组织的分离实验_离心分离法
实验方法原理如培养物为血液、羊水、腹水和胸水等细胞悬液时,可采用离心法分离。一般用低速500~1000 转/分速度,离心5~10 分钟即可。如悬液量大,离心时间可适当延长,但如离心速度过大和时间太长,易压挤细胞使之受损或死亡。微量全血法淋巴细胞培养时,可不必进行淋巴细胞分离,可采用全血培养法。在需用大量白细胞进行培养情况下,才应采用特殊分离技术如使用分层液等方法。实验材料抗凝血试剂、试剂盒BSS仪器、耗材离心机实验步骤国产淋巴细胞分层液(Lyphocyte Separation Medium)效果很好。分层液是根据细胞比重不同,使各类细胞相互分开的。红细胞比重1.092,淋巴细胞和大单核等白细胞比重为1.070;分层液适用于分离血中淋巴细胞。1. 取抗凝血若干毫升;2. 按1:1 加入无菌分层液(滤过除菌)后,800—1000 转离心;3. 无菌分离出白细胞(白细胞位于红细胞上层,呈微白色);......阅读全文
组织的分离实验_离心分离法
实验方法原理如培养物为血液、羊水、腹水和胸水等细胞悬液时,可采用离心法分离。一般用低速500~1000 转/分速度,离心5~10 分钟即可。如悬液量大,离心时间可适当延长,但如离心速度过大和时间太长,易压挤细胞使之受损或死亡。微量全血法淋巴细胞培养时,可不必进行淋巴细胞分离,可采用全血培养法。在需用
组织的分离实验
试剂、试剂盒 Hanks仪器、耗材 镊子网筛碟皿吸管注射器培养瓶实验步骤 一、切割分离法在进行组织块培养时,可采用剪切法,一般多剪切成1 mm3大小的块。具体操作如下:1. 无菌切取1 cm3组织一块,置入青霉素瓶或小烧杯中,左手斜持容器,右手持眼科尖剪或弯剪(剪柄较长为好)伸入容器中,反复剪切组
组织的分离实验
机械分散法 胰蛋白酶消化消化分离法 胶原酶消化分离法 离心分离法 EDTA 消化分离法 试剂、试剂盒
超速离心法纯化病毒实验——界面离心分离法
实验方法原理离心管内病毒悬液中的病毒和细胞碎片随其自身密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯层中实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒蔗糖溶液仪器、耗材离心机实验步骤(1) 取浓缩后的病毒悬液 5 ml, 加入 1/5 或 1. 66/5 体积的 600 g/L 的蔗糖溶液,使其含蔗糖10%~15%, 摇匀。
血清脂蛋白的快速离心分离法
利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液,在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例,实际上还可以应用于各种型号各种容量的固定角式转头。(一) 梯度液A液:11.40gNacl,0.1g EDTA-Na2,置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1ml 1N Na
血清脂蛋白的快速离心分离法
血清脂蛋白的快速离心分离法 YU.2003.7利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液,在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例,实际上还可以应用于各种
从豌豆组织分离叶绿体实验_叶绿体分离
实验材料叶子组织试剂、试剂盒PBF-Percoll 溶液山梨醇BSAHEPES-KOHEDTA仪器、耗材聚碳酸酯离心管实验步骤1. 制备 Percoll 梯度(1) 两个 50 ml 的聚碳酸酯离心管中分别加入 25 ml 50% 的 PBF-Percoll 溶液。50% PBF-Percoll0.
组织的分离实验_机械分散法
试剂、试剂盒Hanks仪器、耗材镊子网筛碟皿吸管注射器培养瓶实验步骤一、切割分离法在进行组织块培养时,可采用剪切法,一般多剪切成1 mm3大小的块。具体操作如下:1. 无菌切取1 cm3组织一块,置入青霉素瓶或小烧杯中,左手斜持容器,右手持眼科尖剪或弯剪(剪柄较长为好)伸入容器中,反复剪切组织至1
组织的分离实验_EDTA-消化分离法
实验方法原理EDTA是一种非酶性消化物,常用不含Ca2+和Mg2+的BSS 配成0.02%的工作液。关于EDTA的作用机制一般认为是:一些组织,尤其是上皮组织,在生存中需要Ca2+和Mg2+才能维持组织的完整性。EDTA能从这些组织生存环境中吸收这些离子,形成螯合物,能促进细胞相互分离。EDTA 作
从豌豆组织分离叶绿体实验
叶绿体分离 实验材料 叶子组织 试剂、试剂盒
从豌豆组织分离叶绿体实验
叶绿体分离实验材料叶子组织 试剂、试剂盒PBF-Percoll 溶液
超离心分离法的基本信息介绍
超离心分离法通常指用超速离心机分离高分子的方法。含有高分子的溶液(如核酸和蛋白质的溶液)受到强大的离心力作用时,如果这些高分子物质的密度大于溶液的密度就会沉降下来达到分离的目的。其沉降的速度既与其分子的大小和密度有关,也与溶液的分子密度和粘度及其分子的形状有关。超速离心法也可用来测定高分子的分子
线粒体分离实验—从组织中分离线粒体
实验材料肝脏试剂、试剂盒MS仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 取出肝脏,注意不要弄破胆囊。放进一置于冰上的烧杯中,剪去任何结缔组织。称其质量后放回烧杯中。用锋利的剪刀、手术刀或剃须刀片将之切成 1~2 mmol/L 的薄片,用匀浆缓冲液(1x MS) 冲洗两次以去除大部分的血。转移至匀浆器中。加入足够的
最常用的超离心分离法的方法介绍
最常用的有: ①沉降速度法:用超离心法,增加蛋白质溶液的离心强度,当溶液所含蛋白质颗粒大小和形状都相同时,这些颗粒以相同的速度移向管底,并形成清楚的界面;当溶液中有多种大小不同的蛋白质颗粒时,就会有几个界面,用特殊的光学系统可以观察到沉降界面,从而判断出蛋白质的沉降速率。当沉降界面以恒速移动时
组织的分离实验_胶原酶消化分离法
实验方法原理胶原酶是一种由细菌中提取出的酶,对胶原有很强的消化作用,适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。上皮细胞本身对胶原酶有一定耐性,但胶原酶对细胞间质有好的消化作用,可使上皮细胞与胶原成分脱离而不受伤害,效果甚好。此酶在钙和镁离子存在情况下仍有活性,故可用BSS和含有血清的培养液配制。实验
中间丝的分离方法实验——从组织中分离中间丝
实验材料牛舌试剂、试剂盒解聚缓冲液组装缓冲液匀浆缓冲液抽提缓冲液柱缓冲液PEM 缓冲液仪器、耗材离心机实验步骤一、从牛舌上皮分离角蛋白中间丝1. 从当地屠宰场拿到新鲜牛舌。一条舌头通常可以产出几十毫克纯化了的角蛋白中间丝。2. 用刀片切刮,把舌中的肌肉和黏膜分开。舌黏膜片(大约 1cmx1 cm )
分离核仁实验—从人肝脏或胎盘组织中分离核仁
实验材料组织试剂、试剂盒NKM仪器、耗材粗孔滤纸Teflon-玻璃匀浆器实验步骤1. 准备溶液:NKM:0.13 mol/L NaCl,5 mmol/L KCl,8 mmol/L 乙酸镁2.2 mol/L 蔗糖,10 mmol/L MgCl20.88 mol/L 蔗糖0.34 mol/L 蔗糖,含
线粒体分离实验—从组织培养细胞中分离线粒体
实验材料细胞试剂、试剂盒RSBMS 缓冲液仪器、耗材Dounce 匀浆器实验步骤1. 用 11 ml 冰上预冷过的 RSB 重新悬浮细胞,转移到一个 15 ml 的 Dounce 匀浆器中RSB(使组织培养细胞膨胀的低渗缓冲液)10 mmol/L NaCl2.5 mol/L MgCl210 mmol
牙髓组织的分离
试剂和材料:1. 无镁和钙的PBS平衡盐溶液(PBSA);2. MSC培养基:含2mmol/L 谷氨酰胺的α-MEM,添加15%胎牛血清,0.1mmol/L左旋抗坏血酸磷酸盐,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素;3. 培养皿;4. 精细镊(小号和大号);5. 牙科碳化钻头;6. 牙挖器;7
组织的分离实验_胰蛋白酶消化消化分离法
实验方法原理胰蛋白酶适于消化细胞间质较小的软组织,如胚胎组织、羊膜、上皮组织、肝、肾等软组织,对传代细胞也非常好。用于消化纤维性组织或较硬的癌组织则较差。Ca2+和Mg2+对胰蛋白酶的活性有一定抑制作用,故需用不含这些离子的BSS 配制。血清有抑制胰蛋白酶活性的作用,因此在做细胞传代时,用胰蛋白酶消
离心机常见的离心机离心分离法都有那几种?
常见的离心机离心分离法都有那几种? ①差速离心法 差速离心法主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离样品中不同密度的结构,如线粒体、叶绿体、蛋白质等! 第一步:设置起始的离心速度较低,先让较大的颗粒沉降到管底,小的颗粒仍然悬浮在上清液中。 第二步:收集沉淀,改用较高的离心速度离心悬浮液,将较小的
从组织分离粗制质膜组分的另一实验方法
从组织分离粗制质膜组分的另一实验方法 试剂、试剂盒 匀浆缓冲液
从组织分离粗制质膜组分的另一实验方法
Neville(1968) 所述的方法对分离鼠肝质膜的效果较好,但对分离其他组织的质膜不一定适用。这里,介绍一种从其他组织制备粗制质膜组分的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。试剂、试剂盒匀浆缓冲液仪器、耗材Dounce 氏玻璃匀浆器(15-ml)带 A 杵实验步骤设备Doun
新鲜组织分离原代细胞
新鲜手术取得或冻存的组织于37 ℃ 快速复温,原代细胞培养工作液清洗3次,尽量修剪去除纤维组织,将组织块剪成约1 mm3大小的小块,弯头吸管吸取组织块均匀种植于75 cm2 培养瓶瓶底,瓶内加入少量原代细胞培养工作液,小心翻转培养瓶使组织块黏附于瓶底,置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养6-8
牙髓干细胞的分离培养——牙隨组织的分离
实验材料牙试剂、试剂盒灭菌无Ca2+和Mg2+的PBS(PBSA)MSC培养基消毒液(如聚维酮碘)仪器、耗材非灭菌使用高速牙科钻时的装备(如空气压缩机)培养皿精细镊(小号和大号)牙科碳化钻头牙挖器高速牙科钻实验步骤(a)用PBSA洗三遍,充分清洁牙齿表面。(b)用消毒液消毒,然后再用PBSA充分清洗
沥青混合料离心抽提仪离心机,离心分离法使用方法
适用范围主要适用于离心分离法测定粘稠石油沥青拌制的沥青混合料中沥青含量(或油石比),以评定路面施工时商品沥青的质量,也适用于旧路调查时检测沥青及沥青混合料的沥青用量。仪器符合交通行业(公路沥青混合料及沥青混合料试验规程)(JTJ052-93)中沥青混合料中沥青含量试验(离心分离法)(T0722-93
纯化DNA实验_从哺乳动物细胞或组织分离DNA
基因纯化,可以用于(1)对大量提取的质粒DNA进行纯化;(2)常用的方法有柱层析法和氯化铯梯度离心法。实验材料细胞试剂、试剂盒TBS抽提缓冲液仪器、耗材离心管实验步骤1. 根据样品类型,从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤
分离核仁实验——分离核仁
实验材料肝脏试剂、试剂盒NKM仪器、耗材粗孔滤纸Teflon-玻璃匀浆器实验步骤1. 制备溶液:NKM:0.13 mol/L NaCl,5 mmol/L KCl,8 mmol/L MgCl20.34 mol/L 蔗糖,3 mmol/L MgCl22.3 mol/L 蔗糖,10 mmol/L MgCl
液泡的分离实验
撕取紫色洋葱或萝卜叶片表皮,置于载玻片上,稍滴加清水后盖上盖玻片,于显微镜下观察制片中的细胞,若细胞其中有一个完整无缺的、含花青素的玫瑰紫色液泡,则用滤纸条吸引液体的方法连续滴加0.5M蔗糖溶液仪器、耗材紫洋葱紫萝卜叶蔗糖溶液小镊子实验步骤一、材料与设备紫洋葱、紫萝卜叶、0.5 M 蔗糖溶液、小镊子
液泡的分离实验
仪器、耗材:紫洋葱 紫萝卜叶 蔗糖溶液