利用双杂交系统相互作用阱／筛选特定蛋白肽适配体实验
实验材料DNA酵母株试剂、试剂盒PCR 引物聚乙二醇甘油存储液Tris·ClX-gal 平板完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板仪器、耗材30℃ 和 42℃ 培养箱或水浴实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 使用标准的亚克隆技术，将编码诱饵蛋白的 DNA 插入 PEG202 的多克隆位点构建诱馆质粒（pBait）。2. 按照乙酸锂酵母转化法用 pBait 和 pSH18-34 （lacZ 报道载体）转化相互作用阱筛选酵母株（EGY48）。3. 将转化株涂布到 Glu／CM-His、-Ura 平板上，放置于 30℃ 培养箱中。4. 进行 lacZacZ 激活和亮氨酸需求平板检测以确保诱饵蛋白不会自己激活报道基因。5. 用阻遏测试法确定诱饵蛋白的合成。6. 将转化的 EGY48（步骤 3）接种到 20 ml Glu／CM-His、-Ura 液体培养基，于 30℃ 振荡过夜。7. 测量 OD600 ......阅读全文
利用双杂交系统相互作用阱／筛选特定蛋白肽适配体实验
实验材料DNA酵母株试剂、试剂盒PCR 引物聚乙二醇甘油存储液Tris·ClX-gal 平板完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板仪器、耗材30℃ 和 42℃ 培养箱或水浴实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 使用标准的亚克隆技术，将编码诱饵蛋白的 DNA 插入 PEG20
利用双杂交系统相互作用阱／筛选特定蛋白的肽适配体...
利用双杂交系统相互作用阱／筛选特定蛋白的肽适配体实验实验方法原理 实验材料 DNA酵母株试剂、试剂盒 PCR 引物聚乙二醇甘油存储液Tris·ClX-gal 平板完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板仪器、耗材 30℃ 和 42℃ 培养箱或水浴实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其
构建硫氧还蛋白肽适配体组合库实验
实验材料E.coli MC 1061 （Bio－Rad）硫氧还蛋白表达载体质粒DNA 洗脱液试剂、试剂盒DNA 聚合酶DNA 连接酶小牛肠碱性磷酸酶（CIP）限制性内切核酸酶反应缓冲液4dNTPTris·Cl培养基仪器、耗材QIAquick 胶回收试剂盒质粒制备试剂盒DNA 合成仪16℃ 和 95℃
构建硫氧还蛋白肽适配体组合库实验
实验方法原理 实验材料 E.coli MC 1061 （Bio－Rad）硫氧还蛋白表达载体质粒DNA 洗脱液试剂、试剂盒 DNA 聚合酶DNA 连接酶小牛肠碱性磷酸酶（CIP）限制性内切核酸酶反应缓冲液 4dNTPTris·Cl培养基仪器、耗材 QIAquick 胶回收试剂盒质粒制备试剂盒DNA 合
利用双杂交差异互作筛选以分离功能突变体实验
大多数生物学过程是以蛋白质间相互作用的方式进行的，并且已经发展出许多生化分析方法来探查这些相互作用。双杂交系统是一种以酵母为基础的遗传学分析技术，它提供了一种简便而灵敏的方法用于检测两个蛋白质间潜在的相互作用。它是建立在真核生物某些转录激活因子是调节子的基础上。实验材料酵母菌株Y187Y190质粒p
用肽适配体正向分析细胞过程实验2
辅助方案 肽适配体靶点的鉴定实验方法原理通过配对相互作用或捕获法鉴定的肽适配体的假定靶点应当通过遗传学测试进行验证，例如：1. 用免疫沉淀法确定体内适配体的相互作用；2. 通过上位（显）性分析以确定适配体在与靶蛋白相同的区域发挥功能；3. 比较由靶蛋白删除或过表达引起的表型与由适配体造成的表型。实验
酵母双杂交原理（蛋白相互作用）
概述酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域（DNA-binding domain）和转录激活结构域（transcription-activating domain）。前者
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
试剂、试剂盒 ATP结合缓冲液变性溶液二硫苏糖醇EDTA乙醇激酶 连接酶缓冲液酚氯仿筛选缓冲液SDS醋酸钠TET4 噬菌体 DNA 连接酶T4 噬菌体多核苷酸激酶合成的寡核苷酸[a-32P]ATP非变性聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 烤盘结晶皿平头镊子装有防水黑墨水注射器硝酸纤维素滤膜Sephadex G
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
试剂、试剂盒 ATP 结合缓冲液 变性溶液 二硫苏糖醇 EDTA 乙醇激酶 连接酶缓冲液 酚 氯
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
可利用合成双链寡核苷酸筛选构建于λ噬菌体的 cDNA 表达文库，以鉴定与特异 DNA 结合蛋白质相对应的克隆（Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒ATP结合缓冲液变性溶
酵母双杂交系统的实验步骤
酵母双杂交系统的实验步骤 1. 将报告基因p8op-LacZ转化酵母EGY48菌株，用培养基SD/-Ura筛选。2. 同时构建DNA文库，并纯化足够的质粒以转化酵母细胞。3. 构建DNA-BD/靶蛋白质粒pLexA-X，作为钓饵（bait）。4. 将上述钓饵质粒pLexA-X转化EGY48（p8op
酵母双杂交系统逆双杂交系统的介绍
在研究蛋白质的结构功能特点、作用方式过程中，有时还要通过突变、加抑制剂等手段破坏蛋白质间的相互作用。针对实际工作中的这种需要，Vidal等人发展了所谓的逆双杂交系统（reverse two-hybrid system）。这项技术的关键是报道基因URA3的引入。URA3基因在这里起到了反选择的作用
配体配体相互作用特点
中文名称配体-配体相互作用英文名称ligand-ligand interaction定 义泛指不同配体之间的相互作用。如受体上有多个配体结合位点时，一个配体与受体的结合可能影响另一个配体与受体的结合。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），信号转导（二级学科）
用肽适配体正向分析细胞过程实验
实验方法原理 实验材料 用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库试剂、试剂盒 完全极限（CM） 缺失成分液体培养基和平板仪器、耗材 30℃ 培养箱实验步骤 1. 用高效乙酸锂转化法将 50～100 ug 肽适配体库（在 pJM-2 或 pJM-3 中）转化酵母筛选株（106～107 转化株）。将转化株涂布到
肽适配体的亲和力成熟实验
实验材料质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒Taq 聚合酶10×缓冲液引物dATPdGTPdCTPdTTPMgCl2MnCl2完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器30℃ 培养箱实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 制备
肽适配体的亲和力成熟实验
实验方法原理 实验材料 质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒 Taq 聚合酶10×缓冲液引物 dATPdGTP dCTPdTTPMgCl2 MnCl2完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材 PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器 30℃ 培养箱实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「
适配体的筛选方法
适配体靶标范围广，靶标的大小与可溶性均不同，因此应用 SELEX 技术筛选核酸适配体可以采用不同的具体操作方法。离心沉淀法常用于针对细胞、细菌与病毒的适配体筛选，固相吸附与洗脱技术可以用于可溶性小分子的适配体筛选。适配体筛选的具体方法包括以下几个方面。基于不同固定介质的筛选方法。硝酸纤维素膜过滤法是
适配体的筛选方法
适配体靶标范围广，靶标的大小与可溶性均不同，因此应用 SELEX 技术筛选核酸适配体可以采用不同的具体操作方法。离心沉淀法常用于针对细胞、细菌与病毒的适配体筛选，固相吸附与洗脱技术可以用于可溶性小分子的适配体筛选。适配体筛选的具体方法包括以下几个方面。基于不同固定介质的筛选方法。硝酸纤维素膜过滤法是
适配体的筛选方法
适配体靶标范围广，靶标的大小与可溶性均不同，因此应用 SELEX 技术筛选核酸适配体可以采用不同的具体操作方法。离心沉淀法常用于针对细胞、细菌与病毒的适配体筛选，固相吸附与洗脱技术可以用于可溶性小分子的适配体筛选。适配体筛选的具体方法包括以下几个方面。基于不同固定介质的筛选方法。硝酸纤维素膜过滤法是
配体配体相互作用的功能
中文名称配体-配体相互作用英文名称ligand-ligand interaction定 义泛指不同配体之间的相互作用。如受体上有多个配体结合位点时，一个配体与受体的结合可能影响另一个配体与受体的结合。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），信号转导（二级学科）
酵母双杂交系统
· Yeast Two-Hybrid System (Finley Lab)This is one of the most comprehensive and detailed guide to yeast two-hybrid system technique with intro
核酸适配体筛选实验的难点在哪里
首先它确实是比较难，但是SELEX实验的难和其它实验的难是不太一样的。像做单分子成像，或者某些超灵敏的检测类的实验，很多时候受制于我们的客观条件，受制我们所拥有的仪器设备。可是，核酸适配体的筛选与这些实验不同，因为SELEX实验它所用的仪器设备条件其实都非常简单，几乎所有的分子生物学实验室都具备。那
核酸适配体筛选实验的难点在哪里
首先它确实是比较难，但是SELEX实验的难和其它实验的难是不太一样的。像做单分子成像，或者某些超灵敏的检测类的实验，很多时候受制于我们的客观条件，受制我们所拥有的仪器设备。可是，核酸适配体的筛选与这些实验不同，因为SELEX实验它所用的仪器设备条件其实都非常简单，几乎所有的分子生物学实验室都具备。那
利用CellSELEX技术识别特定肿瘤细胞的核酸适配体的成果
发现新的生物标志物和发展新的分子探针，在分子水平上探索生命过程和疾病发生发展机制是现代生物医学领域前沿研究方向之一。 在国家自然科学基金委、科技部和中国科学院的支持下，中科院化学研究所活体分析化学重点实验室上官棣华课题组研究人员长期致力于生物标志物和分子探针的研究。近年来，他们利用Cell-S
双杂交和其他双成分系统实验
实验材料 载体和酵母菌 试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 SDS 凝胶上样缓冲液 SDS 聚丙烯酰胺凝胶
用肽适配体正向分析细胞过程实验1
实验材料用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库试剂、试剂盒完全极限（CM） 缺失成分液体培养基和平板仪器、耗材30℃ 培养箱实验步骤1. 用高效乙酸锂转化法将 50～100 ug 肽适配体库（在 pJM-2 或 pJM-3 中）转化酵母筛选株（106～107 转化株）。将转化株涂布到 10 cm Glu/
利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验
实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA-BP 的研究中。
利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验
实验方法原理大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料质粒菌株试剂、试剂盒X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠溶液β
利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验
实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料 质粒菌株试剂、试剂盒 X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠
概述适配体的筛选方法
适配体靶标范围广，靶标的大小与可溶性均不同，因此应用 SELEX 技术筛选核酸适配体可以采用不同的具体操作方法。离心沉淀法常用于针对细胞、细菌与病毒的适配体筛选，固相吸附与洗脱技术可以用于可溶性小分子的适配体筛选。适配体筛选的具体方法包括以下几个方面。 基于不同固定介质的筛选方法。硝酸纤维素膜