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蛋白质磷酸化的测定实验—代谢标记

实验材料细胞仪器、耗材培养瓶实验步骤1. 用 60 mm 或 100 mm 培养瓶,在完全培养基中培养细胞至所希望的密度。2. 用预热的低磷酸培养基(无放射性磷酸盐)冲洗两次,然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培养基(50~100 μmol/L 无机磷酸)。3. 培养结束后,回收 32P 标记培养基,用 10 ml Aquasol (NewEnglandNuclear) 或 Ecolume(ICNBiomedicak) 稀释,取一等份用液闪计数器测定 32P 活性。测定培养基中磷酸浓度 (Sanui 1974)(可以用无 32P 的低磷酸培养基)。从这两个数据计算标记培养基 中 32P 比活 。4. 无二价离子的 PBS 清洗 32P 标记的细胞两次。每个 100 mm 培养皿加 1 ml 预热的裂解缓冲液在沸水浴中裂解细胞。用一次性细胞刮刷将细胞裂解物刮到一边......阅读全文

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验             实验步骤

质谱沙龙第十九期活动报道

  2009年5月23日,质谱沙龙第十九期活动在清华大学生物医学测试中心举行。此次到会者除了来自二炮总医院、西苑医院、清华大学医学院、发酵研究院、中科院微生物研究所、空军总医院、天津博纳艾杰尔科技、AB公司等老朋友外,还有来自戴安公司、东西电子的新朋友。报告后的讨论一直洋溢着热烈的气氛。   

国内外蛋白质组学大腕云集 聚焦生物质谱前沿技术

  2014年7月3日,全国生物质谱学术报告会--生物质谱前沿技术邀请报告会在上海复旦大学隆重召开。此次活动旨在积极促进我国生物质谱技术的发展和应用,加强国内外相关研究领域的专家学者之间的交流与合作,特邀瑞士苏黎世联邦技术学院分子系统生物学

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验(五)

六、CID、ECD和 ETD的对比基于质谱的蛋白质组学分析依赖于气相中肽段在低碰撞能量下断裂, 在质量谱图中形成峰。进而通过峰图确定肽段序列,再推断出相关蛋白质。完成肽段断裂最主要的方法就是碰撞诱导解离(collision induced dissociation,C I D ) ( S w

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验6

七、P T M 的定量分析当研究 P T M 的生物学意义时,如能了解一个特定修饰或一组P T M 的相对或绝对丰度通常会有帮助。这样可以将不同的生物样品间的目的修饰进行直接比较。例如, 将正常与疾病状态下细胞或组织内某一 P T M 的丰度进行比较。定量分析这些变化能够帮助深人了解 P T M 在

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

5分钟了解:啥仪器让蛋白质组学界诞生如此多牛人大咖

  蛋白质组学(Proteomics)一词,源于蛋白质(protein)与基因组学(genomics)两个词的组合,意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。” 1994年澳大利亚的Marc Wikins首次提出蛋白质组(Proteome)的概念,1997年

质谱检测法如何进行蛋白质分析?

  MS/MS操作模式  串联质谱仪通常使用的都是离子模式来鉴定蛋白质的氨基酸序列。目前所有的MS/MS质谱仪都具有该功能。不过其它特殊的质谱仪也具有MS/MS功能。如果要发现蛋白质中的某个功能基团则需要用到母离子扫描功能或者中性丢失扫描功能,而这就必须用到三重四级杆质谱仪,如Q-Q-Q质谱仪,或四

质谱沙龙第二十一期活动报道

【导语】在药物分析的技术讨论之外,拓展了质谱沙龙的涉及范围:增加了质谱相关新技术MassWorks的讨论;GC/MS在公安法医中的应用;以及蛋白质组学同位素标记、磷酸化翻译后修饰鉴定的最新研究进展。   2009年7月25日下午,质谱沙龙第二十一期活动在第二炮兵总医院胃食管返流中心示教室举行。除了

蛋白质组学概念的起源和发展

  蛋白质组学的诞生和发展,离不开多学科和技术的逐渐交叉融合。这些学科技术包括(但不限于)基因组学、生物化学、分析化学、自动化、基于电磁场的精密质谱仪、信号处理、数理统计和计算机科学。近年来,分子医学、大数据技术和人工智能的发展,进一步加速推动了蛋白质组学的成长,使之在精准医疗领域展示出越来越大的应

大规模蛋白质相互作用研究方法进展(三)

           图1 TAP亲和层析纯化原理[14]  注:A:标签中的ProteinA 与固化的IgG 结合缓冲液淋洗去除不能结合的杂蛋白,TEV 酶切分离ProteinA &nbs

1100学者齐聚杭州 第二届质谱大会开幕

  分析测试百科网讯 2015年10月17日,第二届全国质谱分析学术报告会(质谱大会)在浙江大学紫荆港校区体育馆盛大开幕,本次大会由中国化学会、国家自然科学基金委员会主办,中国化学会质谱分析专业委员会、浙江大学化学系承办。浙江大学副校长罗建红教授、南京大学陈洪渊院士、中

蛋白质组学实用分析技术一览

分析其实也属于技术的一部分,且在蛋白质组学研究中显得尤为重要,因为蛋白质组学研究提供的数据是生物学上最庞大的,而且蛋白质组比基因组具有更大的复杂性,因此蛋白质组信息学更有挑战性。今天小编先抛砖引玉地介绍几个常用的分析方法和软件。蛋白质定性分析蛋白质定性分析通常是指利用质谱法进行蛋白质鉴定和序列分析。

质谱检测法与蛋白质分析(二)

传统的和最新的蛋白质组学研究策略虽然到目前为止,还没有一种蛋白质组学研究策略能够对某个蛋白质组进行常规的、完整的分析,但是现在的技术已经非常强大,我们相信,很快就能进行全蛋白质组学研究了。而且,对某个亚蛋白质组(比如某个细胞器或亚细胞结构的蛋白质组)进行研究早就已经不是什么难题了,这已经成为了一种常

质谱仪

最近又有几项有关质谱仪的最新进展问世,这些新成果的出现又给我们的生物大分子研究工作补充了“弹药”。在蛋白质测序方面,基于碰撞诱导裂解技术(CID),又新出现了可变裂解技术(Alternate fragmentation technique),该新技术是基于处在碰撞池中的离子具有的电子传递特性开发出来

蛋白芯片的基本原理及技术研究现状

作者:陈玮莹 来源:《国外医学临床生物化学及检验学分册》汕头大学医学院 陈玮莹 综述 温博贵 随着分子生物学芯片技术研究工作的进一步深入开展,NDA芯片技术已经被逐渐应用于对生物样品中的各种已知或未知的核酸序列表达的检测和比较研究。但是,作为生物体细胞中实施化学反应功能成分的蛋白质,其相当部分与活性

蛋白芯片的基本原理及技术研究现状

随着分子生物学芯片技术研究工作的进一步深入开展,DNA芯片技术已经被逐渐应用于对生物样品中的各种已知或未知的核酸序列表达的检测和比较研究。但是,作为生物体细胞中实施化学反应功能成分的蛋白质,其相当部分与活性基因所表达的mRNA之间未能显示出直接的关系,因此使作为高通量基因表达分析平台的cDNA芯片技

首届全国质谱分析学术研讨会大会报告(一)

  2014年4月26日,首届全国质谱分析学术研讨会在北京西郊宾馆盛大开幕。本届全国质谱分析学术研讨会由中国化学会、国家自然科学基金委员会联合主办,中国化学会质谱分析专业委员会和清华大学化学系/分析中心联合承办。来自79个单位的426名科研工作者参加了此次盛会,与会者汇集了院士、杰青、千人

第二届质谱论坛:质谱在生物医药中的应用

  质谱论坛学术报告 赛默飞世尔科技色谱质谱部应用工程师 刘婷   来自赛默飞世尔科技的应用工程师刘婷 为大家作了题为《高分辨质谱提高代谢物鉴定的数量和可靠性》的报告。   代谢

【盘点】衰老与疾病的关联性研究进展

  人为什么会变老?对于人类来说,如何才能长生不老真的是一个令人着迷的问题。但是至今为止都没有一个让人满意的答案。衰老一直是生命过程中的核心环节,也是影响整个人类社会健康发展的重要问题。目前世界各国均面临着严重的人口老龄化,数据显示到2050年约三分之一的中国人口年龄将超过60岁。因此,深入了解衰老

首届质谱论坛学术报道

  中国医学科学院基础医学研究所的李智立教授做了题为“傅立叶变换离子回旋共振质谱仪(FTICR MS)在生物医学中的应用”的报告。李教授首先指出,当前在用质谱来研究蛋白质组学、鉴定蛋白质方面,我们很多时候还处于“瞎子摸象”的阶段,因为很多时候不知道到底测定的是细胞、组织中的哪个蛋白,即唯一性不够。这

2013北京色谱年会大会报告(一)

  2013年12月12日,由北京色谱学会主办,北京理化分析测试技术学会承办的以“色谱在环境和药物分析中的应用”为主题的2013年北京色谱年会在京东宾馆隆重召开,来自北京周边地区的政府机关、高等院校、科研院所的400余人参加了本届色谱年会。

张玉奎院士等专家在2012年北京色谱年会上作大会报告

  2012年12月07日,北京,2012年北京色谱年会热烈召开。促进了北京地区色谱以及色谱相关领域的技术应用与交流。围绕“色谱新技术及其应用”的主题,展开多场报告,内容包括蛋白质组学、色谱技术、色谱与质谱、色谱与核磁共振、金属组学、代谢组学、生物气味研究、环境分析等。中国科学院大连化学物理研究所张

2020CMSS完美收官!各领域百花齐放

  分析测试百科网讯 2020年9月18日,2020年中国质谱学会质谱网络研讨会(2020CMSS)进行到最后一天。今天由北京大学医学部精准医疗多组学研究中心的黄超兰教授、首都医科附属大学北京妇产医院检验科曹正副教授、北京师范大学生命科学学院高友鹤教授、中国科学院大连化学物理研究所刘心昱副研究员、中

质谱沙龙第十期活动报道

2008年7月27日下午,质谱沙龙第十期活动在西苑医院实验楼举行。会议有来自二炮总医院、西苑医院、医科院药物所、朝阳医院、北大医学院、北医三院、空军总医院、AB公司等老朋友,还有来自农业部畜禽产品质检中心、北京生命科学研究所等新朋友。沙龙活动的成员,以前较多的是来自医院的朋友,近来吸引了一批来自农/

第十四届全国离子色谱学术大会报告(一)

  2012年9月17日~18日,第十四届全国离子色谱学术报告会在历史悠久的古城西安隆重召开,大会期间共有来自全国40多位离子色谱专家做大会报告,内容涉及离子色谱理论研究、检测方法建立、样品处理方法研究、联用技术、仪器功能开发等。分析测试百科网作为本届大会的应邀媒体,将对大会报告

第六届世界华人质谱会在美举办 共享质谱学术盛宴

  分析测试百科网讯 2016年6月4日,第六届世界华人质谱会在美国德克萨斯州圣安东尼奥举行,这是自第一届世界华人质谱会以来第一次在海外举办的华人质谱会,并恰逢距2006年在新疆举办的第一届世界华人质谱会10周年。会议由美国华人质谱协会(C

比较分子生理基因组学 —cDNA阵列的异种杂交实验(二)

二、方法在开始任何微阵列实验之前,必须要选定合适的对照和时间点,这样获得的数据才有生物学意义。关于如何选择合适的对照,参见注释 1 和 2。1 总 R N A 的提取2 R N A 变性凝胶电泳(1)制备一块 1 % 的琼脂糖甲醛变性胶,浸没在 IXM OPS 缓冲液中,胶上的孔应被溶液完全没过。将

比较分子生理基因组学 —cDNA阵列的异种杂交实验

实验步骤 一、材料 这里用到的所有化学试剂都为分子生物学等级,或者用它们最高纯度的等效物。所有的塑料和玻璃制品,包括瓶子和移液器吸头都要高压灭菌,在核酸实验操作过程中必须始终戴手套。 cDNA A T L A S阵列从Clo

比较分子生理基因组学 —cDNA阵列的异种杂交实验

近几年来, DNA 微阵列已经被公认是分子生物学研究的一种标准方法。特别是在生物医学研究方面,常用物种的微阵列一面世就得到广泛应用。但是对于非模式生物来说 ,微阵列的应用尚未得到充分开展,而这些物种往往表现出一些很有趣的生理表型。对大多数比较生物学的研究者来说,制备一个新物种的 D N A 阵列或微