核酸染色实验——DNA
核酸是细胞内的一种大分子化合物,核酸不仅存在于细胞核内,也存在于细胞质中,动物、植物和微生物等都含有核酸。核酸可分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。经过染料和化学试剂,能够清楚地显示 DNA 和核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)物质。实验方法原理在一般情况下,通过盐酸水解后使 DNA 残基分解碱基,然后从碳键处打断糖苷键而游离出醛基,再与无色复红液(Schiff)进行反应,形成紫红色的复合物(DNA)。常用 Feuhgen-Rossenbeck 染色法(孚尔根染色法)。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒Schiff 试剂染色液浓盐酸蒸馏水二甲苯无水乙醇中性树胶仪器、耗材滴管实验步骤Schiff 试剂染色液(见糖原部分)。5mol/L 盐酸液:浓盐酸(相对密度 1.19)42 ml,蒸馏水加至 100 ml。1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。2. 蒸馏水洗 2 min,5mol/L 盐酸液中水解 30 min。3. 蒸馏水......阅读全文
核酸染色实验——DNA
核酸是细胞内的一种大分子化合物,核酸不仅存在于细胞核内,也存在于细胞质中,动物、植物和微生物等都含有核酸。核酸可分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。经过染料和化学试剂,能够清楚地显示 DNA 和核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)物质。实验方法原理在一般情况下,通过盐酸水解后使 DNA 残基
核酸染色实验
实验方法原理 在一般情况下,通过盐酸水解后使 DNA 残基分解碱基,然后从碳键处打断糖苷键而游离出醛基,再与无色复红液(Schiff)进行反应,形成紫红色的复合物(DNA)。常用 Feuhgen-Rossenbeck 染色法(孚尔根染色法)。实验材料 石蜡组织切片试剂、试剂盒 Schiff 试剂染色
DNA核酸浓度的测定实验
实验方法原理 构成核酸的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,使核苷核和核酸在紫外线光具有特征性的吸收光谱,最大吸收峰为260nm。窄光带紫外分光光度计,长260nm.,比色杯光径1cm,1个吸光度值(1A)相当于50ug/ml双螺DNA,40ug/m1单螺旋DNA或RNA),20ug/ml寡核苷酸实验材料
DNA核酸浓度的测定实验
DNA核酸浓度的定量实验可以用于(1)对纯化的PCR产物进行浓度测定;(2)对纯化的酶切产物进行浓度测定;(3)对提取的质粒进行浓度测定。实验方法原理寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA可以定量溶于缓冲液,构成核酸的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,使核苷核和核酸在紫外线光具有特征性的吸收光谱,最大吸收
DNA的化学检测项目介绍核糖核酸染色
核糖核酸染色介绍: 核糖核酸在蛋白质合成中起重要作用,与细胞的分裂增生能力有密切关系,是细胞中的重要物质。与特殊染液作用后,可观察其含量。核糖核酸染色正常值: 血细胞在发育和成熟过程中,核糖核酸的含量有明显的规律性变化。原始阶段的细胞核仁和胞质含有丰富的核糖核酸,至幼稚阶段时核糖核酸的含量较前降
DNA荧光染色的样品制备实验
试剂、试剂盒PBS仪器、耗材DNA荧光染料流式细胞仪实验步骤DNA是细胞内含量比较恒定的参量,随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料(如PI)可选择性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的双螺旋碱基之间,与细胞特异性结合,DNA含量与荧光染料的结合量成正比,因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况
DNA荧光染色的样品制备实验
试剂、试剂盒 PBS 仪器、耗材 DNA荧光染料 流式细胞仪 实验步骤
DNA荧光染色的样品制备实验
试剂、试剂盒 PBS 仪器、耗材 DNA荧光染料 流式细胞仪 实验步骤
核酸染色实验——核仁组成区嗜银蛋白
实验方法原理核仁组成区是 DNA 的襻,具有核糖体基因(rDNA),在一定条件下可用银反应法进行定位,是通过银的聚合物沉积于胱氨酸和半胱氨酸的双硫键位置上,所以在镜下能够清楚可见颗粒状的核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒二甲苯无水乙醇中性树胶蒸馏水明胶粉双蒸水硝酸银仪
核酸的染色介绍
核酸染色法一般可将凝胶先用三氯乙酸、甲酸—乙酸混合液、氯化高汞、乙酸、乙酸镧等固定,或者将有关染料与上述溶液配在一起,同时固定与染色。有的染色液同时染DNA及RNA,如stains-all、溴乙锭、掊花青-铬矾法等,也有RNA、DNA各自特殊的染色法。1.RNA染色法(1)荧光染料溴乙锭(ethid
DNA的化学检测项目介绍脱氧核糖核酸染色
脱氧核糖核酸染色介绍: 脱氧核糖核酸是组成细胞核的成分,与特殊染液作用,被染成浅红色或紫红色。脱氧核糖核酸染色正常值: 幼稚血细胞脱氧核糖核酸颗粒堆积、聚集、染色深、成熟血细胞脱氧核糖核酸颗粒分布均匀,细小,染色浅。脱氧核糖核酸染色临床意义: (1)鉴别细胞的成熟程度,如小原粒细胞与成熟淋巴细
DNA裂解分析实验_乙醇固定后PI染色
实验材料细胞试剂、试剂盒EDTA-PBS洗涤缓冲液乙醇RNA 酶PI 溶液仪器、耗材流式细胞计量术实验步骤1. 在 5 mmol/L EDTA-PBS 中洗 1X106 细胞,重悬于 300 μl 洗涤缓冲液中。加 700 μl 100% 的冰冷乙醇,滴加,并轻微搅拌。旋转搅拌混匀。2. 14000
核酸染色观察及分布
DNA用甲基绿染色呈绿色,主要分布与细胞核,线粒体、叶绿体也有少量分布;RNA用吡罗红染色呈红色,主要分布在细胞质中。
微核实验在染色体水平检测DNA损伤实验(二)
注意事项(1)在我们进行 CBMN 实验过程中,最容易产生问题的是在玻片的制备和染色环节 ,因为计数结果的好坏依赖于制片的质量。主要注意事项:(a) 在将细胞置于玻片前应轻轻吹打,避免细胞结块;(b)细胞密度适中,这样才容易辨认细胞质边界;(c) 在染色所有玻片前先试染一张,以确定染色合适。(2)要
微核实验在染色体水平检测DNA损伤实验(一)
实验步骤一、材料1. 胞质分裂阻滞微核试验2. 微核的着丝点检测(1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。(2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。(3) 过氧化物酶标记的兔抗人 I g G 。(4) 二胺基联苯溶液(D A B ): I m g /m L 溶于
DNA的限制性核酸内切酶酶切实验和连接实验
一)酶切实验 本实验学习用限制性核酸内切酶(Restriction endonuclease)EcoRI 切割λDNA及质粒pBR322DNA,琼脂糖凝胶电泳后观察酶切结果。 【原理】 λDNA 是大肠杆菌的一种温和噬菌体DNA,双股线状,分子大小为48.5 kb。 EcoRI酶可识别DN
DNA琼脂糖核酸电泳
实验方法原理 带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。核酸电泳是进行核酸研究的重要手段,是核酸探针、核酸扩增和序列分析等技术所不可或缺的组成部分。核酸电泳通常 在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行,浓度不同的琼脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子筛网
DNA琼脂糖核酸电泳
1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架好梳子;2. 根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉,加入到配胶用的三角烧瓶内,定量加入电泳缓冲液(一般20~30 ml) ;3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻,加入一滴荧光染料
DNA琼脂糖核酸电泳
核酸电泳是进行核酸研究的重要手段,可以用于:(1)核酸探针;(2)核酸扩增;(3)序列分析等技术。实验方法原理带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。核酸电泳是进行核酸研究的重要手段,是核酸探针、核酸扩增和序列分析等技术所不可或缺的组成部分。核酸电泳通常 在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行,浓度不同
FFPE样本核酸(DNA/RNA)制备
福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)组织切片的存档代表了珍贵且来源广泛的生物医学研究材料。随着越来越多的研究人员转向 FFPE 样品的分子分析,开发特定的操作步骤,考虑这些样品的独特性质就变得越来越重要。QIAGEN 在 FFPE 样本纯化及下游检测整个流程中都提供完善的解决方案。QIAamp
核酸纯度、浓度与分子量测定实验——Ethidium-bromide染色法
实验方法原理利用一系列不同浓度的DNA标准溶液(0、2.5、5、10、20、30、40、50 ng/ml),或已知浓度的DNA marker,和未知浓度DNA样品一起进行琼脂糖凝胶电泳,以EB染色后,在凝胶图象分析仪上观察,比较标准浓度及未知浓度的亮度,来求取DNA 的含量;比较DNA样品与DNA
糖类染色实验——糖原染色
实验方法原理糖原由多糖衍化而来,是单纯的多糖。糖原易溶于水,所以用特殊的 Carnoy 固定液或无水乙醇直接固定才能较好地保存糖原,常用高碘酸(periodic acid)-Shiff 反应(PAS)染色法。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒高碘酸蒸馏水碱性复红盐酸焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)双重蒸馏水
核酸免疫实验
基 本 方 案 1 小 鼠 注 射 接 种DNA在免疫前应先阅读动物处理(附 录 2C) 和 接 种 的(附 录 2E) 指导说明。在正式实验之前需先进行肌肉和皮下注射练习; D N A 的精准注射对于免疫成功起关键作用。可以 用 India ink (或相同的染料)来定位注射的部位是否正确。材料2
核酸电泳实验
琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶EB(德元国际Cat# LY5009)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外
核酸免疫实验
介绍了用表达抗原的 DNA 增强免疫应答的途径。介绍了核酸免疫的两种方法:①注射含有 DNA 表达载体的生理盐水;② 用 基 因 枪 注 射 DNA。还包括了基因枪方法中使用的 DNA 包被金珠的制备和保存方法。实验步骤基 本 方 案 1 小 鼠 注 射 接 种DNA在免疫前应先阅读动物处理(附 录
染色体外DNA的定义
中文名称染色体外DNA英文名称extrachromosomal DNA定 义存在于染色体外的DNA。包括线粒体DNA、叶绿体DNA和质粒DNA等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
染色体外DNA的定义
中文名称染色体外DNA英文名称extrachromosomal DNA定 义存在于染色体外的DNA。包括线粒体DNA、叶绿体DNA和质粒DNA等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
DNA的Feulgen染色法
1.目的与原理实验目的: 学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。实验原理: DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,
染色体DNA的提取
一、实验目的与原理DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织,通过裂解液裂解细胞,有机溶剂反复抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开,在RNase作用下,降解RNA以纯
DNA的Feulgen染色法
1.目的与原理 实验目的: 学习DNA的Feulgen染色方法,观察染色结果,了解反应原理。 实验原理: DNA经弱酸(1mol/L HCl)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚