将DNA导入酵母细胞实验
实验方法原理 实验材料 待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DNA50% (m V) PEG 4000 或 PEG 3350 (不能用 PEG 8000)过滤除菌CM缺失成分培养基平板用Difco琼脂制备仪器、耗材 恒温摇床、水浴锅实验步骤 1)在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 mL YPD培养基中，于 30℃恒温摇床，培养过夜达到饱和。2)转化的前一天晚上，往1 L无菌烧瓶中加入300 mL YPAD培养基，然后接种适量的 饱和培养液，再于30℃培养过夜，到细胞密度为1×l07细胞/mL OD600=0.3〜0.5，依据菌株而定）。为了获得2〜3倍高的转化效率，此时......阅读全文
将DNA导入酵母细胞实验
乙酸锂转化 电穿孔转化 单链高分子质量载体DNA的制备 实验方法原理 实验材料
将DNA导入酵母细胞实验
实验方法原理 实验材料 待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DN
将DNA导入酵母细胞实验_电穿孔转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 1 mol L 二硫苏糖醇（DTT过滤除菌并储存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇选择平板仪器、耗材电穿孔仪：如Bio-Rad公司的带脉冲控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm间隙的一次性电穿孔槽（
将DNA导入酵母细胞实验_乙酸锂转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DNA50% (m V) PE
将DNA导入酵母细胞实验_单链高分子质量载体DNA的制备
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 DNA (从鲑鱼精巢制备的DNA III型钠盐 Sigma #D1626)l×TE缓冲液 pH 8.0 缓冲液平衡酚1: 1 (W)酚 氯仿氯仿3 mol L 乙酸钠 pH 5.2100%乙醇 冰冷仪器、耗材超声波发生器实验步骤1) 将DNA溶于pH 8.0的1
质粒DNA导入细菌细胞实验
实验材料 菌落质粒DNA试剂、试剂盒 CaCl2仪器、耗材 培养基平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中，于37°C中速摇床培养过夜（250 r/min)。2. 往一个2 L的烧瓶中加人400 ml LB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37°C摇床（250 r/min）
质粒DNA导入细菌细胞实验
CaCl2转化法 一步法制备和转化感受态细菌实验 电转化法 实验材料 菌落 质粒DNA
重组DNA分子导入原核细胞及PCR检测
一、目的与意义 学习使用大肠杆菌感受态细胞导入外源DNA，使学生掌握DNA分子进入细胞的原理和实验操作技术; 掌握PCR法快速鉴定重组载体的基本操作。 二、实验原理 转化是指将质粒DNA或构建的重组子导入细胞的过程。细菌细胞在低温，低渗（CaCl2溶液）中膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成了抗DN
质粒DNA导入细菌细胞实验——电转化法
实验方法原理高压电转化简单，快捷可靠，而且是目前效率最高的质粒DNA转化大肠杆菌方法。不过该方法需要电转化装置。实验材料菌落试剂、试剂盒LB甘油SOC仪器、耗材平板离心瓶聚丙烯管电阻器电转化池实验步骤1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养液，37°C温和振摇培养5 h或过夜。2. 将2.5 m
磷酸钙沉淀法将DNA导入细胞
实验概要本实验利用磷酸钙沉淀法将DNA导入细胞。有助于了解细胞转染技术原理和基本方法及磷酸钙沉淀法的基本技术要点。实验原理磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法，磷酸钙被认为有利于促进外源DNA 与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作
酵母DNA微量制备
实验概要本实验介绍了分别从40ml和5ml酵母培养液中制备酵母DNA的操作流程。实验步骤1. 酵母DNA微量制备(40ml) 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。 2) 将上述培养物移入螺盖离心管，用医用离心机或Sorvall SS-
质粒DNA导入细菌细胞实验——CaCl2转化法
实验材料菌落质粒DNA试剂、试剂盒CaCl2仪器、耗材培养基平板实验步骤1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中，于37°C中速摇床培养过夜（250 r/min)。2. 往一个2 L的烧瓶中加人400 ml LB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37°C摇床（250 r/min）培养至
技术和方案19－酵母－DNA－流式细胞记数
试剂、试剂盒TE 缓冲液胃蛋白酶溶液SYTOX Green染色缓冲液实验步骤1.生长和收集细胞。细胞生长至 5X106 个/ml，离心收集 10 ml 样品，并用 5 mlTE 缓冲液洗一次。再次离心收集并悬浮在 1.5 ml 水中。2.乙醇固定细胞。每份 1.5 ml 样品中加人 3.5 ml 无
将大片段插入－DNA－导入哺乳动物细胞和胚胎实验
基本方案1 通过质体融合将完整的 YAC 导入哺乳动物细胞 基本方案2 将细菌人工染色体（BAC或PAC)引入到哺乳动物细胞和小鼠胚胎中
快速制备酵母DNA法
实验概要本实验制备了酵母转化质粒，快速从转化酵母菌中分离了用于Southern分析的基因组DNA。主要试剂2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
酵母DNA的快速分离
实验方法原理 根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化 E. coli。实验材料 酵母细胞试剂、试剂盒 乙醇酚氯仿醋酸钠STES 缓冲液TE仪器、耗材
酵母DNA的小量制备
实验方法原理 通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。
酵母DNA的小量制备
实验方法原理 通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。实验材料 酶解酶 100T酵母细胞试剂、试剂盒 异丙醇醋酸钾SDS醋酸钠山梨糖醇缓冲液T
酵母DNA的快速分离
实验方法原理 根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化 E. coli。
酵母DNA的快速分离
根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化 E. coli。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理根据该方案制备的酵母 DNA 可
酵母DNA的小量制备
实验方法原理通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。实验材料酶解酶 100T酵母细胞试剂、试剂盒异丙醇醋酸钾SDS醋酸钠山梨糖醇缓冲液TE酵母
酵母菌DNA制备
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材 玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤 1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。2. 将1.5 ml 的过夜培养
PNAS：将干细胞导入“正途”
多能干细胞是大自然的双刃剑。因为它们可以形成令人眼花缭乱的细胞类型和组织种类，它们是一种潜在宝贵的治疗资源。然而，如果干细胞在机体内开始失去控制进行分化，相同的发育灵活性也可以导致称作畸胎瘤(teratomas)的危险肿瘤。 为了防止这种结果，研究人员必须在将细胞移植到实验动物或
将大片段插入－DNA－导入哺乳动物细胞和胚胎实验1
基本方案1 通过质体融合将完整的 YAC 导入哺乳动物细胞实验材料靶细胞：培养的贴壁生长的哺乳动物细胞带有以neo（G418-resistance)为筛选标记的 YAC 的酵母菌株试剂、试剂盒山梨糖醇SCE 溶液ST 溶液EDTA小鼠 Cot-1 DNA仪器、耗材SD dropout 培养基和培养板
将大片段插入－DNA－导入哺乳动物细胞和胚胎实验2
基本方案2 将细菌人工染色体（BAC或PAC)引入到哺乳动物细胞和小鼠胚胎中实验材料纯化的 BAC DNA试剂、试剂盒RNase A原核的注射缓冲液透析缓冲液I乙醇小鼠胚胎哺乳动物细胞灭菌素仪器、耗材含有合适的抗生素的LB培养基Qiagen Midi-prep 试剂盒培养箱高速离心机高速离心管玻璃离
真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒使用说明
真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂是一种旨在使用生物、化学和物理方法相结合，有效去除真菌/酵母菌细胞壁，进一步快速且充分裂解真菌/酵母菌细胞，从而分离出完整而纯化的线粒体细胞器，然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒
真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒使用说明
主要用途真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂是一种旨在使用生物、化学和物理方法相结合，有效去除真菌/酵母菌细胞壁，进一步快速且充分裂解真菌/酵母菌细胞，从而分离出完整而纯化的线粒体细胞器，然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各
酵母菌DNA制备实验1
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。 2. 将1.5 ml 的过夜培养物转移
酵母菌DNA制备实验2
实验材料酵母试剂、试剂盒TERNA酶乙酸铵无水乙醇仪器、耗材离心机培养箱玻璃培养管实验步骤1. 在18 mm×150 mm 无菌玻璃培养管或17 mm×100 mm 无菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培养基过夜培养酵母菌至静止期。2. 培养物室温下在台式离心机上1 200 g 离心5 min
克隆化酵母DNA的操作实验
实验材料 酵母实验步骤 将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。2. 用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。3. 用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在所期