DNA的Feulgen染色法
1.目的与原理实验目的: 学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。实验原理: DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生,是由于反应产物的分子内含有醌基,醌基是一个发色团,所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理,抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应,从而证明了Feulgen反应的专一性。2.实验用品材料:(1).Carnoy液固定的鼠肝石蜡切片(2).Carnoy液固定的洋葱根尖或蚕豆根尖切片。试剂:(1).Carnoy固定液:3份95%酒精加入1份冰醋酸。(2).1 mol/L HCl:取比重1.18的浓HCl 82.5ml,加水至100ml。(3).Schiff试剂 先将200ml蒸......阅读全文
DNA的Feulgen染色法
1.目的与原理实验目的: 学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。实验原理: DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,
DNA的Feulgen染色法
1.目的与原理实验目的:学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。实验原理:DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有
DNA的Feulgen染色法
1.目的与原理 实验目的: 学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。 实验原理: DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚
有丝分裂(Feulgen染色法)
实验原理:细胞中的DNA受1NHC1,60℃水解作用以后,核酸中的嘌呤碱很快完全被除掉,使脱氧核糖中潜在的醛基获得自由状态。水解后,组织要经水洗再移至希夫(Schiff)试剂中,希夫试剂即同露出来的醛基发生反应,呈现紫红色。这个反应是Feulgen在1942年提出来的,是DNA的一个特异性检查法。
培养细胞的染色实验——Feulgen染色法
实验方法原理此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解离脱氧核糖核酸,使嘌呤碱基与糖苷犍破坏,嘌呤碱脱掉,脱氧核糖的中的醛基游离;醛基能与Schiff试剂相结合,形成一种紫色的复合物。本方法中酸的离解根重要,若温度过低
DNA的细胞化学反应——Feulgen反应
实验概要 1、了解Feulgen反应的基本原理。 2、熟悉传统细胞化学实验的基本实验技能和操作方法。实验原理 Feulgen反应是1924年由Feulgen和Rossenbeck开创的。这一反应的原理是:DNA经酸(1mol/LHCL)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游
原代细胞富尔根(Feulgen)反应显示DNA
基本原理:显示DNA的传统方法是富尔根(Feulgen)反应,切片先用稀盐酸处理,DNA经弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开,脱氧核糖的一端释放出醛基,并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。原理同PAS反应,使细胞核DNA显紫红色
原代细胞富尔根(Feulgen)反应显示DNA
原代细胞富尔根(Feulgen)反应显示DNA 基本原理:显示DNA的传统方法是富尔根(Feulgen)反应,切片先用稀盐酸处理,DNA经弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开,脱氧核糖的一端释放出醛基,并在原位与Schiff试剂反应生成紫红
细胞组分的分析方法——定量细胞化学分析技术2
5.固定方法(1)福尔马林法: 在单细胞悬液中加入等体积含8%甲醛的盐水G,4℃下固定12至18小时。该法常用于Acriflavine-Feulgen染色。(2)乙醇法: 细胞被重新悬浮于5ml冷盐水G中,慢慢加入-20℃95%的乙醇15ml,其最终浓度为70%,冰浴30分钟。此法常用于EB及P
微生物拟核体内体外染色观察实验_富尔根氏染色法
实验方法原理富尔根氏(Feulgen)染色法是根据席夫氏(Schiff)试剂进行的反应而建立的微生物拟核染色法。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸,碱性复红与亚硫酸结合后,失去醌式结构而变为无色。当 DNA 经酸作用而生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后,使醌式结构恢复,合成一种带紫红色的碱性复红衍生物。此
微生物拟核体内体外染色观察实验
实验方法原理 富尔根氏(Feulgen)染色法是根据席夫氏(Schiff)试剂进行的反应而建立的微生物拟核染色法。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸,碱性复红与亚硫酸结合后,失去醌式结构而变为无色。当 DNA 经酸作用而生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后,使醌式结构恢复,合成一种带紫红色的碱性复红衍生
有丝分裂(Feulgen染色)制片技术
实验概要 1、通过本实验的学习,初步掌握植物染色体制片,奠定细胞遗传学研究的基本技术; 2、通过对植物根尖细胞的观察,掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化; 3、掌握Feulgen染色方法。 实验原理 有丝分裂(mitosis)是植物
有丝分裂(Feulgen染色)制片技术
实验概要1、通过本实验的学习,初步掌握植物染色体制片,奠定细胞遗传学研究的基本技术; 2、通过对植物根尖细胞的观察,掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化; 3、掌握Feulgen染色方法。实验原理有丝分裂(mitosis)是植物细胞分裂的主要方式,细胞分裂过程中,核内染色体准确地复制,并有规
DNA测序非同位素银染色法
SILVER SEQUENCETM DNA测序系统是一种无放射性的序列分析系统,它通过灵敏的银染方法检测凝胶中的条带。 银染提供了一种对于放射性或荧光法来说更加快速,廉价的替代方法。测序结果可以在同一天内得到;电泳完成后经90分钟就可读序,这是常规的放射性测序法做不到的。 此外,SILVER S
DNA测序非同位素银染色法的测序反应
1. 对于每组测序反应,标记四个0.5 ml eppendorf管(G、A、T、C)。每管加入2 ml适当的d/ddNTP混合物(d/ddNTP Mix)。各加入1滴(约20 μl)矿物油,盖上盖子保存于冰上或4℃备用。 2. 对于每组四个测序反应,在一个eppendorf管中混合以下试剂:
细胞支原体污染的荧光检测方法:DNA萤光染色法
DNA萤光染色法 ·原理︰利用萤光染剂(bisbenzimide, Hoechst 33258)侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域,因为支原体之DNA中A-T含量占多数(55~80%),所以可将其染色而侦测。被支原体污染
原代细胞DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法
基本原理:吖啶橙(acridine orange,AO)是一种常用荧光染料,吖啶橙与原代细胞内的DNA、RNA都有亲和力,但有一定的特异性,即结合后发不同颜色的荧光,DNA呈亮绿色,而RNA呈橘红色至火红色。此法简便快捷,既可染活原代细胞又可染固定原代细胞。用于直接染色观察活原代细胞或固定染色观
DNA测序非同位素银染色法的试剂准备
1. SILVER SEQUENCETM DNA测序试剂盒。 2. 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺储备液(38%丙烯酰胺 W/V,2%甲叉双丙烯酰胺 W/V):95 g丙烯酰胺,5 g甲叉双丙烯酰胺溶于140 ml 双蒸水中,定容至250 ml,0.45 mm过滤器过滤后,贮于棕色瓶中,置于4℃冰箱
原代细胞DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法
基本原理:吖啶橙(acridine orange,AO)是一种常用荧光染料,吖啶橙与原代细胞内的DNA、RNA都有亲和力,但有一定的特异性,即结合后发不同颜色的荧光,DNA呈亮绿色,而RNA呈橘红色至火红色。此法简便快捷,既可染活原代细胞又可染固定原代细胞。用于直接染色观察活原代细胞或固定染色观
DNA测序的方法非同位素银染色法的原理
SILVER SEQUENCETM DNA测序系统是一种无放射性的序列分析系统,它通过灵敏的银染方法检测凝胶中的条带。 银染提供了一种对于放射性或荧光法来说更加快速,廉价的替代方法。测序结果可以在同一天内得到;电泳完成后经90分钟就可读序,这是常规的放射性测序法做不到的。 此外,SILVER SEQ
DNA测序技术非同位素银染色法介绍
DNA测序系统是一种无放射性的序列分析系统,它通过灵敏的银染方法检测凝胶中的条带。 银染提供了一种对于放射性或荧光法来说更加快速,廉价的替代方法。测序结果可以在同一天内得到;电泳完成后经90分钟就可读序,这是常规的放射性测序法做不到的。 此外,SILVER SEQUENCETM系统用未修饰的5
DNA的细胞化学――孚尔根反应(二)
(注意: 这个步骤非常重要,必须用1 mol/L稀盐酸冲洗,因为它可以洗去贴在切片上的试剂的痕迹。如用蒸馏水冲洗,则试剂本身也可以水解,所释放出的碱性品红,可以使切片内一切嗜碱性物质皆染色从而引起严重的错误。若切片较厚,可延长其水解时间,而且每次均需更换洗涤剂)↓蒸馏水冲洗3次(使水解停止)↓S
DNA的细胞化学――孚尔根反应(二)
(注意: 这个步骤非常重要,必须用1 mol/L稀盐酸冲洗,因为它可以洗去贴在切片上的试剂的痕迹。如用蒸馏水冲洗,则试剂本身也可以水解,所释放出的碱性品红,可以使切片内一切嗜碱性物质皆染色从而引起严重的错误。若切片较厚,可延长其水解时间,而且每次均需更换洗涤剂) ↓ 蒸馏水冲洗3
DNA测序非同位素银染色法的注意事项
(1)测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入: 模板种类/长度 模板量 200 bp(PCR产物):16 ng(120 fmol) 3000~5 000 bp(超螺旋质粒DNA): 4 mg(2 pmol) 48 000 bp(λ,粘粒DNA): 1 mg(31 fmol) 由于超螺
DNA测序方法非同位素银染色法的操作步骤
一、试剂准备1. SILVER SEQUENCETM DNA测序试剂盒。2. 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺储备液(38%丙烯酰胺 W/V,2%甲叉双丙烯酰胺 W/V):95 g丙烯酰胺,5 g甲叉双丙烯酰胺溶于140 ml 双蒸水中,定容至250 ml,0.45 mm过滤器过滤后,贮于棕色瓶中,置于4℃
DNA测序的方法非同位素银染色法的操作方法
一、试剂准备1. SILVER SEQUENCETM DNA测序试剂盒。2. 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺储备液(38%丙烯酰胺 W/V,2%甲叉双丙烯酰胺 W/V):95 g丙烯酰胺,5 g甲叉双丙烯酰胺溶于140 ml 双蒸水中,定容至250 ml,0.45 mm过滤器过滤后,贮于棕色瓶中,置于4℃
DNA的细胞化学――孚尔根反应(一)
Feulgen反应(Feulgen reaction)是显示DNA的最典型的组织化学反应,为学者Feulgen和Rossenbeck于1924年发明,简称为Feulgen法。因对 DNA的显示反应具有高度专一性,故常被用来显示细胞内DNA的分布情况。 1.实 验 目 的
DNA的细胞化学――孚尔根反应(一)
Feulgen反应(Feulgen reaction)是显示DNA的最典型的组织化学反应,为学者Feulgen和Rossenbeck于1924年发明,简称为Feulgen法。因对 DNA的显示反应具有高度专一性,故常被用来显示细胞内DNA的分布情况。1.实 验 目 的1.1. 熟悉并掌握Feulge
简单染色法与革兰氏染色法
(一)细菌的简单染色法 1 目的 1.1 学习微生物 涂片、染色的基本技术。 1.2 掌握细菌的简单染色法。 1.3 初步认识细菌的形态特征,巩固学习油镜的使用方法和无菌操作技术。 2 原理 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识
DNA显示和细胞有丝分裂相的观察
核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它们在细胞内的分布及化学性质均有所不同。DNA主要分布在核的染色质或有丝分裂过程中出现的染色体内。RNA分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有少量的RNA,核仁中也有少量的DNA。在线粒体,叶绿体等细