细胞表面抗原检测实验_免疫荧光抗体法

细胞表面有糖蛋白,这种蛋白质上有多糖,起到识别作用,当无法识别的糖蛋白进入血液就会引起身体的免疫反应引来严重后果,直接输血才会引起,如果喝就不会,因为胃都将其降解成氨基酸了,进入身体合成自身蛋白质就不会有事故。实验方法原理用人结肠癌细胞为免疫原,免疫小鼠,制得鼠抗人结肠癌细胞表面抗原(Ag)的单克隆抗体 IgG(第一抗体),二者可以发生特异性的抗原抗体反应,形成抗原抗体复合物,再加入市售(也可自制)的荧光标记的羊抗鼠IgG抗体(第二抗体),可以与复合物进一步发生抗原抗体反应(二次抗体反应),这样就可以在光显微镜下观察到这种抗原在结肠癌细胞表面的存在。实验材料HeLa细胞试剂、试剂盒1640培养液小牛血清甲醛固定液PBS液体石蜡仪器、耗材盖片载片培养瓶培养皿滤纸镊子吸管倒置显微镜荧光显微镜微量加样器实验步骤1. 将培养瓶中的结肠癌细胞接种到装有盖片的培养皿中,培养2~3天。2. 在倒置镜下观察到盖片上的细胞......阅读全文

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐

活细胞间接免疫荧光法

一.实验器材:1.  器材:40孔塑料板、40孔板离心机、微量加样器、振荡器、盖玻片、荧光显微镜等2.  试剂:单抗隆抗体(单抗)、荧光标记抗鼠免疫球蛋白、PBS(pH7.2-7.4)、甘油、叠氮钠(NaN3)等二.方法(微量法)1.  将分离好的单个核细胞用PBS洗2次,1000rpm每次10分钟

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法

一、其它荧光抗体染色方法1、膜抗原荧光抗体染色法本法应用直接法或间接法的原理和步骤,可对活细胞在试管内进行染色,常用于T和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究,阳性荧光主要在细胞膜上。FACS即采用此法原理。2、双重染色法在同一标本上有两个抗原需要同时显示(如A抗原和B抗原),A抗原的

细胞免疫荧光的详细操作步骤

细胞免疫荧光的详细操作步骤1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3,0.2%Triton X 100通透10分钟,PBS洗三遍。4, 与二抗相同宿主的血清封闭30分

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法

免疫荧光组织(细胞)化学染色方法:直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐

如何分析细胞免疫荧光的结果

细胞免疫荧光(Immunofluorescence, IF)是一种常用的技术,用于检测细胞内特定蛋白质或其他分子的分布和表达情况。分析细胞免疫荧光的结果涉及多个步骤,包括图像采集、图像处理、定量分析和数据解释。以下是详细的步骤和方法:1. 图像采集显微镜选择:使用荧光显微镜(如共聚焦显微镜)进行图像

细胞免疫荧光的详细操作步骤

细胞免疫荧光的详细操作步骤1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3,0.2%Triton X 100通透10分钟,PBS洗三遍。4, 与二抗相同宿主的血清封闭30分

如何分析细胞免疫荧光的结果

细胞免疫荧光(Immunofluorescence, IF)是一种常用的技术,用于检测细胞内特定蛋白质或其他分子的分布和表达情况。分析细胞免疫荧光的结果涉及多个步骤,包括图像采集、图像处理、定量分析和数据解释。以下是详细的步骤和方法:1. 图像采集显微镜选择:使用荧光显微镜(如共聚焦显微镜)进行图像

免疫荧光细胞化学染色方法1

一、标本制作可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法   (一)直接法   1.染色 切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等),

免疫荧光细胞化学染色方法2

 2.方法步骤   (1)涂片或切片固定。   (2)吸取经适当稀释之免疫血清及补体之等量混合液(此时免疫血清及补体又都稀释一倍)滴于切片上,37℃作用30min,置于保持一定湿度的染色盒内。   (3)用缓冲盐水洗2次,搅拌,每次5min,吸干标本周围水液。

如何分析细胞免疫荧光的结果

细胞免疫荧光(Immunofluorescence, IF)是一种常用的技术,用于检测细胞内特定蛋白质或其他分子的分布和表达情况。分析细胞免疫荧光的结果涉及多个步骤,包括图像采集、图像处理、定量分析和数据解释。以下是详细的步骤和方法:1. 图像采集显微镜选择:使用荧光显微镜(如共聚焦显微镜)进行图像

免疫荧光组织(细胞)化学技术:如何设置对照(直接...

免疫荧光组织(细胞)化学技术:如何设置对照(直接法、间接法为了保证免疫荧光组织化学染色的准确性,排除某些非特异性染色,必须在初次试验时设置对照: 1、直接法 (1)标本自发荧光对照 标本只加PBS或缓冲甘油封片,荧光显微镜观察组织内如果有荧光,称为自发荧光。 (2)抑制试验   可分为一

免疫学实验抗丙型肝炎抗体检测(抗HCVIg)介绍

丙型肝炎抗体检测(抗-HCV-Ig)介绍:  丙型肝炎抗体是由丙型肝炎病毒(HCV)所引起。机体感染HCV后,在血清中抗体出现较晚。丙型肝炎抗体检测(抗-HCV-Ig)正常值:  抗-HCIgM阴性,抗-HCIgG阴性。丙型肝炎抗体检测(抗-HCV-Ig)临床意义:  抗-HCV-IgA是丙型肝炎诊

关于麻疹病毒的检查方法介绍

  典型麻疹病例无需实验室检查,根据临床症状即可诊断。对轻症和不典型病例则需做微生物学检查以求确诊。由于病毒分离鉴定方法复杂而且费时,至少需2~3周,因此多用血清学诊断。  1、病毒分离  取患者发病早期的血液、咽洗液或咽拭子经抗生素处理后,接种于人胚肾、猴肾或人羊膜细胞中培养。病毒增殖缓慢,经7~

恶性肿瘤病人外周血免疫指标的流式细胞仪检测

恶性肿瘤病人外周血免疫指标的流式细胞仪检测及免疫治疗前后免疫功能变化的研究恶性肿瘤的发生、发展与机体免疫系统密切相关。运用流式细胞术的方法,检测T淋巴细胞表面抗原(CD3、CD4、CD8),B淋巴细胞表面抗原(CD19、CD20),NK细胞表面抗原(CD16+56)在恶性肿瘤病人外周血中的表达,并检

免疫细胞化学染色和免疫荧光有什么区别

同志这不是化学范畴的immunofluorescence technic又名免疫荧光种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称

免疫细胞化学染色和免疫荧光有什么区别

同志这不是化学范畴的immunofluorescence technic又名免疫荧光种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称

关于韦格内肉芽肿的诊断标准介绍

  1.结节性多动脉炎  主要节段性地累及中小动脉,呈炎性及坏死病变,无肉芽肿性损害,侵犯的组织器官多,临床表现多样,常有皮下结节、高血压、腹部症状。早期出现肾脏损害,而呼吸系统常不受累。  2.淋巴瘤样肉芽肿病  为系统性血管浸润性和血管中心性坏死性肉芽肿病,上呼吸道常不受累,病变主要累及肺、皮肤

实验时间_流式细胞仪检测细胞凋亡实验

流式细胞仪检测细胞凋亡可以:鉴定细胞凋亡形态;可以准确的进行凋亡细胞的计数;可以进行特异的定性分析和定量分析。实验原理细胞凋亡时,在细胞、亚细胞和分子水平上会发生的特征性改变,这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变最具特征性。通过流式细胞仪检测这

抗胰岛细胞抗体(ICA)检测的注意事项

  在Ⅰ型糖尿病(T1DM)新发患者中,ICA的阳性率高达60%-80%,并具有高度特异性。在正常人群中ICA阳性率仅0.5%。高滴度的ICA预示疾病进展的高危险性。ICA持续高滴度的患者患病的危险性高于一过性或ICA水平呈波动性的患者。ICA持续高滴度通常与B细胞的损伤有关,与C肽水平呈负相关。另

抗胰岛细胞抗体(ICA)检测的临床意义

  抗胰岛细胞抗体(ICA)是胰岛细胞浆的自身抗体,为1型糖尿病发生、发展、演变的标志性抗体、也是1型糖尿病的诊断依据之一  1、诊断胰岛素依赖性糖尿病,胰岛素依赖性糖尿病患者,检出率达60%~70%,常在临床发病前期即可测出,数周后降低,起病后3 年检出率约20%。  2、作为糖尿病的分型指标,I

抗小肠杯状细胞抗体检测的介绍

  抗小肠杯状细胞抗体能帮助诊断炎症性肠病,常用间接免疫荧光法测定。高滴度的抗小肠杯状细胞抗体主要见于溃疡性结肠炎,阳性率达28%~39%。部分克罗恩病患者也可检出抗小肠杯状细胞抗体。在炎症性肠病患者的近亲中检出抗小肠杯状细胞抗体,预示易患炎症性肠病。

用棉花幼苗外植体法测定脱落酸的活性实验

实验方法原理脱落酸能增强果胶酶和纤维素酶的活性,引起离层产生,导致脱落。在一定浓度范围内,脱落率与脱落酸浓度成正比,脱落时间与脱落酸浓度成反比。实验材料棉花幼苗                                                          试剂、试剂盒脱落酸溶液

用棉花幼苗外植体法测定脱落酸的活性实验

实验方法原理 脱落酸能增强果胶酶和纤维素酶的活性,引起离层产生,导致脱落。在一定浓度范围内,脱落率与脱落酸浓度成正比,脱落时间与脱落酸浓度成反比。实验材料 棉花幼苗试剂、试剂盒 脱落酸溶液仪器、耗材 手术剪刀单面刀片烧杯镊子 培养皿注射器石英砂蛭石脱脂棉琼脂实验步骤 一、材料与设备棉花幼苗手术剪刀或

用棉花幼苗外植体法测定脱落酸的活性实验

实验方法原理脱落酸能增强果胶酶和纤维素酶的活性,引起离层产生,导致脱落。在一定浓度范围内,脱落率与脱落酸浓度成正比,脱落时间与脱落酸浓度成反比。实验材料棉花幼苗试剂、试剂盒脱落酸溶液仪器、耗材手术剪刀单面刀片烧杯镊子培养皿注射器石英砂蛭石脱脂棉琼脂实验步骤一、材料与设备棉花幼苗手术剪刀或单面刀片,烧

细胞凋亡检测实验——细胞凋亡的形态学检测

实验方法原理根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。仪器、耗材光学显微镜倒置显微镜荧光显微镜共聚焦激光扫描显微镜透射电子显微镜实验步骤一、光学显微镜和倒置显微镜1.  未染色细胞凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞

细胞凋亡检测实验——DNA-片断化检测

实验方法原理细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA 在核小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300 kbp 长的DNA 大片段, 或180~200 bp 整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。细胞经处理后,采用常规方法分离提纯DNA,进

标本溶血对检测乙肝表面抗原的影响(二)

3 标本溶血对乙肝表面抗原检测影响的可能机制溶血是由于各种原因造成红细胞破坏,胞内血红蛋白(Hb)等物质和细胞内液进入血清。溶血对ELISA的影响主要是反应孔对溶血血清中Hb的非特异性吸附和溶血时细胞内液对血清的稀释作用。单桂秋等 [5] 的实验也证明了溶 血对血清具有稀释作用。在ELISA试验中,

标本溶血对检测乙肝表面抗原的影响(一)

在临床检测中,常常遇到溶血的标本。溶血对ELISA检测乙肝表面抗原(HBsAg)究竟是否有影响,各文献报道很不一致,本文对标本溶血的原因及其对ELISA检测乙肝表面抗原的影响进行简要的讨论。1 标本溶血的原因溶血是临床检验中最常见的一种干扰和影响因素。溶血可分为体内溶血和体外溶血 [1] 。

金标法乙肝表面抗原检测方法学探讨

【摘要】  通过从灵敏度、特异性、准确性及稳定性等四个方面对金标乙肝表面抗原检测法进行方法学探讨,并分别用金标法及酶免疫法对1200例体检及临床标本进行检测,发现金标法检测血清中乙肝表面抗原特异性强,灵敏度高,与酶免疫法符合率为99.0%,且无需特殊仪器设备,简便快速,具有广泛应用价值。【关键词】