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实验步骤 材料靶抗原：表达于细胞的抗原，或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基：仅用于细胞接种弗 氏 完 全 佐 剂（ complete Freunds adjuvant， CFA)， Sigma 公司实验动物：无 病 原 体 大 鼠 、小 鼠（推 荐 使 用 BALB/c小 鼠）或 仓 鼠（推荐使用Cytogen研究所的美洲仓鼠）弗 氏 不 完 全 佐 剂（ incomplete Freunds adjuvant， IFA)， Sigma 公 司 ，可选用1〜2 ml玻 璃 注 射 器（有 Luer-Lok接头，已消毒）三通管IOOml烧杯20 G 注射针头，已消毒1.将2 X 106〜5 X 107 个 细 胞 或 1〜50 ug 蛋白质或多肽置于生理盐水中制备成抗原。如果免疫原为细胞，在接种前将细胞于无血清培养基中清洗3 次 。在 融 合 实 验（见基本 方 案 2 ) 前 至 少 3d 准备好已免疫接种的......阅读全文
实验步骤基 本 方 案 1 未 致 敏 T 淋巴细胞的活化材 料备选方案1 用抗体激活未致敏的T 细胞这种方法适用于当抗C D 3/T C R 复合物抗体不能有效结合小鼠辅助细胞上的F c 受体 ，或其可溶形式不能有效活化T 细胞时。值得注 意 的 是 ，在 某 种 抗 体（如 抗 G 7、Thy-
实验步骤基本方案 1 NK T 细胞的鉴定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培养基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可选）流 式 细 胞 缓 冲 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
实验步骤 基本方案 1 诱导小鼠急性弓形虫 T. gondii感染材 料T. gondii弓形虫 M E 4 9 株 慢 性 感 染（1 个月以上）的 雌 性 小 鼠（C 57B L /6、 C B A /Ca 或 Swiss-Webster) (见辅助方案 2)。7 0 % (v/V )
抗大鼠ic链单克隆抗体交联琼脂糖凝胶亲和层析实验步骤 一般情况下，单 克 隆 抗 体（尤其是大鼠源性）不能用 蛋 白A 或 蛋 白 G 交联琼脂糖凝胶层析纯化，在此情况下，可使用抗大鼠Ig 轻链单克隆抗体交联琼脂糖凝胶层析柱来结合组织培养上清或腹水中的大鼠单克隆抗体，然后用逐步降低洗脱液p
3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死，在无菌操作下取组织，放 在 4°C无血清培养基中，最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得
3 免疫策略不同实验室使用的免疫策略是不同的，很多免疫策略都同样有效。 目的是扩大宿主体内抗原反应性 B 细胞的数量。体内每次接触到蛋白质抗原，都会增加抗原反应性B 细胞的数量。在对抗原的再次应答中，产生的抗体量会增加，总的免疫球蛋白类别会从以IgM 为主转变为以IgG 为主，特异性抗体