用Percoll不连续密度梯度法分离小鼠精原细胞的方法详解
精原细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、运动、衰老、死亡等项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原细胞异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞，用于体外培养。资料表明，从成年啮齿类的睾丸分离粗线期及其后各发育阶段生精细胞的工作已取得可喜成绩，所获细胞的纯度已超过90%，产量达到107个［1］。但可用于体外培养的精原细胞的分离却一直进展不大。有些报道虽然纯度很高，产量却很低；另一些报道产量高但纯度低。1977年，Bellve等［2］报道从生后8d小鼠睾丸中获得了纯度91%的A型精原细胞，产量达2×107个。但使用的小鼠却多达60余只，耗费了大量的实验动物。我们的前期工作已表明，小鼠生后7～8d，其生精上皮内基本只有支持细胞和A型精原细胞，其他各级生精细胞尚未发育形成［3］。在体外，支持细胞总是先生殖细胞而贴壁。因此，本实验选用生后7～......阅读全文
用Percoll不连续密度梯度法分离小鼠精原细胞的方法详解
精原细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、运动、衰老、死亡等项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原细胞异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞，用于体外培养。资料表明，从成年啮齿类的睾丸分离粗线期及其后
用Percoll不连续密度梯度法分离小鼠精原细胞的方法介绍
目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布于位于27
小鼠精原细胞的分离和纯化
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布
小鼠精原细胞的分离和纯化
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布
小鼠精原细胞的分离和纯化
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7～8d小鼠的生殖细胞悬液；用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%；平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞；精原细胞主要分布
Percoll非连续性密度梯度离心法单核细胞的分离实验
基本原理：本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。试剂与器材·外周血单个核细胞·PBS 1×和PBS 10×（无Ca2+、Mg2+），含0.5mM EDTA·胎牛血清（56℃，30分钟加热灭
小鼠精原细胞的分离和纯化
实验概要精原细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、运动、衰老、死亡等项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原细胞异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞，用于体外培养。资料表明，从成年啮齿类的睾丸分离粗线
不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞
(一) 原理 Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(
染色体分离实验——Percoll梯度法
实验材料染色质试剂、试剂盒精胺精咪Percoll 溶液仪器、耗材聚碳酸酯离心管实验步骤1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液，匀浆分离得到的染色质。Percoll 溶液：
线粒体分离实验—用蔗糖密度梯度法纯化线粒体
实验材料线粒体悬液试剂、试剂盒蔗糖溶液Tris-HClEDTA仪器、耗材Bockman SW28 号转头实验步骤1. 在用于 Bockman SW28 号转头（或与其等同的产品）的 Uitradear 离心管中，小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一层 15 ml 1.5 mol
单个核细胞的分离
实验概要外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验最常用的细胞，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。本实验介绍了两种单个核细胞的分离方法。实验原理PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密
单个核细胞的分离纯化
外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验最常用的细胞，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。1．原理PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的
用－CsCl，Percoll,－Nycodenz,－metrizamide作自形成密度梯度离心－二
四）碘盐自形成梯度：（ Nycodenz或 metrizamide） 这二种梯度材料在固定角式转头或垂直管转头，近垂直转头离心过程中会用较短的时间就可以自形成密度。和重金属盐一样，离心力、转头种类、离心时间对自形成梯度的形状都有很大的影响。由于碘盐的粘性系数对温度很敏感，很小的温升也会因
用－CsCl，Percoll,－Nycodenz,－metrizamide作自形成密度梯度离心－三
表（三）metrizamide及其溶液的性质（20℃）浓度密度g/ml折射率粘性渗透率百分比浓度％（W/V）Molar00.0000.99821.33301.00100.1271.05121.34831.3107200.2531.10621.36461.6180300.3801.16121.3809
用－CsCl，Percoll,－Nycodenz,－metrizamide作自形成密度梯度离心－一
用 CsCl，Percoll, Nycodenz, metrizamide作自形成密度梯度离心一）概述：近年来用重金属盐（主要是 CsCl）分离生物大分子的平衡等密度离心；用 Percoll（由瑞典 pharmacia-Biosystems AB开发的胶体硅材料，即在硅颗粒外包覆 PVP塑料
Percoll细胞分离液的使用方法
实验概要掌握Percoll细胞分离液的使用方法。实验原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(
细胞分离纯化技术
Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞实验方法原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液，通过密度梯度液离心细胞，收集各梯度组分，用培养基稀释，培养细胞。 实验材料 细胞样品
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液，通过密度梯度液离心细胞，收集各梯度组分，用培养基稀释，培养细胞。 实验材料 细胞样品
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液，通过密度梯度液离心细胞，收集各梯度组分，用培养基稀释，培养细胞。实验材料 D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材 生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤 通过下述方法之一制备密度梯度液：(
密度梯度细胞分离法
实验方法原理制备密度梯度液，通过密度梯度液离心细胞，收集各梯度组分，用培养基稀释，培养细胞。实验材料细胞样品试剂、试剂盒D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤通过下述方法之一制备密
用高速固定角转头不连续蔗糖梯度分离细胞器
在例（十）中已介绍了用日立CR22G/21G离心机R18A转头，日立50ml锥底组织培养管分离质膜的方法。下面介绍用一般的圆底离心管（瓶），不连续（阶梯）蔗糖梯度，在高速离心机上分离质膜、内质网、溶酶体、线粒体、过氧化酶体的方法。设备：●主机Hitachi，CR21GⅡ（或21G）高速冷冻离心机●转
核细胞分离的原理及分层液法的分离步骤
单个核细胞PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的密度为1.076～1.090；血小板为1.030～1.035。因此，利用一种密度介于1.076～1.090之间、近于等渗的溶液(分层液)进行密度梯度离心，可使不同类别的血细胞按其相应密
密度梯度分离法分离单个核细胞（MNCs）
试剂和材料：1. 合适的培养基或冷冻液；2. PBSA；3. Ficoll-Hypague；4. 巴氏吸管；5. 50ml离心管；实验方法：1. 将脐血样品用PBSA按1：1比例稀释；2. 将15ml Ficoll-Hypague吸入50ml离心管；3. 将30mlPBSA稀释的脐血样品缓慢地加到F
Percoll梯度法染色实验
实验材料：染色质试剂、试剂盒：精胺、精咪、Percoll、溶液仪器、耗材：聚碳酸酯离心管实验步骤：1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液，匀浆分离得到的染色质。Perco
血细胞的分离方法1
血细胞由红细胞,白细胞,血小板等组成.实验中常用白细胞来做研究,如炎症渗出,细胞迁移,识别等都涉及到白细胞.白细胞又分为:粒细胞,淋巴细胞,单核细胞等.它们具有不同的功能.实验中常需要分离血细胞方能进行。这里主要论述人外周白细胞的分离，主要是中性粒细胞（Neutrophil），淋巴细胞（Lympho
外周血中嗜碱性粒细胞(BASO)分离方法
Percoll密度梯度离心分离法：1、Pcrcoll混悬液的配制：Percoll 90ml,HBSS 9ml, HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3),HCL(1mol/l)0.4ml 调节至PH7.42、制备Percoll密度梯度管密度 Percoll/HBSS(ml/ml)1.0
不连续Nycodenz梯度溶液中原代细胞溶酶体的分离
试剂和器材： 1.匀浆介质：0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；2.NycoprepTM Universal；3.磷酸缓冲液pH7.4（50mmol/L）4.NycoprepTM Universal稀释剂：6mmol/L乙二胺四
不连续Nycodenz梯度溶液中原代细胞溶酶体的分离
不连续Nycodenz梯度溶液中原代细胞溶酶体的分离试剂和器材：1.匀浆介质：0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；2.NycoprepTM Universal；3.磷酸缓冲液pH7.4（50mmol/L）4.NycoprepTM
原代肺泡上皮细胞的体外分离培养
1、完全无血液残留肺脏组织：2、消化肺组织：常用细胞消化酶：胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。经支气管将酶灌注到完整的肺中消化，或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。3、分离纯化细胞：原代肺泡上皮细胞的分离纯化主要方法：（1）密度梯度离心法：密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同