农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验7
转化效率的计算仪器、耗材Southern 杂交分析实验步骤1. 转化效率通常用百分比表示。计算方法为：确定的独立转基因单株总数 x100 /侵染的总幼胚数。2. 如果一个胚得到一株以上的转基因植株，这视为一个独立转化事件，来自同一转化事件的其他所有单株视为姐妹株。这些姐妹株有可能来源于不同的细胞，属于独立转化事件，但只有通过 Southern 杂交分析才能加以确定。所以此法有可能低估了某些转基因实验的转化效率。......阅读全文
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验7
转化效率的计算仪器、耗材Southern 杂交分析实验步骤1. 转化效率通常用百分比表示。计算方法为：确定的独立转基因单株总数 x100 /侵染的总幼胚数。2. 如果一个胚得到一株以上的转基因植株，这视为一个独立转化事件，来自同一转化事件的其他所有单株视为姐妹株。这些姐妹株有可能来源于不同的细胞，属
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验
实验材料 农杆菌细胞试剂、试剂盒 根癌农杆菌甘油原液抗生素仪器、耗材 MG L 液体培养基实验步骤 1. 从根癌农杆菌甘油原液中吸取 400 μl 加入含 10 ml MG/L 液体培养基并添加相应抗生素的 50 ml 无菌管中，28℃、250 r/min 摇床振荡培养过夜（17~20 h) 至 O
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验
实验材料农杆菌细胞 试剂、试剂盒根癌农杆菌甘油原液 抗生
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验——幼胚的接种
实验材料幼胚盾片试剂、试剂盒Silwet农杆菌菌液仪器、耗材培养皿实验步骤1. 幼胚盾片接种于侵染培养基后，从摇床上取出一管菌液（见注 9），向管中加入 60 μl 1%（V/V）的 Silwet，至终浓度为 0.015%。2. 完成 3.2 节的步骤 3 后，立即将离心管中所有的农杆菌菌液（4
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验1
根癌农杆菌菌液的准备实验材料农杆菌细胞试剂、试剂盒根癌农杆菌甘油原液抗生素仪器、耗材MG L 液体培养基实验步骤1. 从根癌农杆菌甘油原液中吸取 400 μl 加入含 10 ml MG/L 液体培养基并添加相应抗生素的 50 ml 无菌管中，28℃、250 r/min 摇床振荡培养过夜（17~20
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验4
胚性愈伤的诱导和再生实验材料胚仪器、耗材诱导培养基再生培养基实验步骤1. 共培养 2~3 天后，将胚转移至诱导培养基以诱导胚性愈伤（表 5.1，诱导培养基 a 适用于面包小麦，诱导培养基 b 适用于硬粒小麦）。记录下转移的胚的个数以便计算转化效率，转移时确保胚的盾片仍朝上。22~23℃ 避光培养。2
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验2
根癌农杆菌接种外植体的准备（见注 6)实验材料面包小麦硬粒小麦试剂、试剂盒乙醇仪器、耗材层流罩超净台实验步骤1. 面包小麦和硬粒小麦开花后 12~16 天剪下幼穗，将种子幼体用 70% ( V/V）的乙醇浸泡 1 min，再换用 10% 乙醇（V/V）轻轻晃动 10 min 进行表面消毒，最后用足量
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验6
转基因植株的鉴定及种子的收获实验材料再生苗仪器、耗材Magenta 盒实验步骤1. 经第二轮选择后，挑出根茎生长良好的再生苗（见注 16 ) 移栽于土壤中。首先，将各株再生苗移入 8 cm2 的盆钵里生长 1~2 周，使它们能够逐渐适应温室条件。当小苗足够大时，再取叶片提取 DNA 用于 PCR 和
农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验——选择
实验材料愈伤组织仪器、耗材选择培养基Magenta 培养盒实验步骤1. 将培养物转移至第一轮选择培养基中（表 5.1，选择培养基 1 ) ( 见注 15)。一些愈伤组织在转移时会自然散开，尽管这无关紧要，但放置时应将散开的愈伤块彼此靠近，以标记它们是来自同一幼胚。2. 培养 3 或 4 周后，筛选出
植物原位接种介导的小麦高效农杆菌转化方法实验
试剂、试剂盒：缓释肥 乙酰丁香酮 仪器、耗材：盆钵
植物原位接种介导的小麦高效农杆菌转化方法实验
试剂、试剂盒缓释肥乙酰丁香酮仪器、耗材盆钵植物支撑器LB 培养基通用型试管YEP 固体培养基TSIM 培养基实验步骤一、材料1. 母体植株的生长( 1 ) 将母体植株种植于 12 , 7F ( 直径为 13 cm) 的盆钵中，每盆 4 株。( 2 ) 用 Levingtons M2 培养土，并施用
植物原位接种介导的小麦高效农杆菌转化方法实验（二）
5. 转基因幼苗的生长需要用到以下材料：( 1 ) Jiffy 7 泥炭颗粒（Jiffy 产品， Norway)( 2 ) 播种托盘及相应的 24 孔穴盘（可任选供应商）( 3 ) 适合播种盘大小的培养箱（可任选供应商）6. 转基因植株的生长需要用到以下材料：( 1 ) 12F（直径 12 cm）盆
植物原位接种介导的小麦高效农杆菌转化方法实验（一）
试剂、试剂盒 缓释肥乙酰丁香酮仪器、耗材 盆钵植物支撑器LB 培养基通用型试管YEP 固体培养基TSIM 培养基实验步骤 一、材料1. 母体植株的生长( 1 ) 将母体植株种植于 12 , 7F ( 直径为 13 cm) 的盆钵中，每盆 4 株。( 2 ) 用 Levingtons M2 培养土，
农杆菌介导的大麦转化方法实验
实验材料植物凝胶pBract 质粒pSoup 质粒试剂、试剂盒利福平卡那霉素仪器、耗材MG L 培养基实验步骤1. 组织培养基的准备提前准备好所需浓度 2 倍的植物凝胶，高压灭菌（见注 3 ) 。所有的组织培养基都要过滤灭菌，因此除了无菌的储备液，其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀，调到合适的
农杆菌介导的大麦转化方法实验
实验材料 植物凝胶pBract 质粒pSoup 质粒试剂、试剂盒 利福平卡那霉素仪器、耗材 MG L 培养基实验步骤 1. 组织培养基的准备提前准备好所需浓度 2 倍的植物凝胶，高压灭菌（见注 3 ) 。所有的组织培养基都要过滤灭菌，因此除了无菌的储备液，其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀
农杆菌介导的大麦转化方法实验
实验材料：植物凝胶 pBract 质粒
农杆菌介导转化拟南芥
实验概要1. 学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理。2. 掌握农杆菌介导转化拟南芥 的实验方法，了解拟南芥的生理特点及在基因工程实验中应用实验原理拟南芥（Arabidopsis thaliana）是一种十字花科植物，二年生草本，高7～40厘米，花期3～5月。广泛用于植物遗传学、发育生物学和
农杆菌介导水稻转化
实验概要本实验介绍了农杆菌介导的水稻转化。主要试剂GUS染色液：100 mmol/L NaPO4 (pH7.0)；0.1% Triton X-100；10 mmol/L EDTA；0.5 mmol/L亚铁氰化钾头抱霉素，乙醇，次氯酸钠溶液主要设备高速离心机，培养箱，人工气候室实验材料水稻种子实验步骤
农杆菌介导的植物遗传转化
农杆菌介导的植物遗传转化 【目的】：学习和掌握共培养过程关键技术环节及转基因植株的筛选。 【要求】：以烟草叶片为材料，与对数生长期的带有外源基因的农杆菌共培养，遗传转化烟草叶片，筛选抗性再生植株。 【内容】：1、烟草无菌苗的准备 2、带有外源基因农杆菌的培养
农杆菌介导的植物遗传转化
农杆菌介导的植物 遗传转化 【目的】：学习和掌握共培养过程关键技术环节及转基因植株的筛选。 【要求】：以烟草叶片为材料，与对数生长期的带有外源基因的农杆菌共培养，遗传转化烟草叶片，筛选抗性再生植株。 【内容】：1、烟草无菌苗的准备 2、带有外源基因农杆菌的培养 3、烟草叶片与对
农杆菌介导的植物遗传转化
实验概要以烟草叶片为材料，与对数生长期的带有外源基因的农杆菌共培养，遗传转化烟草叶片，筛选抗性再生植株。掌握共培养过程关键技术环节及转基因植株的筛选。主要试剂70%乙醇0.1% HgCl2无菌水卡那霉素(kan)羧苄青霉素(Cb)培养基：LB培养基100ml；MS 盐溶液(pH 7.0)100ml，
农杆菌介导的遗传转化程序
实验概要农杆菌侵染实验实验步骤(1) 农杆菌菌液的制备 将农杆菌接种于附加50mg/L Km、50mg/L Sm、50mg/L Rif的YEB固体培养基上，28℃暗培养，至长出单菌落。用接菌环挑取单菌落，接种在5mL含相应抗生素的YEB液体培养基中，于28℃，200r/min 培养过夜。待
根癌农杆菌介导的植物转化－叶盘转化法
一、原理以根癌农杆菌介导的遗传转化是目前最有效的途径之一。根癌农杆菌对植物释放的化学物质产生趋化反应，向植物受伤组织集中。经共培养后，受伤部位的化学诱导物透过农杆菌的细胞膜使Ti质粒上的Vir基因活化。Vir基因产物使Ti质粒上的T－DNA进入植物细胞，并整合到植物核基因组中。插入在T－DNA左右边
转基因技术农杆菌介导转化方法的介绍
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。 因此，农杆菌是一
农杆菌的转化
实验概要本实验介绍了农杆菌感受态细胞的制备及转化方法。主要试剂YEP固体培养基，含有相应抗生素的YEP培养基，0.15mM NaCl，20mM CaC12，液氮，选择平板(Rif 100ug/mL加Gm 50ug/mL加Kan 50ug/mL )主要设备培养箱，摇床，离心机，-80℃冰箱实验步骤1.
农杆菌介导法简介
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位 [1] ，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆
农杆菌介导法概述
农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，农杆菌的介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用。此外，生物技术学家还可以通过发根农杆菌转化，在液体培养基中培养高密度的根，作为一种在转基因植物中获得大量蛋白质的方法。 农杆菌Ti质粒的T-DNA可高效率地整合到植物受体细胞的染色体上并得到
农杆菌介导法的过程介绍
根癌农杆菌的Ti质粒上有一段转移DNA（T-DNA），具有向植物细胞传递外源基因的能力，而细菌本身并不进入受体细胞。农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应，主要包括：①受伤的植物细胞为修复创伤部位，释放一些糖类、酚类等信号分子。 ②在信号分子的诱导下，农杆菌向受伤组织集中，并吸附在细胞表面。
农杆菌转化法的原理
选择一种特制的空质粒载体（如PBI121质粒载体），其上要求含有T-DNA边界序列（此处可参见词条双元表达载体系统），在序列之间含有复制原点、抗性基因、GUS报告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位点（以上这些构成了一个T-DNA区）。先通过双酶切反应酶切空质粒载体和目的基因，再通过酶连反应连
关于农杆菌介导法的特点介绍
转基因技术的飞速发展为生物定向改良和分子育种提供了一种较佳的方法，并使其成为基因工程和育种的最有效途径，应用较广泛的转基因技术有农杆菌介导法、花粉通道法、显微注射法、基因枪法、离子束介导法等等，其中农杆菌介导法以其费用低、拷贝数低、重复性好、基因沉默现象少、转育周期短及能转化较大片段等独特优点而