氨基酸代谢标记实验_备择方案3长期细胞标记
实验方法原理长期标记意味着对细胞进行 6～32 h 持续的代谢标记。该方法特别适用于研究合成速度相对较慢的蛋白质或研究成熟的标记蛋白而不是生物合成的前体。稳定状态的标记是长期标记的一种形式，在此过程细胞和放射性标记的氨基酸一起孵育直至放射性标记蛋白的合成和降解速率相当。如果蛋白质复合体中的亚基的初级结构已知，该方法可以对这些亚单位进行化学计量。所加入的未标记的甲硫氨酸量依赖于某些因素，如标记的时间和细胞浓度。通常使用的培养基中含有 5％～20％ 正常的非标记甲硫氨酸含量。实验材料细胞悬液／贴壁细胞[35S]标记L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒PBS(冷冻)37℃ 长期标记培养基仪器、耗材75 cm2 组织培养瓶实验步骤1. 在预热的 37℃ 长期标记培养基中制备 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液（见基本方案步骤 1）。2.1 对于悬浮细胞：用预热......阅读全文
氨基酸代谢标记实验_备择方案－3－长期细胞标记
实验方法原理长期标记意味着对细胞进行 6～32 h 持续的代谢标记。该方法特别适用于研究合成速度相对较慢的蛋白质或研究成熟的标记蛋白而不是生物合成的前体。稳定状态的标记是长期标记的一种形式，在此过程细胞和放射性标记的氨基酸一起孵育直至放射性标记蛋白的合成和降解速率相当。如果蛋白质复合体中的亚基的初级
氨基酸代谢标记实验_备择方案－2示踪标记细胞
实验材料细胞悬液／贴壁细胞[35S]标记L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒PBS(冷冻)37℃ 示踪培养基仪器、耗材配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤1. 每个时间点和每个样品准备 0.5 × 107 ~2 × 107 细胞， 每 0 .5 ×
氨基酸代谢标记实验_备择方案－1－对贴壁细胞
实验材料贴壁细胞[35S]标记L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒PBS(冷冻)37℃ 脉冲标记培养基仪器、耗材100 mm 组织培养皿配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤1. 在 100 mm 组织培养皿中培养细胞到 80%~90% 融合（0.5
氨基酸代谢标记实验
暂未评分点评实验，有机会获丁当奖励 +收藏氨基酸代谢标记实验标签：氨基酸 代谢 标记精编分子生物学实验指南第五版 第十章代谢标记技术用于研究蛋白质的生物合成、加工、细胞内运输、分泌、降解和物理化学特性。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》
氨基酸代谢标记实验
实验方法原理 在含有放射性标记氨基酸的培养基中，短期培养细胞（800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒 PBS(冷冻)37℃ 脉冲标记培养基仪器、耗材 配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤 1. 室温融化 [35S] 标记甲硫氨酸，并用预热的（37℃）脉冲标记培养基制
氨基酸代谢标记实验_辅助方案－TCA沉淀测定标记掺入量
实验材料被标记的细胞悬液（见基本方案或备择方案 1～4）试剂、试剂盒0.1％（m V）BSA／0.02%（m V）NaN310%TCA 溶液冷冻乙醇仪器、耗材连接真空管道的滤过装置2.5 cm 玻璃微纤维滤膜（Whatman GF／C）实验步骤1. 加 10～20 μl 被标记的细胞悬液到 0.1
氨基酸代谢标记实验_基本方案－对悬浮培养细胞
实验方法原理在含有放射性标记氨基酸的培养基中，短期培养细胞（800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒PBS(冷冻)37℃ 脉冲标记培养基仪器、耗材配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤1. 室温融化 [35S] 标记甲硫氨酸，并用预热的（37℃）脉冲标记培养基制备 0.
用于表达分析的－mRNA－的制备实验——备择方案
cDNA 和体外转录产物的固相可逆固定（SPRI）纯化实验方法原理用基于磁珠方法纯化 cDNA 和体外转录产物避免了纯化过程有机溶剂的使用和离心步骤。这个方案与基本方案中的纯化方法相当（步骤 10～14 或者步骤 17～22）。实验材料待纯化样品：cDNA或体外转录的 RNA试剂、试剂盒羧基端包埋的
标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞）基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞）SDS煮沸法裂解细胞实验方法原理实验材料待标记的培养细胞 试剂、试剂盒37℃标记培养液
用[32P]磷酸标记细胞实验_标记单层培养细胞
实验材料HeLa 细胞试剂、试剂盒FCS磷酸盐仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸盐至 2
用[32P]磷酸标记细胞实验_标记悬浮培养的HeLa细胞
实验材料细胞试剂、试剂盒磷酸仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 培养细胞至对数期，600 g 离心 5 分钟。2. 弃上清，用无磷酸培养基悬浮细胞。3. 培养细胞 3~4 小时以耗尽它们的磷酸储备。4. 再次离心，弃上清，用无磷酸培养基悬浮，加 32P 磷酸盐至 20 μCi/ml 培养液，培养 1
方案21.11－3H胸腺嘧啶脱氧核苷的标记指数实验
实验方法原理 细胞培养至适当密度，用1H -胸腺嘧啶脱氧核苷标记 30min，清洗后固定细胞，除去未掺入的前体物，准备同位素放射自显术。 实验步骤 材料
靶蛋白的放射标记实验—酵母和细菌蛋白质代谢放射标记
实验材料细胞仪器、耗材基本培养基实验步骤1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基，于合适温度中度振荡培养过夜。2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物，继续温育至 107 细胞/ml （酵母）或对数期中期（细菌）。3. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞，用无硫酸盐基本培养基
蛋白共沉淀检测实验_备择－用GST融合蛋白
实验材料全细胞抽提物试剂、试剂盒谷胱甘肽-琼脂糖或者谷胱甘肽-琼脂糖浆抗体免疫共沉淀缓冲液氯化钠蛋白 A G-琼脂糖浆2 × 样品缓冲液（用于 SDS-PAGE 胶）仪器、耗材20 ml 注射器和 18-G 针头汉密尔顿注射器实验步骤1. 按照蛋白 A/G-琼脂糖浆所述的方式准备两份样本（见「用蛋白
单个神经细胞标记实验
用辣根过氧化物酶对单个Purkmje细胞进行细胞内标记实验 实验方法原理 本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的
单个神经细胞标记实验
用辣根过氧化物酶对单个Purkmje细胞进行细胞内标记实验实验方法原理本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的技术指导（也可参考Kitai and Bishop 1981)。实验材料猫的小脑试剂、试剂盒利多卡因Karnovsky 型固定液甲酚紫仪器、耗材微
单个神经细胞标记实验
实验方法原理本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的技术指导（也可参考Kitai and Bishop 1981)。实验材料猫的小脑 试剂
32－P－标记裂解培养细胞实验
实验方法原理 实验材料 待标记的培养细胞试剂、试剂盒 37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)温和裂解缓冲液／RIPA 裂解缓冲液仪器、耗材 树脂玻璃挡板(1 in 厚)取液器吸头树脂玻璃盒37℃微量离心管一次性
靶细胞杀伤实验：AnnexiV标记法
正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserine，PS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD
32－P－标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞） 基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞） SDS煮沸法裂解细胞 实验方法原理
离体神经突触的代谢性标记实验
试剂、试剂盒 固定剂 温育液 氯霉素 放射自显影乳剂 显影剂 SDS样本缓冲液 实验步骤
重组蛋白质的代谢标记实验
由于重组蛋白质表达的时候，宿主蛋白质的合成基本终止，因此体内代谢标记是检测重组蛋白质的敏感方法。实验材料蛋白质试剂、试剂盒胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材培养瓶离心机转子实验步骤1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病
重组蛋白质的代谢标记实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材 培养瓶离心机转子实验步骤 1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病毒分别准备一个平皿供感染用，并准备一个对照平皿供野生型杆状病毒感染。于27℃温育
离体神经突触的代谢性标记实验
试剂、试剂盒 固定剂温育液氯霉素放射自显影乳剂显影剂SDS样本缓冲液实验步骤 一、放射自显影神经元在条件培养基中培养 2d，如第十章所述。1.用一个锋利的微电极从胞体分离神经突起，并用牵引电极将胞体移出培养皿 (见第十章)。2.在培养液中加入终浓度 0.lmmol/L 氯霉素，阻断线粒体蛋白的合成。
离体神经突触的代谢性标记实验
mRNA 和 rRNA 存在于树突和轴突内（VanMinnen1994;Steward1997)。令人疑惑不解的是，位于胞体外区域的 mRNA 是否真的被翻译。下面的方法可以证明神经突起确实可以不依赖胞体而合成蛋白。现代神经科学研究技术作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻
重组蛋白质的代谢标记实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
实验动物标记实验
实验材料兔子 小鼠试剂、试剂盒3%～5%苦味酸 0.5%中性品红 2%硝酸银实验步骤1. 染色法 适用于小动物，如兔子、大鼠、小鼠等。此方法是将化学药品涂在动物的被毛上，以不同颜色来区分动物。常用的化学药品有：3%～5%苦味酸溶液（黄色）、0.5%中性品红（红色）、2%硝酸银（咖啡色）。标记的原则是
实验动物标记实验
实验材料 兔子 小鼠试剂、试剂盒 3%～5%苦味酸 0.5%中性品红 2%硝酸银实验步骤 1. 染色法 适用于小动物，如兔子、大鼠、小鼠等。此方法是将化学药品涂在动物的被毛上，以不同颜色来区分动物。常用的化学药品有：3%～5%苦味酸溶液（黄色）、0.5%中性品红（红色）、2%硝酸银（咖啡色）
ULS标记实验
实验方法原理 Universal Linkage System(ULS®;KREATECH Biotechnology BV）是用铂染色络合物与鸟嘌呤核苷的N7残基反应进行标记的方法。反应使核酸与铂荧光基团之间形成稳定的化学键。依据反应条件，ULS化合物在较低的程度上也与腺嘌呤形成络合物。该
ULS标记实验
实验方法原理Universal Linkage System(ULS®;KREATECH Biotechnology BV）是用铂染色络合物与鸟嘌呤核苷的N7残基反应进行标记的方法。反应使核酸与铂荧光基团之间形成稳定的化学键。依据反应条件，ULS化合物在较低的程度上也与腺嘌呤形成络合物。该方法已用于