DNAMarker产品选择指南
1.Marker选择标准 (1)应选择在目标片段大小附近ladder较密的marker,这样对目标片段大小的估计较准确。 (2)所选marker应能清楚反映目标片段的大小,且次要片段大小也能反映出来。如作酶切鉴定时,目的片段和切后载体片段最好能在同一个marker中反映出来,若二者不能兼顾,将前者作为主要考虑要素。2.常见问题分析Q:为什么marker条带非常模糊,无法辨别具体条带? A:出现上述情况,可能有以下几个原因:1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染;2. 电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后,离子浓度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果,建议经常更换电泳缓冲液;3. 电泳条件不合适。电泳时电压应不超过20V/cm,温度应低于30℃;4. marker上样量过多。请根据说明书选用合适上样量;5. 凝胶质量不好。建议使用质量较好的琼脂糖;此外,凝胶凝固......阅读全文
酵母DNA微量制备
实验概要本实验介绍了分别从40ml和5ml酵母培养液中制备酵母DNA的操作流程。实验步骤1. 酵母DNA微量制备(40ml) 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。 2) 将上述培养物移入螺盖离心管,用医用离心机或Sorvall SS-
DNA的重组连接
目的:了解T4DNA连接酶的几种生物学功能及用途;学习在T4DNA连接酶的作用下,载体与目的基因的几种不同的连接方式以及在标准的连接反应体系中,质粒载体和插入的外源DNA的比率关系和各自的用量;掌握用Pmd18-Tvector与PCR产物进行T-A克隆的机理及其应用。原理:外源DNA片段和线状质粒载
Genomic-DNA-Extraction--PureLink™
实验概要The PureLink™ Genomic DNA Purification Kit allows rapid and efficient purification of genomic DNA. The kit is designed to efficiently isolate g
DNA-Ladder的概念
DNA Ladder是指细胞凋亡时DNA在核小体间断裂 (DNA fragmentation ) 形成一些DNA片断, 经过提取和纯化后在凝胶电泳上产生n条带,由于这些DNA条带经染色并成像之后的整体类似于梯子上的一个个踩踏板。
自在DNA的定义
中文名称自在DNA英文名称selfish DNA定 义除能复制自身外,不具有其他功能的DNA片段。泛指间隔DNA及卫星DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
DNA的定量(二)
2. EB荧光分析法(1)琼脂糖凝胶的制备。(2)样品的准备。把待测DNA样品进行1:2连续稀释,并准备一份DNA标准液作对照。(3)上样。稀释样品与上样缓冲液按1:5混合均匀后上样。(4)电泳。用100V稳压电泳至溴酚蓝指示剂迁移到凝胶的3/4处停止电泳。(5)取出凝胶,入EB荧光染液中作用20m
DNA酶的简介
Skaggs 化学生物学院的 Gerald F. Joyce 教授领导的研究组,利用体外演化的方法将RNA 酶转化成了DNA酶,这将有助于了解有关生命的一个最基本问题,即生命如何由RNA世界演化为今天的以DNA和蛋白质为基础的细胞形式。 新研究显示RNA酶要转化成具有同等功能的为 DNA酶,仅
Yeast-Genomic-DNA-Prep
Grow 10ml YPD cultures o/n. Figure out cell density; inoculate 30 ml YPD and grow o/n so that cell density is approximately 2 x 108cells/ml the next m
质粒DNA提取实验
碱解法SDS碱裂解法(试剂盒提取)实验方法原理碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质,通过离心除去。实验材料大肠杆菌
弯曲DNA的定义
中文名称弯曲DNA英文名称bent DNA定 义由于某些蛋白质的结合引起的DNA构象的变化而形成的一种扭曲的DNA分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
质粒DNA提取实验
实验方法原理 碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质,通过离心除去。
闭环DNA的定义
闭环DNA(closed circular DNA)没有断口的双链环状DNA,亦称为超螺旋DNA (DNA supercoil)。
线粒体DNA的定义
线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。
什么是变性DNA?
中文名称变性DNA英文名称denatured DNA定 义由于物理(如过热)或化学(如加入尿素)等因素的影响,使之失去生物活性的DNA分子。不再具有致密的、双链的螺旋结构,而成为松散的和单链的结构。去除变性因素,DNA一般可以复性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
开环DNA的定义
如果质粒DNA两条链中有一条链发生一处或多处断裂,分子就能旋转而消除链的张力,形成松弛型的环状分子,称开环DNA(Open circular DNA, 简称 ocDNA)。
DNA测序仪定义
DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括sanger双脱氧链终止法和maxam-gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今 dna序列分析的主流。美国pe abi公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等dna测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多
细菌DNA提取方案
细菌DNA提取方案:革兰氏阴性菌,如E.coli,一般有三种可以选择的方法。一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板,连续画线,37摄氏度培养18-24小时。2、刮取1~2接种环菌苔加入150微升三蒸水中,混匀,100摄氏度煮沸10分钟。3、12000转/分钟 离心10分钟
DNA重组技术2
感受态细胞的制备(一)制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞 下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的,所制备的大肠杆菌DHl、DH5和MM249感受态细胞培养物能使每微克超螺旋DNA以≥5x108转化菌落的频率进行转化,其他大多数大肠杆菌菌株的最高转化率大约只有前述菌株的1/10-1/5。
Molecular-Analysis-and-Results--DNA
Theory of CGHComparative genomic hybridization (CGH) is a fairly new molecular cytogenetic technique that allows detection of DNA sequence copy number
DNA重组的定义
DNA复制是指DNA双链在细胞分裂以前的分裂间期S期进行的复制过程,复制的结果是一条双链变成两条一样的双链,每条双链都与原来的双链一样。这个过程通过边解旋边复制和半保留复制机制得以顺利完成。
DNA测序的规律
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸,每组寡核苷酸都有固定的起点,但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。 由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等,因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物,这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。 在可以区分长度仅
Southern-Blotting:-DNA-Transfer
Southern Blotting: DNA Transfer1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels), 7' (large gels)2. Denaturation: Wash
沉淀DNA的实验
乙醇沉淀法 实验方法原理 DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体
DNA-提取小技巧
很多人都有上面这样的想法吧?其实我当初也这样的,结果呢?怎么也提不好,一提提了好几个月呢。DNA 提取还真是说起来容易、做起来难。首先大家得明确一点,DNA 是遗传信息的载体,获得高分子量、高纯度的 DNA 是你开展后续测序、杂交等实验的前提。所以,注意了,要高分子量、高纯度哦。我相信肯定有很多人一
核酸染色实验——DNA
核酸是细胞内的一种大分子化合物,核酸不仅存在于细胞核内,也存在于细胞质中,动物、植物和微生物等都含有核酸。核酸可分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。经过染料和化学试剂,能够清楚地显示 DNA 和核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)物质。实验方法原理在一般情况下,通过盐酸水解后使 DNA 残基
质粒DNA电泳鉴定
1.目的学会常用的DNA琼脂糖凝胶电泳。2.原理DNA双螺旋分子骨架两侧带有含负电荷的磷酸根,在电场中会向正极方向移动。不同长度的DNA由于受到凝胶介质的阻力不同,表现为不同的迁移率而被分开。3.器材电泳仪,水平凝胶电泳槽和梳子及其制胶模块,250ml三角瓶,微波炉,台式离心机,旋涡混合器,凝胶成像
卫星DNA的用途
体细胞克隆卫星DNA可以把某一个体的遗传物质完整地传递下去,因而它对于保存并传播优良个体和珍稀濒危动物的基因组具有重大意义。确定异种重构胚的核是否来自于供体的核就显得异常关键。中国科学院昆明动物研究所丁波、张亚平等人建立了一种从早期囊胚中提取DNA以进行核内和核外DNA分析的方法。用这种方法从异种克
重组-DNA-技术简介
中文名称重组 DNA 技术英文名称recombinant DNA technique定 义在体外将两个或多个不同的DNA片段全部或部分构建成一个DNA分子的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
接头DNA的定义
接头DNA(adaptor DNA):一段短的含酶切位点并能与钝性末端或粘性末端匹配的人工合成DNA片段。
DNA合成的概念
中文名称DNA合成英文名称DNA synthesis定 义按照预定核苷酸的顺序,将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法,即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸,可自动化操作。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)