尿素是血中非蛋白含氮物质主要成分）。
非标记蛋白质的磷酸化作用分析实验
免疫印迹分析 化学发光法 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒
蛋白质的胶体金标记
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下。（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。（2）边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中，逐渐加入，lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中，大约需 5~10min。（3）继