非同位素标记探针酶法检测实验——辣根过氧化物酶法检测
实验材料探针试剂、试剂盒PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺仪器、耗材盖玻片水浴锅实验步骤1. 以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片(“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步)。2. 由1×SSC中取出玻片,尽可能吸去残留玻片上的缓冲液,但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻片上,放24 mm×60 mm 的盖玻片于封阻液上,将载玻片放于裹以铝箔的加湿盒中,置37℃温育30 min。3. 从加湿盒中取出玻片,倾斜使盖玻片滑掉,尽可能吸去残留封阻液,但不使玻片干燥, 加200 μl 链亲和素液于载玻片上,放盖玻片于液体上,玻片放入裹以铝箔的加湿盒中,置37℃温育30 min。 4. 从加湿盒中取出玻片,倾斜使盖玻片滑掉,将载玻片放入含42℃ 0.1% Tween 20/PBS的Coplin广口瓶中,将瓶放入42℃振荡水浴中摇5 min,用42℃ 0.1%......阅读全文
细胞凋亡检测实验——形态学检测法
细胞凋亡检测可应用于:(1)肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究;(2)临床诊疗,新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗;(3)对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。实验方法原理根据凋亡细胞固有的形态特征,使用合适的显微镜检测凋亡细胞形态变化。
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成
反转录病毒原液检测实验——反转录酶分析法
实验材料病毒试剂、试剂盒SSC乙醇仪器、耗材滴定板滤纸离心机实验步骤1. 加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸,盖上平板,置于37℃培养箱中温育1~2 h。2. 将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸
检测酶活性的荧光探针
检测酶活性的荧光探针 共聚焦激光扫描显微镜除了具备荧光显微镜检测荧光酶细胞化学的作用以外,在检测活细胞酶活性动态变化方面有着无可比拟的优势。通过对细胞施予不同的处理因素可检测细胞内相应的酶被激活或灭活的动态变化过程。有的酶荧光探针是自身就可发出荧光、有的是与酶结合后发出荧光、有的则是被酶分解后发出荧
硝基呋喃类检测—酶联免疫法
硝基呋喃简介: 硝基呋喃类(Nitrofurans)抗菌剂是一种广效性抗生素,因价格较低廉且疗效佳,广泛用于畜禽及水产养殖鱼类,用以治疗由大肠杆菌或沙门式杆菌所引起之肠炎,养殖鱼之疥疮、赤鳍病、溃疡病等,于饲料中添加或养殖药浴使用。 硝基呋喃类抗菌剂常见有以下四种药物———呋喃唑酮
PCRELISA端粒酶检测法
端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失)中起重要作用。由于DNA聚合酶不能复
PCRELISA端粒酶检测法
端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失)中起重要作用。由于DNA聚合酶不能复
简述酶联免疫法的检测步骤
ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性
PCRELISA端粒酶检测法
端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失)中起重要作用。 由于DNA聚合酶不
硝基呋喃类检测—酶联免疫法
硝基呋喃简介: 硝基呋喃类(Nitrofurans)抗菌剂是一种广效性抗生素,因价格较低廉且疗效佳,广泛用于畜禽及水产养殖鱼类,用以治疗由大肠杆菌或沙门式杆菌所引起之肠炎,养殖鱼之疥疮、赤鳍病、溃疡病等,于饲料中添加或养殖药浴使用。硝基呋喃类抗菌剂常见有以下四种药物———呋喃唑酮、呋喃它酮、呋
大鼠淀粉酶(Amylase)ELISA检测法
大鼠淀粉酶(Amylase)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和尿液生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Amylase 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 Amylase与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠Amylase,形成免疫复合物连接在板上,辣根
酶联法检测人类免疫缺陷病毒
[测定方法] ELISA法 [方法学原理] 在微孔板上预包被高纯度基因重组HIV(1型十Ⅱ型),与样品中抗HIV抗体反应,同时加入HRP标记HIV(1型+Ⅱ型)抗原。然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否。 [标本准备] 静脉抽血2ml,不
染料法和探针法PCR检测有什么区别
简单来说,染料法是相对定量,有参比基团;探针法是绝对定量,有标准曲线进行对比。很多在做pcr检测时会选择盒子,比较盒子的好坏,例如BIODAI,ABI,罗氏等,染料法不仅要看CT 值,还要看溶解曲线的。
杂交探针的检测实验
1. 将载玻片以胶带固定于硬纸板或废胶片上。2. 将Du Pont Cronex 成像胶片(MRF 34 Clear) 轻压在玻片上4℃曝光。3. 当用这种胶片时,应注意以胶片的胶乳面正对样品。
杂交探针的检测实验
实验步骤 1. 暗室中,以42~45℃水浴,温育盛有4盎司(113.3 g)Kodak NTB-2放射自显影胶乳瓶30 min。同时,在500 ml 三角瓶中预热等体积的水至相同温度。 2. 胶乳熔化后,缓慢沿三角瓶壁(以一角度)倒入瓶中
荧光法检测种子实验
植物种子中经常存在着许多能够在紫外线照射下产生荧光的物质,如某些黄酮类、香豆、素类、酚类物质等,在种子衰老过程中,这些荧光物质的结构和成分往往发生变化,因而荧光的颜色也相应改变
用循环测序法检测突变实验
实验材料血液或者其他来自待测个体的 DNA 材料试剂、试剂盒乙酸钠异丙醇TE 缓冲液分子质量标记物寡聚核苷酸测序引物多聚核苷酸激酶反应缓冲液多聚核苷酸激酶双脱氧核苷酸Taq DNA 聚合酶10 X 循环测序反应缓冲液矿物油终止液仪器、耗材热循环仪和管子实验步骤展开
加热乙酸法检测尿蛋白实验
实验方法原理加热可使蛋白质变性凝固,加酸可使蛋白质接近等电点,促使蛋白质沉淀.此外,加酸还可以溶解碱性盐类沉淀.实验材料清晰尿试剂、试剂盒稀乙酸液饱和氨化钢花仪器、耗材试管酒精灯实验步骤实验试剂:①、稀乙酸液:取冰乙酸5ml加水至100ml②、饱和氨化钢花实验方法:1、取约10ml新鲜清晰尿于一耐热
气流法检测植物呼吸速率实验
实验方法原理:气流法测定植物呼吸速率的原理,是使不含CO2的稳定气流通过装有植物材料呼吸室,将植物呼吸释放出来的CO2带入CO2吸收瓶,被氢氧化钡定量吸收,生成碳酸钡白色沉淀,然后用标准草酸滴定剩余的氢氧化钡。根据实验前后二次测定草酸用量之差值,即可求出植物样品释放的CO2量,据此即可求出植物呼吸速
荧光法检测种子实验
实验方法原理:植物种子中经常存在着许多能够在紫外线照射下产生荧光的物质,如某些黄酮类、香豆、素类、酚类物质等,在种子衰老过程中,这些荧光物质的结构和成分往往发生变化,因而荧光的颜色也相应改变;有些种子在衰老死亡时,荧光物质的性质虽未改变,但由于生活力衰退或已死亡的细胞原生质透性增大,浸种时,种子中的
气流法检测植物呼吸速率实验
实验方法原理 气流法测定植物呼吸速率的原理,是使不含CO2的稳定气流通过装有植物材料呼吸室,将植物呼吸释放出来的CO2带入CO2吸收瓶,被氢氧化钡定量吸收,生成碳酸钡白色沉淀,然后用标准草酸滴定剩余的氢氧化钡。根据实验前后二次测定草酸用量之差值,即可求出植物样品释放的CO2量,据此即可求出植物呼吸速
加热乙酸法检测尿蛋白实验
实验方法原理 加热可使蛋白质变性凝固,加酸可使蛋白质接近等电点,促使蛋白质沉淀.此外,加酸还可以溶解碱性盐类沉淀.实验材料 清晰尿试剂、试剂盒 稀乙酸液饱和氨化钢花仪器、耗材 试管酒精灯实验步骤 实验试剂:①、稀乙酸液:取冰乙酸5ml加水至100ml②、饱和氨化钢花实验方法:1、取约10ml新鲜清晰
痘苗DNA检测实验——Southern-杂交法
实验方法原理以前,用 HindIII 限制性内切核酸酶消化鉴定痕苗病毒 DNA。大部分的外源基因插入重组病毒的 TK 基因中,TK 基因位于 HindIII 5.1 kb 的 J 片段上。这样在重组病毒中,如果插入片段上没有 HindIII 内切酶位点,则J片段就会增大。如果缺乏 HindIII 5
细胞凋亡检测实验——DNA-ladder法
实验方法原理发生细胞凋亡时,内源性核酸酶被激活,染色体DNA链在核小体之间被切割,形成180~200个碱基或其整数倍的DNA片段,将这些DNA片段抽提出来进行电泳,可得到DNA梯状条带(DNA ladder)。 实验材料凋亡细胞试剂、试剂盒蛋白酶K醋酸钾白细胞裂解液Tris-HClNaClEDTAS
荧光法检测种子实验
实验方法原理植物种子中经常存在着许多能够在紫外线照射下产生荧光的物质,如某些黄酮类、香豆、素类、酚类物质等,在种子衰老过程中,这些荧光物质的结构和成分往往发生变化,因而荧光的颜色也相应改变;有些种子在衰老死亡时,荧光物质的性质虽未改变,但由于生活力衰退或已死亡的细胞原生质透性增大,浸种时,种子中的荧
表达蛋白检测实验_点印迹法
实验方法原理本方案用DNA点迹杂交检测噬斑以鉴定重组病毒。像点迹杂交一样,将感染细胞裂解物印迹在硝酸纤维素膜上(可参考「痘苗DNA检测实验」中「斑点杂交法」)。用可以识别外源基因表达蛋白的抗体与膜一起孵育,用125I 标记的蛋白 A 检测结合的抗体,还可应用化学发光检测系统,如 Amersham E
气流法检测植物呼吸速率实验
实验方法原理气流法测定植物呼吸速率的原理,是使不含CO2的稳定气流通过装有植物材料呼吸室,将植物呼吸释放出来的CO2带入CO2吸收瓶,被氢氧化钡定量吸收,生成碳酸钡白色沉淀,然后用标准草酸滴定剩余的氢氧化钡。根据实验前后二次测定草酸用量之差值,即可求出植物样品释放的CO2量,据此即可求出植物呼吸速率