培养细胞的染色实验——Feulgen染色法

实验方法原理此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解离脱氧核糖核酸,使嘌呤碱基与糖苷犍破坏,嘌呤碱脱掉,脱氧核糖的中的醛基游离;醛基能与Schiff试剂相结合,形成一种紫色的复合物。本方法中酸的离解根重要,若温度过低、或酸度不够,醛基暴露不充分,染色会过浅;反之,酸解过分,能导致DNA完全解聚,而染色体的染色反应减弱。细胞中RNA对酸比较稳定,醛基难游离,不被着色,为DNA特异性染色的原因。试剂、试剂盒HClSchiff亚硫酸钠品红仪器、耗材棕色瓶实验步骤1. 单层盖片法培养细胞,Carnoy或醋酸/甲醇固定20 分钟;2. 投入1 N HCl 1~2 分钟(室温);3. 投入1 N HCl 8~10 分钟(60 ℃);4. 投入Schiff剂中染色1~5 小时(10 ℃暗处);5. 漂......阅读全文

培养细胞的染色实验——Feulgen染色法

实验方法原理此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解离脱氧核糖核酸,使嘌呤碱基与糖苷犍破坏,嘌呤碱脱掉,脱氧核糖的中的醛基游离;醛基能与Schiff试剂相结合,形成一种紫色的复合物。本方法中酸的离解根重要,若温度过低

DNA的Feulgen染色法

1.目的与原理实验目的:   学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。实验原理:   DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,

DNA的Feulgen染色法

1.目的与原理 实验目的: 学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。 实验原理: DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚

DNA的Feulgen染色法

1.目的与原理实验目的:学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。实验原理:DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有

有丝分裂(Feulgen染色法)

实验原理:细胞中的DNA受1NHC1,60℃水解作用以后,核酸中的嘌呤碱很快完全被除掉,使脱氧核糖中潜在的醛基获得自由状态。水解后,组织要经水洗再移至希夫(Schiff)试剂中,希夫试剂即同露出来的醛基发生反应,呈现紫红色。这个反应是Feulgen在1942年提出来的,是DNA的一个特异性检查法。 

培养细胞的染色实验——Giemsa染色法

实验方法原理Giemsa 染色是最常用的方法之一,它简便、快速,适用于多种细胞和染色体染色。试剂、试剂盒Giemse甘油甲醇Sorensen仪器、耗材滴管玻璃片实验步骤1.  染液制备(1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合,研磨至无颗粒;(2)再

培养细胞的染色实验——苏木精伊红染色法

培养细胞可用各种方法染色,有一般和特殊之分;一般染色为观察细胞一般形态之用,特殊染色为用于观察细胞的特殊成分和结构的染色方法。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。实验材料苏木精试剂、试剂盒甘油冰醋酸伊红铵矾仪器、耗材载玻片盖玻片实验步骤1.  37 ℃温BSS漂洗3 次,每次20 秒~1 分钟;中性

培养细胞的染色实验

Giemsa染色法 苏木精伊红染色法 Feulgen染色法 吖啶橙染色荧光观察法             实验方法原理 Giemsa 染色是最常用的方法

血细胞染色—吉姆萨染色法

吉姆萨(Giemsa)染色法吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为

有丝分裂(Feulgen染色)制片技术

实验概要 1、通过本实验的学习,初步掌握植物染色体制片,奠定细胞遗传学研究的基本技术; 2、通过对植物根尖细胞的观察,掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化; 3、掌握Feulgen染色方法。 实验原理 有丝分裂(mitosis)是植物

有丝分裂(Feulgen染色)制片技术

实验概要1、通过本实验的学习,初步掌握植物染色体制片,奠定细胞遗传学研究的基本技术; 2、通过对植物根尖细胞的观察,掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化; 3、掌握Feulgen染色方法。实验原理有丝分裂(mitosis)是植物细胞分裂的主要方式,细胞分裂过程中,核内染色体准确地复制,并有规

血细胞化学染色的染色法—铁染色的介绍

  (1)血细胞化学染色的染色法—铁染色的原理:人体内有一定量的以铁蛋白和含铁血黄素形式贮存的铁元素,这些铁在酸化的低铁氰化钾溶液中反应,生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀(普鲁士蓝),定位于含铁的部位。  (2)血细胞化学染色的染色法—铁染色的操作方法:将染色液滴加在骨髓小粒丰富的骨髓涂片上,室温20~30

鞭毛染色实验——硝酸银染色法

细菌的鞭毛很纤细,其直径通常为 0.01 ~0.02 μm, 所以,除了很少数能形成鞭毛束(由多根鞭毛构成)的细圈可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外,一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到,而只能用电子显微镜观察。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛,必须用鞭毛染色法。鞭毛染色方法很多,本实验

鞭毛染色实验——改良-Leifson-氏染色法

实验方法原理鞭毛染色的基本原理,是在染色前先用媒染剂处理含使它沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进行染色。实验材料苏云金芽孢杆菌假单胞菌金黄色葡萄球菌试剂、试剂盒Leifson 氏鞭毛染色液0.01% 美蓝水溶液仪器、耗材载玻片盖玻片凹载玻片无菌水凡士林显微镜实验步骤1. 载玻片的准备 菌种材料的

细胞凋亡检测实验——Annexin-V/PI双染色法

实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。A

革兰氏染色法实验步骤简介

  步骤  革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:  1)涂片固定。  2)草酸铵结晶紫染1分钟。  3)蒸馏水冲洗。  4)加碘液覆盖涂面染约1分钟。  5)水洗,用吸水纸吸去水分。  6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分。  7)蕃红染

简述革兰氏染色法的实验原理

原理  通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其

血液细胞染色法有哪些?

一、瑞氏染色瑞氏染色是血涂片最常用、最经典的染色方法,对细胞质和颗粒染色效果好。1.染液组成:碱性亚甲蓝、酸性伊红、甲醇(作为溶剂及固定细胞形态)。2.原理:物理吸附和化学亲和作用。3.染色效果:最适pH为6.4~6.8。若缓冲液偏酸,则红细胞和嗜酸性粒细胞偏红,细胞核呈淡蓝色或不着色。若缓冲液偏碱

固定细胞的PI单染色法

方法一1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。2.3ml PBS洗一次。3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。5.400目的筛网过滤1次,500~1000r/min离心5min,弃去P

简单染色法与革兰氏染色法

(一)细菌的简单染色法 1 目的 1.1 学习微生物  涂片、染色的基本技术。 1.2 掌握细菌的简单染色法。 1.3 初步认识细菌的形态特征,巩固学习油镜的使用方法和无菌操作技术。 2 原理 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识

免疫酶染色试验_细胞免疫酶染色法

细胞免疫酶染色法(以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明)实验方法原理免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)标记已知抗体或抗原,与相应抗原或抗体结合,形成酶标记抗体-抗原复合物,复合物中的酶在遇到相

免疫酶染色试验_细胞免疫酶染色法

细胞免疫酶染色法(以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明)实验方法原理免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)标记已知抗体或抗原,与相应抗原或抗体结合,形成酶标记抗体-抗原复合物,复合物中的酶在遇到相

细胞计数及活力测定实验——台盼兰染色法

实验方法原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损

细胞膜糖类电镜显示实验——钌红染色法

细胞膜糖类 电镜 显示技术 免疫组织化学实验技术及应用 第十四章细胞膜糖类电镜显示实验可以用于:观察细胞膜上的糖蛋白和糖脂。其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术,此外,还有钌红染色法等。实验方法原理钌红染色法的原理是钌红可以与羧基(酸性基)通过静电结合,电镜下呈电子密度高染色。实验材料组织样品试剂

细胞骨架观察实验—考马斯亮蓝染色法

实验方法原理荧光免疫染色法显示细胞骨架具有清晰优点,但操作过程较复杂;考马斯亮蓝染色法简便易行,清晰度稍差,但如分化处理适当能提高清晰度。实验材料细胞试剂、试剂盒磷酸二氢钠磷酸氢二钠戊二醛甲醇冰醋酸蒸溜水考马斯亮蓝仪器、耗材培养瓶实验步骤1.  固定液准备0.1 M 磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H

流式细胞仪检测细胞凋亡实验——PI单染色法

实验方法原理主要根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变,包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等进行检测。实验材料细胞试剂、试剂盒PBSPI蒸馏水乙醇仪器、耗材棕色瓶400目筛网流式细胞仪实验步骤一、收集细胞收集细胞{数目约(1~ 5)x106个/mL}

流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤

一、基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据

流式细胞仪检测细胞凋亡实验PI单染色法

一、基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变最具特征性,主要包括以下几个方面:1、细胞核的改变由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变

血液细胞染色——瑞氏染色法的注意事项

①选用的玻片应洁净干爽、无污物潮湿 ,否则 ,有可能出现血片不洁、血细胞被玻片上的杂物损坏、以及 “潮湿”使血细胞着色产生偏差等不 良后果。②血膜厚薄要适宜 ,太厚或太薄均不好 ,太厚不仅容易造成血细胞过多过密 、血膜片浓染 。而 日.,常会使部分 血细胞浓缩变小 、形态不佳 。太薄 ,血片

支原体的检测实验_荧光染色法

实验方法原理荧光显微镜检查法,荧光染料用 Hoechst 33258,它是一种能与DNA 特异结合的荧光染料。支原体内含有DNA,能着色,是现有检测法中最方便和最有效的一种。实验材料细胞试剂、试剂盒Hanks醋酸甲醇蒸馏水仪器、耗材盖片显微镜实验步骤1.  标本盖片培养细胞汇合前从瓶中取出(如细胞已